СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НЕБЛАГОПРИЯТНОГО ТЕЧЕНИЯ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ МИКРОБНОЙ ЭТИОЛОГИИ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/543 G01N33/558 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам прогнозирования течения гнойно-воспалительных заболеваний (ГВЗ), этиологическим агентом которых являются грамположительные и грамотрицательные факультативно-анаэробные бактерии - стафилококки и кишечная палочка. В частности, способ предназначен для прогнозирования затяжного течения постинъекционных абсцессов мягких тканей стафилококковой этиологии и вероятности возникновения послеоперационных инфекционно-воспалительных осложнений (ПОИВО) при холецистите, основным возбудителем которого является кишечная палочка. Необходимость проведения прогнозирования возникает при планировании тактики консервативного и хирургического лечения названных заболеваний, а также при обосновании мероприятий по предупреждению их подобного неблагоприятного течения. Таким образом, способ предназначен для использования в бактериологических лабораториях хирургических стационаров, решающих вопросы эффективного лечения больных с ГВЗ микробной этиологии.

Первые попытки прогнозирования характера течения хирургических заболеваний микробной этиологии были связаны с использованием в качестве прогностических критериев физикальных клинических признаков: тяжести состояния больного при поступлении в стационар, масштабов поражения мягких тканей при постинъекционных абсцессах, наличия симптомов обтурации желчных ходов и признаков холангита при холецистите ("Клиническая хирургия": Справочное руководство /Анзимиров В. Л. , Баженова А.П., Бухарин В.А. и др.: Под ред. Панцирева Ю. М. - М.: Медицина, 1988. - С. 37-59, 313-319) и т.п. Подобное эмпирическое прогнозирование практически ежедневно так или иначе осуществляется каждым хирургом, сталкивающимся с названными нозологическими формами. Однако точность прогнозирования в этом случае была и остается невысокой ввиду наличия как субъективных причин - различий в оценке клинических признаков отдельными хирургами, так и объективных факторов прогнозирование основано на оценке параметров, хотя и связанных с особенностями течения ГВЗ микробной этиологии, но далеких от патогенетических механизмов формирования неблагоприятного течения последних.

В этой связи дальнейшие попытки совершенствования методов прогнозирования были связаны с изучением патогенетических факторов, контролирующих течение воспалительного процесса. В первую очередь внимание исследователей привлекли факторы естественной противоинфекционной резистентности (ФЕР) макроорганизма (лизоцим, комплемент, бета-лизины), снижение уровня которых стало рассматриваться как одно из условий неблагоприятного течения заболеваний микробной этиологии [Зак В.И., Исайчев Б.А., Абрамзон О.М., Тукманбетов Д.Г. Факторы естественной резистентности в хирургической клинике//Факторы естественного иммунитета. - Оренбург, 1983. - С. 48-52], однако длительный опыт использования параметров естественной резистентности позволил сформировать суждение о вторичном, зависимом снижении их уровня, определяемом качественными характеристиками возбудителя. Среди подобных механизмов бактерий преимущественно отдается их способности к инактивации ФЕР (с этих позиций уже упоминавшееся выше снижение уровня ФЕР может рассматриваться не как первичное, а как следствие реализации указанных свойств возбудителя). Названные признаки бактерий характеризуются в качестве одних из ведущих патогенетических звеньев воспалительного процесса, определяющих его неблагоприятное течение.

Последнее обстоятельство позволило нам признать наиболее близким по совокупности признаков к предлагаемому способу способ прогнозирования течения ГВЗ микробной этиологии, основанный на изучении у возбудителя антилизоцимной активности - способности к инактивации одного из ФЕР - лизоцима [1 и 2].

