СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛ К АРБОВИРУСАМ КОМПЛЕКСА КАЛИФОРНИЙСКОГО ЭНЦЕФАЛИТА И БАТАИ Российский патент 1998 года по МПК A61K39/42 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для получения антител к арбовирусам, необходимых для производства диагностических препаратов и вакцин.

Известно, что для выработки антител обычно в организм животного вводят смесь соответствующего антигена и адъюванта. В качестве адъювантов используют адъювант Фрейнда или его аналоги, представляющие собой сложные масляные композици на основе природного сырья, в частности туберкулезных клеток. Данные адъюванты обладают рядом недостатков. Они довольно дороги, их высокая вязкость и несмешиваемость с водой крайне осложняют работу, особенно при низких температурах и с мелкими животными. Наличие в составе адъювантов молекул природного происхождения может привести к выработке посторонних антител.

В предлагаемом способе для упрощения получения антител к арбовирусам комплекса Калифорнийского энцефалита и Батаи в качестве иммуноадъюванта используют водный раствор сополимера 5-изопропенилтетразола и N-винилпирролидона с концентрацией 0,01 - 0,05 мг/мл.

Пример 1. Выбор оптимальной концентрации сополимера.

Выбор оптимальной концентрации раствора сополимера, используемого в качестве адъюванта, осуществлен на штамме вируса комплекса Калифорнийского энцефалита N 620. Имунные асцитные жидкости (ИАЖ) получали по обычной методике. Иммунизацию осуществляли на самках белых беспородных мышей весом 20 - 22 г. Цикл иммунизации состоял из 5-и инъекций 10%-ой вирусосодержащей мозговой суспензии в смеси с масляно-бактериальным адъювантом, состоящим из 9-и частей вазелинового, масла. 1-й части безводного ланолина и 0,5 мг/мл лиофилизированной вакцины БЦЖ. Мозговую суспензию соединяли с адъювантом в равных объемах и тщательно пипетировали до образования стойкой нерасслаивающейся смеси. Каждому животному вводили внутрибрюшинно 0,2 мл такой смеси. Иммунизации проводили с интервалом в 7 дн. По окончании цикла иммунизации мышам вводили внутрибрюшинно клетки асцитной саркомы 180/TG. По мере развития опухоли производили забор иммунной асцитной жидкости (примерно через 7 - 10 дн). Титр антител определяли с помощью реакции связывания комплемента. В каждом опыте использовали 30 животных. Эксперименты с раствором сополимера проводили по аналогичной методике, заменяя масляный адъювант равным объемом раствора сополимера. Результаты, представленные в табл.1, свидетельствуют о том, что оптимальной является концентрация 0,03 мг/мл. Повышение или понижение содержания сополимера в растворе уменьшает титр антител.

Пример 2. Получение антител к арбовирусам комплекса Калифорнийского энцефалита и Батаи.

Предлагаемый способ получения антител был опробован на двух штаммах вируса комплекса Калифорнийского энцефалита (N 620 и 1796) и штамме вируса Батаи N 2513. Результаты, представленные в табл.2, свидетельствуют о том, что при использовании предлагаемого способа возможно получение иммунных асцитных жидкостей к данным вирусам с титрами антител, несколько превышающими титры в случае традиционного способа с применением масляного адъюванта.

Основными преимуществами нового способа являются: а) меньшая стоимость адъюванта: б) легкая смешиваемость его с водными суспензиями антигенов; в) низкая вязкость, позволяющая легко работать на холоду с тонкими иглами; г) отсутствие необходимости специальной стерилизации адъюванта при использовании для его приготовления стерильной воды; в) простота приготовления адъюванта из сухого сополимера.

Способ получения антител к арбовирусам комплекса Калифорнийского энцифалита и Батаи относится к области медицины и может быть использовано для получения антител к арбовирусам, необходимых для производства диагностических препаратов и вакцин. В способе для упрощения получения антител к арбовирусам комплекса Калифорнийского энцифалита и Батаи в качестве иммуноадъюванта используют водный раствор сополимера 5-изопропенилтетразола и N-винилпирролидона с концентрацией 0,01 - 0,05 мг/мл. Основными преимуществами способа являются: а) меньшая стоимость адъюванта; б) легкая смешиваемость его с водными суспензиями антигенов; в) низкая вязкость, позволяющая легко работать на ходу с тонкими иглами; г) отсутствие необходимости специальной стерилизации одъюванта при использовании для его приготовления стерильной воды; д) простота приготовления адъюванта из сухого сополимера. 2 табл.

Способ получения антител к арбовирусам комплекса Калифорнийского энцефалита и Батаи путем введения в организм животных смеси соответствующего антигена и адъюванта, отличающийся тем, что в качестве адъюванта используют водный раствор сополимера 5-изопропенилтетразола с N-винилпирролидоном с концентрацией 0,01 - 0,05 мг/мл.