РАСТВОР ДЛЯ ИНТРАВАСКУЛЯРНОГО ВВЕДЕНИЯ, СПОСОБ БОРЬБЫ С ВИРУСНЫМИ И ИНФЕКЦИОННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ, СПОСОБ БОРЬБЫ С СПИДОМ, СПОСОБ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ Российский патент 1999 года по МПК A61K31/14 A61K33/16 A61K9/08 

Изобретение относится к вводимому интраваскулярно раствору, содержащему по крайней мере один бензальконийфторид.

В заявке на европейский патент EP-A-0308564 уже указывается на использование бензальконийфторида для получения вводимой общим или парентеральным путем композици, содержащей 0.05 - 7%, особенно порядка 1 мас.5%, бензальконийфторида, предназначенной для борьбы против вирусов или ретровирусов, особенно герпеса или LVA, ответственных за СПИД (синдром приобретенного иммунного дефицита).

Однако предполагается, что бензальконийфторид, как и все соли бензолькония, которые являются поверхностно-активными, обладает сильной гемолитической способностью, запрещающей его введение интраваскулярно. Таким образом, хотя в европейской заявке на патент A-308564 указывается на общее или парентеральное введение бензальконийфторида, на практике его использование наталкивается на это затруднение, рассматриваемое вплоть до настоящего времени как непреодолимое по двум причинам: достигаемая концентрация в крови для обеспечения активности уже сама предполагает возникновение гемолиза крови; инъекция, даже осуществляемая очень постепенно, предполагает создание локально повышенной конструкции, следовательно, гемолитической концентрации, бензальконийфторида. В особенности инъекция этой соли в концентрациях порядка 1 мас. % оказывается невозможной. Однако эту концентрацию рассматривают как необходимую для достижения достаточной активности. Следовательно, отказываются от применения солей бензалькония и, более конкретно, бензальконийфторида, интраваскулярно (внутрисосудисто), принимая во внимание тот факт, что уменьшение концентраций растворов для инъекции уничтожит всякую противовирусную или бактерицидную активность, учитывая измеряемые ин витро минимальные ингибирующие концентрации (МИК), и что даже при этих незначительных концетрациях сохраняется очень большая опасность гемолиза, и, следовательно, немедленная смерть. С тех пор интраваскулярное введение человеку или животному солей бензалькония, и особенно бензальконийфторида, в таком случае просто исключается.

Однако существует постоянная потребность в том, чтобы располагать шокотерапией против вирусных или инфекционных заболеваний, особенно относящегося к иммунному дефициту происхождения, и, более конкретно, терапией больных СПИДом в явной или эволютивной фазе, которые имеют тяжелые "оппортунистические" инфекции, быстро проводящие к обезвоживанию и смерти.

Однако такая шокотерапия ставит ряд, очевидно противоречивых, проблем:
- она должна действовать не только против патогенных микроорганизмов, ответственных за ухудшенное клиническое состояние пациента, но и также против вирусов, ответственных за иммунный дефицит (случай СПИДа);
- она должна располагать очень широким спектром действия, учитывая большое разнообразие заболеваний, которые могут быть причиной (смерти) в случае иммунодефицита;
- она, однако, должна быть лишена вторичных эффектов, и в особенности не должна раздражать или действовать на здоровые органы или клетки организма, уже в заметной степени ослабленного.

Следовательно, вообще говоря, целью изобретения является нахождение решения этой общей проблемы, которая вплоть до настоящего момента не решена. Следовательно, целью изобретения является предложение лечения больных с тяжелыми, особенно множественными, вирусными или инфекционными заболеваниями, такими, как заболевания, возникающие вследствие иммунодефицита.

Более конкретно, изобретатели неожиданно установили, что из четвертичных аммониевых соединений бензальконийфторид может быть эффективно введен путем инъекции интраваскулярно без опасности гемолиза в определенном диапазоне концентраций, в котором, однако, обнаружено эффективное воздействие.