При осуществлении данного способа из патологического материала выделяют чистые культуры микроорганизмов и идентифицируют их до вида (Staphylococcus aureus, Escherichia coli и др.). На завершающем этапе изучаемые культуры в течение 18-24 ч выращивают на плотной питательной среде, содержащей лизоцим в конечной концентрации 1 - 10 мкг/мл, инактивируют в парах хлороформа, после чего на первый слой среды с колониями испытуемых штаммов наслаивают второй слой плотной питательной среды, содержащей живую высокочувствительную к лизоциму культуру Micrococcus luteus CCM 2665. Оценку наличия антилизоцимной активности проводят после повторной 18-24 часовой инкубации при 37^oC по наличию зон роста M.luteus вокруг колоний изучаемых микроорганизмов, где произошла инактивация внесенного в среду лизоцима. Обнаружение у выделенных культур стафилококков антилизоцимной активности более 5 мкг и кишечной палочки - более 6 мкг является критерием для прогнозирования неблагоприятного течения ГВЗ: развития осложнений и затяжного течения хирургической инфекции.

Основной причиной, препятствующей получению требуемого технического результата, является невысокая информативность антилизоцимного признака, определяемая тем фактом, что лизоцим не обладает выраженным бактерицидным потенциалом в отношении как грамположительной, так и грамотрацительной микрофлоры и тем самым не является ведущим фактором элиминации возбудителя. Соответственно низкая информативность антилизоцимного признака ведет и к значительной ошибке прогнозирования (до 25-35%).

Обобщенная характеристика выявленных способов-аналогов и прототипа с указанием признаков, совпадающих с таковыми у предлагаемого способа, а также причин, препятствующих получению требуемого технического результата, представлена в табл. 1.

Предлагаемый способ не известен из уровня техники, т.е. является новым.

Основной задачей, на решение которой направлено изобретение, является повышение точности прогнозирования неблагоприятного течения ГВЗ микробной этиологии путем определения способности возбудителя к инактивации ФЕР, в данном случае - свойства инактивировать активность системы комплемента, одной из наиболее важных противоинфекционных систем макроорганизма.

Получаемый в результате выполнения предлагаемого способа технический результат проявляется в повышении точности прогнозирования неблагоприятного течения хирургической инфекции, что позволяет планировать и реализовывать целенаправленные превентивные лечебные мероприятия и в конечном счете сказывается на качестве проводимого лечения.

Сравнительная характеристика действий, порядка их выполнения и условий осуществления в предлагаемом способе и способе-прототипе представлена в табл. 2. Как видно из представленных данных, оба способа на первом этапе их выполнения предполагают получение чистой культуры микроорганизма - возбудителя воспалительного процесса. На втором этапе, основном для каждого из сравниваемых способов, выделенные микроорганизмы изучаются на предмет способности к инактивации ФЕР. Основное существенное отличие предлагаемого способа от способа-прототипа заключается в том, способность к инактивации какого из ФЕР определяется при проведении прогнозирования. Так, если в способе-прототипе определяется антилизоцимная активность (лизоцим не является ведущим инструментом элиминации возбудителя), то при реализации способа предполагается определение антикомплементарной активности бактерий-возбудителей (система комплемента - ключевая эффекторная бактерицидная система, осуществляющая бактериальный киллинг и опсонизацию, играющая важную роль в выработке специфических иммунных реакций макроорганизма [Браун Э.Дж., Джойнер К.А., Фрэнк М.М. Комплемент // в кн.: Иммунология: в 3-х т. Т.З. Пер. с англ./ Под ред. У. Пола. - М.: Мир, 1987-1989. - С. 89-118.]). Вторым отличием, касающимся технических особенностей оценки способности микроорганизмов инактивировать ФЕР, является то, что определение антилизоцимной активности бактерий в способе-прототипе ведется по протективному действию исследуемой культуры на рост индикаторного штамма M.luteus CCM2665 в присутствии лизоцима, в то время как определение антикомплементарной активности в предлагаемом способе ведется по подавлению комплементзависимого иммунного гемолиза в геле в присутствии супернатантов исследуемых бактериальных культур. Одним словом, предлагаемый способ базируется на иных (иммунологических), нежели прототип (бактериологических) принципах оценки определяемых параметров. Указанное отличие определяет ряд других технических особенностей способа: ускорение проведения исследования и возможность оценки результата с использованием специальной регистрирующей аппаратуры, что повышает объективность всего проводимого исследования.

