ПРОИЗВОДНЫЕ ДИХЛОРИДА ЦИС-ДИАММИНДИИМИДАЗОЛИЛ ПЛАТИНЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ АНТИПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1998 года по МПК C07F15/00 A61K31/295 

Изобретение относится к биологически активным веществам, обладающим антипролиферативной и цитостатической активностью, и способу их получения, и может быть использовано в фармацевтической, химической промышленности и в медицине.

Известны фармацевтические препараты с противораковой активностью на основе платиновых комплексов, аминов [1].

Однако известные препараты получают из малодоступных двухосновных органических кислот.

Известны комплексы платины триаминового типа общей формулы (2⁺[Pt/NH₃)₂L-CL]) Ct, где L-цитозин, цитизин, изоцитозин, теобромин, теофилин и др. , обладающие противоопухолевым действием по отношению к солидным опухолям и лейкозам [2].

Однако синтез известных биологически активных веществ требует редкодоступных и дорогих исходных компонентов.

Наиболее близким по технической сущности является биологически активное соединение - цис-дихлордиаминоплатина, обладающая антибластической и цитостатической активностью [3].

Однако цис-дихлордиаминоплатина имеет довольно высокую токсичность и недостаточный цитостатический эффект на лейкозные клетки.

Задачей изобретения является синтез новых малотоксичных биологически активных веществ с более высокой антипролиферативной активностью.

Получение технического результата достигается синтезом производных дихлорид цис-диамминдиимидазолил платины общей формулы (I)

где
R - водород (1a) или OH-группа (1b), проявляющие антипролиферативную активность.

Способ получения вещества 1a заключается в том, что дихлорид цис-имидазолил платины обрабатывают 25%-ным водным раствором аммиака, нагревают, интенсивно перемешивают до полного растворения дихлорида цис-диимидазолил платины, охлаждают, выпавшие кристаллы отфильтровывают.

Пример 1. Цис-[Pt(NH₃)Im₂]Cl₂ (1a).

0,2 г цис-диимидазолил платины растворяют в 10 мл водного раствора 25%-ного аммиака, нагревают, перемешивают на магнитной мешалке до полного растворения исходного вещества. После полного растворения дихлорида цис-диимидазолил платины, раствор охлаждают, выпавшие кристаллы отфильтровывают.

Цис-[Pt(NH₃)₂Im₂]Cl₂ (1a) представляет собой белые кристаллы, устойчивые на воздухе, сохраняющиеся без изменения в течение длительного времени.

Данные элементного анализа.

Найдено, %: N- 19,7; C - 16,4; H - 3,4; вычислено, %: N - 19,26; C - 16,51; H - 3,21.

Элементный анализ соответствует приведенной формуле. В ИК-спектрах (образец в KBr таблетке) в области 3350-2800 см^-1 имеется широкая слаборазреженная интенсивная полоса, соответствующая N-H валентным колебаниям. В области 1600-2800 см^-1 полоса деформационных колебаний NH₃. Положение полос говорит о координации молекул имидазола и аммиака к платине.

Для доказательства структуры проведены исследования методом протонного магнитного резонанса. В спектрах ПМР цис-[Pt(NH₃)Im₂] Cl₂ в DMCO (стандарт ГМДС) имеются одинаковые сигналы C-H протонов имидазольного кольца при 8,6 и 3 м.д.

Температура начала плавления 210^oC. Полное разложение наступает при температуре 280^oC. Растворимость в воде при 20^oC 0,032 г/мл или 32 г/л.

Цис-[PtNH₂(OH)₂Im₂] Cl₂ получают путем взаимодействия цис-платинадиимидазолдихлорида с водным раствором аммиака, только дополнительно проводят нейтрализацию эквивалентным количеством KOH.

Пример 2. 1 моль цис-[PtIm₂Cl₂] смешивают с 2,1 ммоль NH₂OH, добавляют 0,1 M водный раствор KOH, перемешивают при нагревании на магнитной мешалке до полного растворения комплекса, затем фильтруют, упаривают, получают светло-серый продукт, его отфильтровывают и промывают небольшим количеством воды и спирта.