Следовательно, целью изобретения является преимущественно предложение раствора для инъекции антивирусного или антиинфекционного агента, такого, как соль бензалькония.

В этом отношении, изобретение касается вводимого интраваскулярно раствора, отличающегося тем, что он содержит порядка или менее 0.23 мас.% по крайне мере одного бензальконийфторида.

где R обозначает алкильный радикал, который может изменяться от C₈H₁₇ до C₁₈H₃₇, растворенного в инъекцируемом интраваскулярно эксципиенте.

В самом деле, смогли констатировать, что, когда массовые пропорции бензальконийфторида составляют величины порядка иди ниже 0.23%, и особенно порядка 0.20 мас. %, вообще нет опасности никакого гемолиза, в противоположность общепредусматриваемому в уровне техники. Более того, клиническое улучшение может быть установлено при использовании концентрации выше 0.05 мас. % бензальконийфторида. Таким образом, раствор согласно изобретению содержит 0.05 - 2.3 г/л - особенно порядка 2.1 г/л - бензальконийфторида, предпочтительно бензальконийфторида, в котором R обозначает C₁₄H₂₉.

Более конкретно, раствор согласно изобретению содержит бензальконийфторид в определенной концентрации, чтобы можно было вводить в виде медленной инъекции унитарные дозы порядка 0.5 - 23 мг - особенно порядка 21 мг - бензальконийфторида на литр крови обрабатываемого (излечиваемого) пациента. Так, в случае человека с 5-ю литрами крови реализуют вводимую путем инъекции дозу 2.5 - 130 мг, особенно порядка 105 мг, бензальконийфторила.

Таким образом, согласно изобретению должны быть объединены два условия, чтобы можно было осуществлять интраваскулярную инъекцию бензальконийфторида:
- концентрация бензальконийфторида в растворе для инъекции должна быть ниже 0.23%; и
- общее количество, вводимое путем инъекции, на литр крови пациента должно оставаться ниже 23 мг.

Для определения концентрации бензальконийфторида в растворе для инъекции, у пациента непосредственно перед инъекцией отбирают кровь, подвергают эту кровь гемолитическим испытаниям ин витро при использовании растворов, содержащих первоначально 0.23% бензальконийфторида, и уменьшают концентрации вплоть для получения не вызывающего гемолиз раствора.

Согласно изобретению до инъекции контролируют не гемолитический характер раствора путем определения гемолитической (вызывающей гемолиз) концентрации в отношении крови пациента.

Раствор согласно изобретению может быть упакован в ампулы на 5 - 15 мл - особенно 10 мл, - содержащие 0.5 - 23 мг - особенно 21 мг на ампулу в 10 мл - бензальконийфторида, соблюдая максимальное значение 0.23%. И вводят путем инъекции 5 - 15 мл, особенно 10 мл, раствора на литр крови пациента, особенно 50 мл в случае человека.

Раствор согласно изобретению предпочтительно образован бензальконийфторидом, растворенным в физиологическом растворе. R предпочтительно обозначает C₁₂H₂₅-C₁₄H₂₉. Согласно изобретению, раствор, кроме того, может включать по крайней мере одно металлическое производное фтора, и, более конкретно, фторид лития.

Изобретение, кроме того, относится к применению по крайней мере одного бензальконийфторида, формула которого приведена выше, растворенного в концентрации порядка или ниже 0.23 мас.%, во вводимом путем инъекции интраваскулярно эксципиенте для получения вводимого интраваскулярно раствора, предназначенного для борьбы против вирусных или инъекционных, особенно связанного с дефицитом иммунитета происхождения, заболеваний. Более конкретно, изобретение относится к применению по крайней мере одного такого бензальконийфторида, растворенного в концентрации порядка или ниже 0.23 мас.%, во вводимом путем инъекции интраваскулярно эксципиенте для получения вводимого интраваскулярно раствора, предназначенного для борьбы против СПИДа в явной или эволютивной фазе. Следовательно, изобретение относится к способу лечения вирусных или инфекционных, особенно относящегося к дефициту иммунитета происхождения, заболеваний, таких как СПИД в явной или эволютивной фазе, в случае которого вводят путем инъекции интраваскулярно раствор согласно изобретению. В способе изобретения раствор вводят путем инъекции после определения in vivo гемолитической способности бензальконийфторида по отношению к крови пациента, причем вводимый путем инъекции раствор имеет концентрацию ниже этой гемолитической концентрации, и путем медленной инъекции вводят количество бензальконийфторида, составляющее 0.5 - 23 мг на литр крови обрабатываемого (извлечиваемого) пациента, особенно и предпочтительно 20 - 23 мг.