Завершающим этапом осуществления способа является учет результатов определения соответствующих свойств исследуемых бактерий и прогностическая интерпретация полученного результата. Так, в способе-прототипе проводится учет роста индикаторной культуры вокруг колоний исследуемых бактерий при различных (возрастающих от 1 до 10 мкг/мл) концентрациях лизоцима; при этом по последнему его разведению, на котором еще отмечается рост микрококка вокруг колоний, определяется уровень антилизоцимной активности, выражаемый в микрограммах (мкг) инактивированного лизоцима. Обнаружение у стафилококков, изолированных при ГВЗ мягких тканей, и кишечных палочек, выделенных из желчи от больных холециститом, антилизоцимной активности 5-6 мкг и выше служит критерием для прогнозирования неблагоприятного течения хирургической инфекции. Однако низкая информативность признака антилизоцимной активности определяет достаточно высокий уровень ошибки прогнозирования (до ±25-35% случаев).

При осуществлении способа верификация способности к инактивации комплемента оценивается по оптическим свойствам зон гемолиза, получаемых на пластинах с комплементчувствительным слоем агара и сканируемых после проявления с помощью денситометра ДМ-1 с вертикальным ходом луча. При этом используются уравнения:
1) Y = 0,27•Ln(X) + 1,02, где Y - степень гемолиза; X - степень падения поглощения в зоне гемолиза (степень просветления СЭБ-содержащего агара; зависимость определена экспериментально (r=0.988; P<0.01);
2) CH₅₀= 100•[Y/(1-Y)] ^0,27, где CH₅₀ активность комплемента в соответствующей зоне гемолиза; 100 - фактор пересчета активности на 1 мл сыворотки - источника комплемента; Y - степень гемолиза (см. уравнение 1); 0,27 - коэффициент 1/n из уравнения Крога [Кэбот Е., М. Мейер. Экспериментальная иммунохимия. - М. : Мир. - 1968. - С. 140-246], зависящий от концентрации СЭБ.

Величина антикомплементарной активности конкретной пробы супернатанта определялась из разности между активностями комплемента в контрольных (вместо супернатантов культур среда культивирования) и опытных зонах гемолиза (см. чертеж, где X1 - падение поглощения, соответствующее зоне со 100% гемолизом; X2 - падение поглощения, соответствующее зоне гемолиза в опыте (супернатант культуры бактерии); X3 - падение поглощения, соответствующее зоне гемолиза в контроле; отношения X2 и X3 к X1 равны степеням падения поглощения в опытной и контрольной зонах гемолиза).

Прогностическая интерпретация результата проводится по проявлению возбудителем высокого уровня антикомплементарной активности. При этом частные случаи касаются прогнозирования неблагоприятного течения хирургической инфекции при постинъекционных абсцессах, вызываемых золотистыми стафилококками, и холецистите, основным возбудителем которого является кишечная палочка. Так прогнозирование неблагоприятного - затяжного течения постинъекционных абсцессов осуществляется при уровне антикомплементарной активности возбудителя - золотистого стафилококка - 12 анти-CH₅₀ и выше. Прогнозирование неблагоприятного течения холецистита - высокой вероятности возникновения послеоперационных инфекционно-воспалительных осложнений осуществляется по уровню антикомплементарного признака кишечной палочки - возбудителя; при этом высокая вероятность возникновения ПОИВО (>50%) предполагается при уровне признака ≥9 анти-CH₅₀. Погрешность прогнозирования для названных случаев не превышает ±10-15%, что существенно ниже аналогичного показателя способа-прототипа. В целом использование предлагаемого способа позволяет повысить точность прогнозирования в 2 раза.

Таким образом, сущностью изобретения, сформулированной на уровне функционального обобщения и лежащей в его основе, является следующее: микроорганизмы - возбудители ГВЗ (Escherichia coli, Staphylococcus aureus), выделяемые в случае неблагоприятного течения заболевания (ПОИВО, затяжное течение), отличаются высокими уровнями антикомплементарной активности; определение данного признака позволяет дифференцировать их от микроорганизмов - возбудителей неосложненных (незатяжных) ГВЗ и прогнозировать неблагоприятное течение процесса. С этих позиций способ не следует из уровня техники, что позволяет оценить его как соответствующий критерию "изобретательский уровень".

