СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВИРУСА ИЗ АЛЛАНТОИСНОЙ ЖИДКОСТИ ЗАРАЖЕННОГО КУРИНОГО ЭМБРИОНА Российский патент 1998 года по МПК A61K35/76 

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может быть использовано для лечения больных хроническим вирусоносительством.

Наиболее близким решением является способ по авт.св. N 650625, кл. A 61 K 35/76, предусматривающий выделение вируса из аллатоисной жидкости зараженных куриных эмбрионов.

Однако в данном способе для определения нарастания титра вируса используют каждый раз новый куриный эмбрион, что отражается на точности исследования.

Задачей изобретения является повышение точности количественного определения вируса.

Поставленная задача достигается тем, что исследование проводят на одном курином эмбрионе, при этом в аллантоисную полость куриного эмбриона через прокол стенки яйца вводят полиэтиленовую трубку, через которую в аллатоисную полость уводят инокулированный вирус, затем последовательно отсасывают жидкость и определяют титр вируса.

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве подходящего для указанных щелей объекта исследования использовано оплодотворенное яйцо 7 - 12-дневного возраста.

Для исследования отбирают крупные чистые (но немытые) оплодотворенные яйца, предпочтительно от кур породы бройлеры, хранившиеся не более 10 дней при 5 - 10^oC. Оплодотворенные яйца распознают по наличию зародышевого диска, который при просвечивании имеет вид темного пятнышка. Исследование проводят в затемненной комнате. Устанавливают яйца в кюветы, под которыми расположена электрическая лампочка. Яйцо укладывают тупым концом направо и через отверстие в скорлупе после предварительной дезинфекции вводят по направлению к эмбриону иглу шприца. При попадании в аллантоисную полость не наблюдается смещение тени эмбриона. Через иглу вводится металлический проводник на длину введенной иглы. Затем игла удаляется из яйца и по проводнику вводится полиэтиленовый стериальный дренаж. Для полной фиксации дренажа в скорлупе отверстие заливается парафином. Укрепленная таким образом полиэтиленовая трубка плотно фиксируется и может удерживаться в яйце длительное время. Через трубку в яйцо вводят инокулированный вирус. После заражения отверстие в дренаже заливают парафином.

Зараженные яйца устанавливают на подставках таким образом, чтобы воздушное пространство было обращено вверх, и помещают в термостат.

После определения для каждого вируса срока инкубации зараженных эмбрионов производят отсасывание аллантоисной жидкости через дренаж. Отсасывание жидкости производят в боксе с соблюдением правил антисептики. Перед отсасыванием амкиотической жидкости край дренажа дезинфицируют. Парафин с конца дренажной трубки удаляется путем срезания ее конца. Подсоединяют шприц и производят отсасывание жидкости.

Пример конкретного выполнения. Яйцо подготавливают по описанному способу и через дренажную трубку и аллантоисную оболочку вводят инокулированный вирус.

Через интервалы времени (1,5 суток) берут аллантоисную жидкость и определяют наличие вируса с помощью реакции гемагглюкации капельным методом на стекле (М.О.Бирир, 1982).

Проведенное исследование с использованием разработанного экспериментального способа подтверждает возможность изучения выделения вируса на развивающихся куриных эмбрионах. При введении в яйцо дренажа создаются условия, полностью исключающие повреждение богатого кровеносными сосудами хорионаллантоиса.

С использованием предложенного способа от одного зараженного эмбриона можно собрать 6 - 10 мл аллантоисной жидкости в разные интервалы времени, что позволяет изучать количественно увеличение числа вирусов.

Таким образом, предложенный способ позволяет в хроническом эксперименте изучить количественное увеличение числа инокулированного вируса в аллантоисной жидкости, получить легко сравнимые количественные результаты исследования, дает возможность достоверно обосновать целесообразность нарастания титра вирусов в аллантоисной жидкости.

Способ предусматривает введение через прокол стенки яйца полиэтиленовой трубки, через которую в аллантоисную жидкость вводят инакулированный вирус, исследование проводят на одном курином эмбрионе, жидкость из которого последовательно отсасывают титр вируса. Способ обеспечивает повышение точности определения.

Способ выделения вируса из аллантоисной жидкости зараженного куриного эмбриона с последующим количественным определением нарастания титра вируса, отличающийся тем, что исследование проводят на одном курином эмбрионе, при этом в аллатоисную полость куриного эмбриона через прокол стенки яйца вводят полиэтиленовую трубку, через трубку в аллантоисную полость вводят инокулированный вирус, затем отсасывают жидкость и определяют титр вируса.