Способ получения биомассы хламидий Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 A61K39/118 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к биотехнологии получения биомассы хламидий для производства диагностических и лечебно- профилактических препаратов.

Целью изобретения является увеличение выхода биомассы.

Пример 1. Хламидиосодержа- щую суспензию желточного мешка разводят до КГ и вводят в желточную полость .куриного эмбриона по известной методике в дозе 0,2 мл-. Отверстие в скорлупе после заражения заливают парафином и эмбрионы помещают в термостат с увлажненной атмосферой при 37-38 С. На второй день после заражения проводят овоскопию. Оставшиеся живыми эмбрионы заражают повторно в аллантоисную полость хламидиосо- держащей суспензией, разведенной до , в дозе 0,2 мл. Отверстие в скорлупе после заражения заливают парафином и эмбрионы снова помещают в термостат для продолжения инкубации. Инфицированные эмбрионы ежедневно овоскопируют. Эмбрионы, павшие на третий день после заражения в желточный мешок считают неспецифически павшими.

Перед вскрытием скорлупу охлажденных эмбрионов дезинфицируют спиртом и обжигают. Эмбрионы вскрывают

О

Јъ

00 00 03

путем срезывания скорлупы несколько выше границы воздушной камеры. Первоначально отсасывают прозрачную слегка опалесцирующую аллантоисную жидкость пастеровской пипеткой,.соединенной с сифоном, находящимся под разрежением, затем (rfocne удаления инфицированной аллантоисной жидкости) в отдельную посуду двумя пинцетами удаляют зародыш. При этом отсекают пупочный стебель и извлекают желточную и хорионаллантоисные оболочки вместе с сопутствующим желтком. Выход хла- ,мидиосодержащего материала из 120 куриных эмбрионов с учетом потерь составляет 636 или 5,3 г на один инфицированный эмбрион, что в 9,4 раза больше по сравнению с биофабричной технологией. Инфекционный титр биомассы при этом составляет КГ ЭЛД5о в 0,2 мл. Комплементсвязывающий хла- мидийный антиген,приготовленный из данной биомассы, показал активность в РСК 1:256. Выход антигена на 1 использованный эмбрион составил 10 мл, что в 9-10 раз больше по сравнению с биофабричной технологией.

Пример 2. Эмбрион заражают в желточную полость суспензией (10 желточного мешка в дозе 0,2 мл. На второй день после заражения эмбрионы овоскопируют, удаляют павшие эмбрионы, а остальные инфицируют повторно в аллантоисную полость суспензией, разведенной до 10 в дозе 0,2 мл. Инкубацию эмбрионов проводят в течение 8 дней. Павшие эмбрионы по мере их гибели охлаждают и вскрывают, при этом отсасывают хламидиосодержащую аллантоисную жидкость и отбирают желточную и хори оналлантоисную оболочки. От 120 куриных эмбрионов получают 452 мл хла- мидиосодержащей аллантоисной жидкости и 130 г инфицированных оболочек. Выход хламидиосодержащего материала

инфекционным титром

so

0

5

0

5

0

5

0

5

0,2 мл составляет 582 или 4,8 г на один инфицированный куриный эмбрион, что в 9,6 раза больше биомассы данного штамма, полученного при заражении только в желточный мешок. Из полученной биомассы готовят экспериментальную инактивированную эмульсионную вакцину против хламидиозного аборта крупного рогатого скота и испытывают ее иммуногенную активность на белых мышах и нетелях. Вакцина в дозе 0,2 мл обеспечивает иммунологическую устойчивость к контрольному заражению вирулентным штаммом хлами- дий у 91,7% вакцинированных мышей. Двукратное подкожное введение экспериментальной вакцины в дозе по 1,5 кгг нетелям предохраняет их от развития хламидиозного аборта крупного рогатого скота после контрольного заражения вирулентным штаммом хла- мидий (см. таблицу).

Таким образом, предлагаемый способ выращивания биомассы хламидий позволяет более эффективно использовать широкодоступную биологическую модель - куриные эмбрионы при выращивании хламидий для целей биотехнологии.

Формула изобретения

Способ получения биомассы хламидий, включающий заражение и культивирование суспензии хламидий в желточной полости куриных эмбрионов с последующим сбором хламидосодержащего материала и выделением биомассы, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы, через дня после заражения эмбрион дополнительно инфицируют в аллантоисную гголость суспензией хламидий в разведении 10 2-10 3в дозе 0,2 мл и х культивируют в течение 4-6 дней, при этом выделение биомассы производят из всего инфицированного материала.

51641883

Данные по исходу беременности опытной н контрольной группы нетелей после экспериментального зараже шя возбудителем хламиднозпого аборта крупного рогатого скота

Изобретение относится к области микробиологии, в частности к биотехнологии получения биомассы хламидий для производства диагностических и лечебно-профилактических препаратов. Целью изобретения является увеличение выхода биомассы хламидий на инфицированных куриных эмбрионах. Это достигается за счет выращивания бактериальной массы одновременно в желточной и аллантоисной полостях куриных эмГфионов. Для выполнения способа 6-7-дневные эмбрионы инфицируют разведенной до 10 3-10 4суспензией хламидий в желточный мешок, 1-2 дня культивируют, овосконируют,затем живые эмбрионы инфицируют повторно в аллантоисную полость тем же материалом в разведении , культивируют 4-6 дней, после чего аллантоисную жидкость, желточные и аллан- тоисные оболочки павшего эмбриона используют в качестве биомассы хламидий. 1 табл.

Составитель А.Горбатов Редактор Т.Лазоренко Техред М.Дидык Корректор М.Демчик

Заказ 1126

Тираж 388

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Подписное