Возможность получения технического результата в определенных интервалах значений признака определяется следующим комплексом причинно-следственных связей (табл. 3).

Приведенные в табл. 3 результаты сопоставления выраженности антикомплементарной активности в группах микроорганизмов, изолированных от лиц с различным типом течения воспалительного процесса, свидетельствуют о высоком уровне данного признака в группах штаммов, выделенных при неблагоприятном течении заболевания.

В частности, от больных с постинъекционными абсцессами и неблагоприятным (затяжным) характером течения воспалительного процесса штаммы золотистого стафилококка с антикомплементарной активностью 12 и более анти-CH₅₀ выделялись в 85,7±9,3% случаев, т.е. в 8,6 раз чаще, чем при постинъекционных абсцессах с благоприятным течением (соответственно в 10,0±5,5% случаев). Полученные различия определяют возможность получения положительного эффекта - правильного результата прогнозирования неблагоприятного течения воспалительного процесса с вероятностью ошибки не более ±11,4% в интервале значений антикомплементарной активности у возбудителя 12 анти-CH₅₀ и выше. Понижение уровня прогностического порога антикомплементарной активности ниже указанной величины нецелесообразно, т.к. при этом ошибка прогнозирования возрастает до ±22,7% при использовании в качестве пороговой величины значений ≥9 анти-CH₅₀ и до ±43,2% при использовании порога ≥6 анти-CH₅₀. С другой стороны, повышение уровня прогностического порога антикомплементарной активности до 15 анти-CH₅₀ и выше также ведет к увеличению ошибки прогнозирования до ±25,0% (табл. 3).

Таким образом, из невозможности получения результата в других интервалах значений антикомплементарной активности обоснованный порог данного признака возбудителя, позволяющий прогнозировать неблагоприятное течение инициируемого им воспалительного процесса, должен быть установлен на уровне 12 анти-CH₅₀ и выше. Применительно к случаям постинъекционных абсцессов, вызванных золотистыми стафилококками, обнаружение у возбудителя антикомплементарной активности 12 анти-CH₅₀ и выше позволяет прогнозировать неблагоприятное, т.е. затяжное течение воспалительного процесса.

Аналогичным образом определенный интервал значений признака антикомплементарной активности Escherichia coli (табл. 3), при которых с точностью не менее ±15,6% прогнозируется неблагоприятное течение холецистита (развитие ПОИВО) составил 9 анти-CH₅₀ и более.

Для проведения прогнозирования течения ГВЗ микробной этиологии из патологического материала (желчь, гной) одним из общепринятых методов выделяют чистую культуру возбудителя, которую идентифицируют до вида (Escherichia coli, Staphylococcus aureus).

В дальнейшем последовательность выполнения действий при осуществлении предлагаемого способа, их условия и режимы являются следующими.

1) Бактерии выращиваются в 2-3 мл жидкой питательной среды при 37^oC в течение 24 ч.

2) Выращенные культуры подвергаются центрифугированию (3000 об/мин., 15 мин), супернатанты культур отделяются.

3) На стандартном веронал-мединаловом буфере (pH 7,3-7,4) готовят 2%-ный агар, который при 48-50^oC смешивают с равным объемом суспензии оптимально сенсибилизированных эритроцитов барана, содержащей 5•10⁸ клеток в 1 мл. На горизонтальном подогреваемом столике располагают стеклянные пластины, на поверхность которых наносят агаризованную суспензию СЭБ из расчета 0,1 мл на 1 см² площади. Таким образом получают гель толщиной 1 мм, содержащий 2,5•10⁸ СЭБ/мл и 1% агара. Пластины подсушивают при комнатной температуре (10 мин), охлаждают в рефрижераторе (4^oC) и хранят на холоду не более 3 суток.

4) На поверхность охлажденного комплементчувствительного слоя по шаблону наносят стандартные (10 мкл) капли супернатантов бактериальных культур; пластины в открытом виде инкубируют при 4^oC для впитывания супернатантов (10-15 мин). В те же точки агара, по тому же шаблону наносят стандартные (10 мкл) капли сыворотки - источника комплемента.