ИК-спректрах (в KBr таблетке) в области колебаний N-H и O-H связей (3500-2800 см^-1) наблюдается очень интенсивная полоса, которая свидетельствует о наличии координации связи Pt-N. Размытый характер полосы говорит о наложении колебаний N-H и O-H. В области 320 см^-1 в полученном [PtIm₂(NH₂(OH)₂] Cl₂ отсутствует полоса, соответствующая колебаниям Pt-Cl, которая имеется в исходном продукте цис-[PtIm₂Cl₂]. В области 620 см^-1 имеется полоса, соответствующая колебаниям Pt-N.

Сравнительные исследования острой токсичности заявляемых веществ (1a и 1b) и дихлордиаминоплатины (ДДП) проведены на 20 мышах линии BaLB/C при внутрибрюшинном введении препарата в физиологическом растворе в интервале доз от 45 мг/кг до 450 мг/кг при наблюдении за животными в течение 30 дней.

Величина LD₅₀ определена по методу Литчфилда и Уилкоксона и составляет для 1-318,2 (335,9 - 251,4) мг/кг, максимально переносимая доза (МПД) - 222,2 мг/кг. У ДДП LD₅₀ составляет 14 мг/кг. Следовательно, по величине среднесмертельной дозы острая токсичность заявляемого вещества 1 более чем в 20 раз меньше, чем у прототипа.

Исследование антипролиферативной активности проводили на суспензионной культуре лейкозных клеток К-562 и НИТ-102 через 24-48 ч инкубации. Эффективность оценивалась по количеству импульсов в минуту по включению ЗН-тимидина или ЗН-уридина (0,1-1 мКп). Радиоактивность определена на сцинтиляционном счетчике MarK(см.табл. 1-5).

Из таблицы видно, что статистически достоверное увеличение (P<0,001) продолжительности жизни у подопытных животных после введения вируса лейкоза Раушера в дозе, вызывающей стопроцентный летальный эффект (LD₁₀₀), наблюдается лишь в группе животных, получивших инъекцию заявляемого средства, что подтверждает его вирусоингибирующее действие.

Из таблицы видно, что заявляемые средства вызывают двукратное увеличение продолжительности жизни мышей-опухоленосителей в сравнении с контрольными (нелеченными) животными (P< 0,001).

Как видно из представленных данных, заявляемые биологически активные вещества - производные дихлорида имидазолилплатины 1a и 1b) - по сравнению с известной цис-дихлордиамминоплатиной в 20 раз менее токсичны и в 1,5-3 раза превосходят по цитостатической активности на лейкозные клетки К-562 и НИТ-102 в широком спектре концентраций. Статистическая достоверность ингибирования пролиферации лейкозных клеток К-562 и НИТ-102 равна P<0,001.

Параллельное изучение жизнеспособности опухолевых клеток К-562 и НИТ-102 (подсчет по окраске трипановый синим) позволил установить в дозах 0,2-0,02 г/мл 100% цитотоксический эффект через 24-48 ч после внесения вещества в культуру клеток.

Изобретение относится к биологически активным веществам с антипролиферативной и цитостатической активностью и может быть использовано в фармацевтической, химической промышленности и в медицине. Сущность изобретения заключается в применении производных дихлорида цис-диамминдиимидазолил платины общей формулы, приведенной в описании, в качестве биологически активного вещества с антипролиферативной активностью. Способ получения биологически активных веществ заключается во взаимодействии дихлорида цис-диимидазол платины с 25%-ным водным раствором аммиака при нагревании и интенсивном перемешивании до полного растворения, с последующим охлаждением и выделением целевого продукта. 2 с.п.ф-лы, 5 табл.

1. Производные дихлорида цис-диаминдиимидазолил платины общей формулы I

где R - водород (Ia) или OH-группа (Ib),
проявляющие антипролиферативную активность. 2. Способ получения соединения (Ia) по п.1, отличающийся тем, что дихлорид цис-диимидазолил платины обрабатывают 25%-ным водным раствором аммиака, нагревают, интенсивно перемешивают до полного растворения дихлорида цис-диимидазолил платины, охлаждают и выпавшие кристаллы отфильтровывают.