ПРОТИВОЛЕЙКОЗНАЯ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/4164 A61K33/04 A61K33/38 A61K33/32 A61P31/04 A61P31/12 A61P35/00 

Предлагаемое техническое решение относится к области ветеринарии и медицины, а именно к веществам с цитостатической и бактерицидной активностью, и может быть использовано в целях фармацевтической промышленности.

Известна композиция для профилактики лейкоза крупного рогатого скота (КРС) на основе производных 5-нитроимидазола, включающий в качестве лекарственного средства метронидазол в сочетании с йодированной поваренной солью (Пат. RU №2212887, 2003 г.). Суточная норма метронидазола составляет 1,0 г/гол., йодированной поваренной соли - от 70 до 90 г/гол., при этом метронидазол и йодированную поваренную соль применяют per os (через желудочно-кишечный тракт) курсами один раз в сутки в течение 30 дней с интервалом в 6 месяцев.

Препарат дают животным вместе с кормом, однако он не пригоден для внутривенного введения, процесс лечения им весьма продолжителен и недостаточно эффективен. Известный препарат используют преимущественно как средство профилактики заболевания молодняка КРС.

Наиболее близким к заявляемому решению по назначению, совокупности существенных признаков и достигаемому эффекту является цитостатический и антивирусный препарат, который содержит (мас.%): гексаметилентетрамин, или имидазол, или антипирин - 0,007-0,70; азотнокислое серебро - 0,0085-0,85; тиосульфат натрия - 0,0284-2,84; вода или физиологический раствор - до 100% (Пат. RU 2094048, 1997 г.). Известная по патенту №2094048 композиция выбрана за прототип.

Известный препарат достаточно эффективен при лечении и профилактике лейкоза КРС. Недостатком прототипа является малый срок хранения: в растворенном виде он хранится не более двух месяцев. В смеси порошков этот состав не хранится, т.к. основные компоненты при смешивании вступают в реакцию и происходит качественное изменение свойств композиции. В настоящее время, в связи с наличием более эффективных средств, гексаметилентетрамин не имеет широкого применения, а антипирин является устаревшей лекарственной формой и снят с производства. Входящая в состав соль серебра обладает сравнительно высокой токсичностью.

Задачей изобретения является разработка более эффективной композиции на основе солей серебра, обладающей цитостатической и антибактериальной активностью, пониженной токсичностью и увеличенным сроком хранения.

Указанная задача решается тем, что согласно предложенному решению противолейкозная и антибактериальная композиция, содержащая соль серебра, тиосульфат натрия и воду или физиологический раствор в качестве основы, вместо низкоэффективного гексаметилентетрамина содержит в качестве действующего начала метронидазол (трихопол), а вместо азотнокислого серебра содержит низкотоксичную соль серебра - нитрат гексаметилентетрамин серебра при следующем соотношении компонентов, мас.%:

метронидазол 0,007-0,7нитрат гексаметилентетрамин серебра0,0085-0,85тиосульфат натрия 0,0284-2,84вода или физиологический раствор остальное до 100

Проведенные нами исследования показали, что при хранении порошков в виде смеси входящих в нее компонентов предложенная композиция полностью сохраняет свои свойства более 12 месяцев. Благодаря этому имеется возможность применения ее в различных лекарственных формах: в виде растворов для инъекций, порошков, мазей. При лечении лейкоза инъекции метронидазола более эффективны, чем применение per os, как в аналогах. С током крови он распределяется во многие ткани и биологические жидкости организма, в частности в костную ткань и эритроциты. При лечении лейкоза используется свойство метронидазола легко проникать в спинномозговую жидкость (до 43% от концентрации в плазме крови). Связывание с белками плазмы составляет менее 20%. До 50-60% метронидазола метаболизируется в печени путем гидроксилирования и связывания с глюкуроновой кислотой, причем основной метаболит (2-оксиметронидазол) также оказывает противопротозойное и противомикробное действие. Важно и то, что входящий в состав предложенной композиции нитрат гексаметилентетрамин серебра почти в 4 раза менее токсичен, чем азотнокислое серебро, используемое в прототипе.

Конкретные примеры.

При выполнении примеров использовался водный раствор композиции, включающий известные препараты: метронидазол, тиосульфат натрия и нитрат гексаметилентетрамин серебра со структурной формулой

при различных количественных сочетаниях компонентов.

Пример 1. К смеси 0,007 г метронидазола, 0,0085 г нитрата гексаметилентетрамин серебра, 0,0284 г тиосульфата натрия добавляют воду до 100 г. Получают прозрачный раствор, который исследуют на цитостатическую и антивирусную активность.

Пример 2. 0,07 г метронидазола смешивают с 0,284 тиосульфата натрия, добавляют 0,085 г нитрат гексаметилентетрамин серебра, растворенный в 99,561 г воды. Получают прозрачную жидкость, которую исследуют на цитостатическую и антибактериальную активность.

Пример 3. 0,85 г нитрат гексаметилентетрамин серебра смешивают с 0,7 г метронидазола, добавляют 2,84 г растворенного в воде тиосульфата натрия.

Токсичность состава увеличивается и достигает токсичности цитостатического препарата цисплатины.

Пример 4. 0,001 г нитрат гексаметилентетрамин серебра и 0,003 г метронидазола перемешивают, добавляют 0,0284 г тиосульфата натрия, растворенного в воде. Низкая токсичность при недостаточной бактерицидной активности.

Пример 5. 0,9 г нитрат гексаметилентетрамин серебра смешивают с 0,8 г метронидазола и добавляют 2,9 г тиосульфата натрия, растворенного в воде. В растворе заметен осадок, исчезающий при нагревании до 40°С.