5) Пластины инкубируют во влажной камере при 4^oC в течение 18-24 ч для диффузии комплемента и реализации антикомплементарных свойств внеклеточными продуктами испытуемых бактерий.

6) Зоны гемолиза проявляют инкубацией пластин при 37^oC в течение 60 мин. Проявление останавливают, погружая пластины в холодный (8-10^oC) веронал-мединаловый буфер.

7) Измерение поглощения в зонах гемолиза производят с помощью денситометрической аппаратуры с вертикальным ходом луча при λ ≥ 600 нм (что исключает погрешность измерения, связанную с поглощением гемоглобина). При этом пластину переносят на предметный столик прибора. Ряды зон гемолиза выравнивают параллельно направлению движения предметного столика. Величина темнового тока устанавливают согласно инструкции к прибору. Установку конца шкалы (100% пропускания) производят по зоне 100%-ного гемолиза, получаемой нанесением на агар небольшого количества кристаллического сапонина. Запись денситограммы производят в режиме "распределение". Денситограмма представляет собой кривую, состоящую из чередующихся участков, соответствующих поглощению негемолизированного агара (фон) и уровням поглощения отдельных зон гемолиза (оптические "ямы").

8) Для вычисления активности комплемента в соответствующей зоне гемолиза производят
а) измерение степени падения поглощения в ней (отношение глубины оптической "ямы" к фоновому уровню поглощения);
б) по уравнению Y=0,27•LnX+1,02, где X - степень падения поглощения, рассчитывают степень гемолиза в соответствующей зоне гемолиза;
в) по уравнению CH₅₀=100•(Y/1-Y)^0,27, где Y - степень гемолиза, оценивают активность комплемента в соответствующей зоне гемолиза, выраженную в CH₅₀/мл.

9) Разности между активностями в контрольных (вместо супернатанта культуры - среда выращивания) и опытных зонах гемолиза отражают искомый уровень антикомплементарной активности супернатанта, выраженный в антигемолитических единицах (анти-CH₅₀).

Пример 1. У больной П. с диагнозом "постинъекционный абсцесс левой ягодичной области" на второй день заболевания при его вскрытии была отобрана проба гнойного отделяемого, которая в разведениях от 10^-2 до 10^-5 была засеяна на поверхность желточно-солевого агара, где после 24-часовой инкубации при 37^oC сформировались колонии микроорганизмов, дающих положительную лецитовителлазную реакцию, при этом их количество было оценено как 2•10⁵ КОЕ в 1 мл гнойного отделяемого. Одна из типичных колоний была выделена в чистой культуре и по совокупности морфологических (кокки, расположенные гроздьями), тинкториальных (положительные при окраске по Граму), биохимических (ферментирующие глюкозу и маннит в анаэробных условиях) и биологических (продукция плазмокоагуллазы и ДНК-азы) свойств идентифицирована как золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus). На данном этапе исследования возможна характеристика этиологии заболевания, однако прогноз его течения не определен. Изучение у выделенной культуры золотистого стафилококка антилизоцимной активности показало отсутствие данного признака, что по способу-прототипу позволяет прогнозировать благоприятное течение воспалительного процесса. С целью уточнения прогноза течения заболевания у выделенной культуры была определена антикомплементарная активность. Для этого бактерии были выращены в 3 мл мясо-пептонного бульона (37^oC, 24 ч); супернатант культуры в дозе 10 мкл был нанесен на поверхность охлажденного (4^oC) комплементчувствительного слоя агара (2,5•10⁸ СЭБ/мл, толщина 1 мм); после впитывания супернатанта поверх него на агар было нанесено 10 мкл сыворотки - источника комплемента; пластина в агаром инкубировалась при 4^oC 24 ч, зоны гемолиза проявлялись в термостате при 37^oC в течение часа, проявление останавливали погружением пластины в холодный веронал-мединаловый буфер на 10 минут; пластина сканировалась на денситометре ДМ-1 со светофильтром N 4 (600-640 нм); анализ денситограммы показал что степень падения поглощения, степень гемолиза и активность комплемента в опытной зоне гемолиза (с супернатантом) составили соответственно 0,20, 58,55%, 109,8 CH₅₀, в то время как для контрольной зоны гемолиза (со средой выращивания вместо супернатанта) аналогичные показатели были равны 0,29, 68,47%, 123,3 CH₅₀. Разность между активностью комплемента в контроле и опыте составила 13,5 CH₅₀, определив уровень антикомплементарной активности выделенного штамма. Таким образом, определение у возбудителя постинъекционного абсцесса - золотистого стафилококка - антикомплементарной активности 13,5 анти-CH₅₀ (т.е. больше 12 анти-CH₅₀) в соответствии с формулой изобретения позволяет в данном случае прогнозировать неблагоприятное (затяжное) течение воспалительного процесса.

Дальнейшее течение заболевания подтвердило правильность прогностического заключения, сделанного с использованием предлагаемого способа. Послеоперационное течение постинъекционного абсцесса у больной П. характеризовалось длительным сохранением гнойного отделяемого (12 суток) и воспалительного инфильтрата (21 сутки); возбудитель перестал высеваться из раны только на 14 сутки, а лейкоцитоз сохранялся до момента выписки пациента из стационара (на 24 сутки).

Пример 2. У больного Г., 73 лет, с диагнозом "острый калькулезный холецистит" в ходе холецистэктомии при пункции желчного пузыря эвакуировано около 80 мл мутной желчи с примесью гноя. При бактериологическом исследовании пузырной желчи с использованием стандартного набора бактериологических сред и биохимических тестов в монокультуре выделена кишечная палочка (Escherichia coli), проявляющая типичные для данного вида морфологические, тинкториальные и биохимические свойства. Массивность обсеменения желчи при посеве различных разведений исследуемого материала на среду Эндо определена на уровне 5•10⁵ КОЕ/мл, что позволяет сделать вывод об этиологии воспалительного процесса.

Определение у выделенной культуры кишечной палочки антилизоцимной активности выявило данный признак на уровне 4 мкг, что по способу-прототипу не позволяет прогнозировать послеоперационные инфекционно-воспалительные осложнения у данного больного. С целью уточнения прогноза заболевания у выделенной культуры была определена антикомплементарная активность, для чего были произведены действия, аналогичные описанным в предыдущем примере. В результате антикомплементарная активность выделенного штамма кишечной палочки была выявлена на уровне 11,2 анти-CH₅₀, что согласно предлагаемому способу выше установленного порога (9 анти-CH₅₀) и в соответствии с формулой изобретения позволяет прогнозировать с высокой вероятностью развитие инфекционно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде.

Течение послеоперационного периода подтвердило правильность прогноза, полученного с помощью предлагаемого способа. Так, несмотря на антибактериальную терапию гентамицином и ампиоксом у больного длительное время сохранялась субфебрильная температура с тахикардией, а на шестые сутки произошло нагноение операционной раны; лейкоцитоз сохранялся до 14 суток; наружный желчный свищ закрылся на 20 сутки; послеоперационная рана зажила вторичным натяжением; высев возбудителя из раны прекратился лишь на 8 сутки после операции; больной выписан на 26 сутки после холецистэктомии.

Пример 3. В одном из хирургических стационаров г. Оренбурга в период с 1993-1994 гг. на лечении находилось 45 больных с первичным диагнозом "острый холецистит", у которых при бактериологическом исследовании пузырной желчи, полученной в стерильных условиях интраоперационно, был выделен возбудитель - кишечная палочка, и 44 больных с диагнозом "постинъекционный абсцесс", этиологическим агентом возникновения которого явился золотистый стафилококк.

Прогнозирование течения заболевания у данных больных велось как с использованием способа-прототипа, так и предлагаемого способа (см. примеры 1 и 2). Проверка точности прогнозирования осуществлялась ретроспективно при последующем клинико-лабораторном обследовании пациентов вплоть до момента выписки.

Сравнительный анализ прогностической точности заявляемого способа и способа-прототипа представлен в табл. 4.