Пример 6. 1,0 г нитрат гексаметилентетрамин серебра смешивают с 0,07 г метронидазола, добавляют 1,1 г тиосульфата натрия, растворенного в воде. Композицию исследуют на цитостатическую и антибактериальную активность.

Экспериментальные материалы, подтверждающие существенность заявленных признаков, приведены в таблицах.

Исследования острой токсичности оптимального состава композиции по примеру 2 проведены на 75 мышах линии BALB/c при внутрибрюшинном введении состава в водном растворе в интервале от 20 мг/кг до 100 мг/кг (табл.1). Наблюдение за животными осуществлялось в течение 30 дней. Для сравнения выбраны известные препараты: азотнокислое серебро и цисплатина. Токсичность заявляемой композиции заметно ниже, чем токсичность известных препаратов. Так, при дозировке до 60-70 мг/кг живого веса токсичность не обнаружена, при дозе 80 мг/кг в сравнении с азотнокислым серебром она ниже в 2,5 раза.

В табл.2 представлены данные по изучению противоопухолевой активности заявляемой композиции и смежных препаратов без метронидазола на мышах СВА с карциномой Эрлиха (при трехкратном внутрибрюшинном введении). Из табл.2 видно, что использование предложенной композиции вызывает статически достоверное (Р<0,001) увеличение в 2 раза продолжительности жизни мышей СВА с карциномой Эрлиха в сравнении с контролем (при отсутствии лечения).

Проводилась оценка противоопухолевой цитотоксической активности заявляемой композиции в сравнении с цисплатиной на культуре лейкозных клеток линии К-562, культивируемых в среде PMI-1640 с 15%-ной эмбриональной телячьей сывороткой, после окраски красителем трипановым синим через 48 ч инкубации. Предлагаемый состав оказывает выраженный ингибирующий эффект на пролиферацию лейкозных (опухолевых) клеток, статическая достоверность результатов Р<0,001, причем цитостатическая активность состава сравнима с известным препаратом цисплатина (табл.3).

Антибактериальная активность предложенной композиции определялась методом серийных разведений препаратов в бактериальных культурах при различных концентрациях (табл.4). Результаты опытов учитывали через 24 ч инкубации при температуре тела больного животного. Из данных табл.4 следует, что заявляемая композиция оказывает выраженное цитотоксическое действие на бактериальные клетки, вызывая 100%-ную их гибель при заявленных концентрациях (90% на границе диапазона).

Анализ уровня лекарственных препаратов, проведенный заявителем, позволил установить, что в доступных патентных и медицинских источниках отсутствуют аналоги, характеризующиеся совокупностью признаков, тождественных всем признакам заявляемого вещества. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует условию патентоспособности "новизна".

В результате поиска известных решений в данной и смежных областях с целью выявления признаков, совпадающих с отличительными от прототипа, не выявлены решения, имеющие признаки, полностью совпадающие с отличительными признаками изобретения. Известность и очевидность влияния заявленных отличительных признаков на достижение указанного технического результата не подтверждена. Это позволяет говорить о соответствии заявленного решения условию патентоспособности "изобретательский уровень".

Использованные источники

1. Пат. RU №2212887, МКИ А61К 31/00. Способ профилактики и лечения лейкоза крупного рогатого скота. Опубл. 2003.09.27.

2. Пат. RU 2094048, МКИ А61К 33/38. Цитостатический и антивирусный состав. Опубл. 27.10.97 г. Прототип.

3. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Рига, 1963. - 130 с.

Таблица 1
Токсичность заявляемой композициидоза, мг/кгКоличество опытных животныхКоличество погибших животных, в %заявляемый составAgNO3цисплатиназаявляемый составAgNO3цисплатина2055505/100%5/100%4055505/100%5/100%6055505/100%5/100%805552/40%5/100%5/100%1005555/100%5/100%5/100%

Таблица 3Цитотоксическая активность заявляемой композиции в сравнении с цисплатиной.АктивностьВид клетокЗаявленная композицияЦисплатина, мг/млКонтроль (опухолевые клетки без препаратов)Пример 1Пример 2Пример 620,20,02К-562174,8+36,2284,2+39,9479,5+52,1189,5+32,4372,6+44,7677,3±54,18507,5±604

Таблица 4
Антибактериальная активность заявляемой композиции№ п/пЗаявленная композиция% подавления роста бактерийстафилококкистрептококкикишечная палочка1Композиция из примера 190901002Композиция из примера 2 (оптимум)1001001003Композиция из примера 6100100100

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно к веществам с цитостатической и бактерицидной активностью, и может быть использовано в целях фармацевтической промышленности. Водорастворимая композиция содержит, мас.%: метронидазол - 0,007-0,7; нитрат гексаметилентетрамин серебра - 0,0085-0,85; тиосульфат натрия - 0,0284-2,84; вода или физиологический раствор - остальное до 100. Композиция обладает цитостатической и антибактериальной активностью, пониженной токсичностью и увеличенным сроком хранения, недорога, содержит общедоступные компоненты, может быть приготовлена на месте применения и эффективна, в частности, для лечения лейкоза крупного рогатого скота. 4 табл.

Противолейкозная и антибактериальная композиция, содержащая соль серебра, тиосульфат натрия и воду/физиологический раствор в качестве основы, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит метронидазол, а в качестве соли серебра - нитрат гексаметилентетрамин серебра при следующих соотношениях компонентов, мас.%:

метронидазол0,007-0,7нитрат гексаметилентетрамин серебра0,0085-0,85тиосульфат натрия0,0284-2,84вода или физиологический растворостальное до 100