Как видно из представленных данных, использование способа-прототипа определило значительную ошибку прогнозирования: 22,7-33,3%. При этом в 2 случаях при холецистите и 6 случаях при постинъекционном абсцессе ошибка была связана с "просмотром" неблагоприятного прогноза, а в 13 случаях при холецистите и 4 случаях при постинъекционном абсцессе - с "завышенными" прогностическими оценками (при ожидаемом развитии ПОИВО и затяжного течения у этих больных наблюдалось благоприятное течение заболевания. Использование предлагаемого способа позволило в 1,99-2,14 раза снизить ошибку прогнозирования, доведя ее до 11,4-15,6%. При этом было зарегистрировано 7 случаев "просмотра" неблагоприятного прогноза и 5 случаев с "завышенной" прогностической оценкой.

Таким образом, положительный результат, полученный при использовании изобретения, выступает в виде повышения точности прогнозирования неблагоприятного течения ГВЗ микробной этиологии. В дальнейшем при получении неблагоприятного прогноза включение в схему лечения превентивных мероприятий позволяет предупредить развитие ПОИВО и затяжное течение ГВЗ. Следовательно, конечным результатом использования предлагаемого способа является повышение качества лечения хирургических больных с ГВЗ микробной этиологии и сокращение сроков их пребывания в стационаре.

Использование: в медицинской микробиологии для прогнозирования неблагоприятного течения гнойно-воспалительного заболевания, вызванного культурами Staphylococcus aureus или Escherihia coli. Сущность изобретения: из пробы потологического материала выделяют чистую культуру возбудителя, которую затем идентифицируют и определяют ее способность к инактивации факторов естественной противоинфекционной резистивности, а именно определяют активность комплемента по 50%-ному гемолизу на агаровых пластинах в супернатанте культуральной жидкости возбудителя и в незасеянной питательной среде рассчитывают активность комплемента в зоне гемолиза каждой пробы по формуле
Y = 0,27 • Ln(X) + 1,02, CH₅₀ = 100 • [Y/(1 - Y)]^0,27,
где X - степень падения поглощения в зоне гемолиза, измеренная с помощью денситометра с вертикальным ходом луча; Y - степень гемолиза, CH₅₀ - активность комплемента, выраженная в гемолитических единицах, затем вычисляют уровень антикомплементарной активности (анти-CH₅₀) как разность между активностями комплемента в незасеянной питательной среде и в супернатанте культуральной жидкости возбудителя и при значениях уровня антикомплементарной активности для Escherihia coli 9-анти-CH₅₀ и выше или для Staphylococcus aureus 12 анти-CH₅₀ и выше прогнозируют неблагоприятное течение гнойно-воспалительного заболевания, вызванного выделенным возбудителем. Способ прост, точен, информативен. 4 табл., 1 ил.

Способ прогнозирования неблагоприятного течения гнойно-воспалительного заболевания, вызванного культурами Staphylococcus aureus или Escherihia coli, включающий забор пробы патологического материала, выделение чистой культуры, ее идентификацию и определение ее способности к инактивации факторов естественной противоинфекционной резистентности, отличающийся тем, что определяют активность комплемента по 50%-ному гемолизу на агаровых пластинах в супернатанте культуральной жидкости возбудителя и незасеянной питательной среде, рассчитывают активность комплемента в зоне гемолиза каждой пробы по формулам
Y = 0,27 • Ln(X) + 1,02;
СН_5 0 = 100 • [Y/(1 - Y]^{0 , 2 7},
где Х - степень падения поглощения в зоне гемолиза, измеренная с помощью денситометра с вертикальным ходом луча;
Y - степень гемолиза;
СН_5 0 - активность комплемента, выраженная в гемолитических единицах,
затем вычисляют уровень антикомплементарной активности (анти-СН_5 0) как разность между активностями комплемента в незасеянной питательной среде и супернатанте культуральной жидкости возбудителя и при значениях уровня антикомплементарной активности для Escherihia coli 9 анти-СН_5 0 и выше или для Staphylococcus aureus 12 анти-СН_5 0 и выше прогнозируют неблагоприятное течение гнойно-воспалительного заболевания, вызванного выделенным возбудителем.