Таким образом, при применении согласно изобретению, используют 0.5 - 23 мг - особенно порядка 21 мг - бензальконийфторида, растворенного в 10 мл раствора.

Следовательно, изобретение особенно пригодно для лечения вирусных заболеваний, которые разрушают относящуюся к иммунитету защиту, и, более конкретно, в виде шокотерапии. Согласно изобретению, также можно эффективно лечить случай болезней Карре и случаи СПИДа в поздней фазе, т.е. развития инфекционных "оппортунистических" заболеваний.

Другие характеристики и преимущества изобретения следуют из нижеприводимых примеров.

На фиг. 1 - 4 представлены кривые результатов испытаний по определению ин витро противовирусной активности, на вирусе ВИЧ-1, бензальконийфторида согласно нижеописанному примеру 2.

Противовирусные испытания ин витро.

Пример 1.

Определяют противовирусную активность тетрадецил-диметил-бензил-аммоний-фторида (FBK) по отношению к вирусам позвоночных согласно французской норме AFNOR T 72 - 180, декабрь 1989 г. Этот бензальконийфторид разбавляют в виде раствора в стерильной дистиллированной воде до следующих концентраций: 0.02; 0.01; 0.005% (масса, деленная на объем).

Испытания реализуют на следующих штаммах вирусов:
- picornaviridae: энтеровирус polio 1, штамм SABIN, культивируемый на клетке VERO;
- adenoviridae: аденовирус типа 5, культивируемый на клетке КВ;
- herpetoviridae: вирус простого герпеса типа 1 (вирус герпеса человека 1) и вирус простого герпеса типа 2 (вирус герпеса человека 2), поставляемый Институтом Пастера и культивируемый на клетке MCR-5.

Вода, культуральные среды и реагенты представляют собой таковые, рекомендуемые нормой AFNOR T 72 - 180. Титрование вирусов осуществляется путем воспроизведения (la lecture) цитопатического опыта, согласно методу, описанному в норме AFNOR T 72 - 180. Расчет инфекционного титра осуществляют по методу FISHER и VATES с помощью таблиц WYSHAK и DETRE. Результаты даются в виде числа инфекционных единиц на мл, или образующих бляшки единиц на мл (UFP/мл)
Сначала определяют порог токсичности (DLO) бензальконийфторида. Перед фильтрацией, этот порог токсичности составляет 0.05% (в мг на мл). После фильтрации, порог токсичности составляет 0.01%.

Определяют способность клеток, обработанных бензальконийфторидом, развивать вирусную инфекцию и результаты представлены в таблице 1.

Затем определяют противовирусную активность с помощью так называемого метода "молекулярного просеивания", включающего фильтрацию на геле Сефадекса LH 20 и использование субцитотоксических концентраций бензальконийфторида. Противовирусную активность определяют в зависимости от времени контакта между бензальконийфторидом и вирусным штаммом. Различные отборы проб осуществляют в предопределенные интервалы времени, затем их подвергают центрифугированию в течение 8 минут при 1000 g, после чего титруют на микропластинах. Контрольную вирусную суспензию без бензальконийфторида обрабатывают по той же методике. В таблицах 2 - 5 представлены полученные результаты в виде кинетики инактивации вирусов в зависимости от времени контакта с бензальконийфторидом и от его концентрации. Противовирусную активность бензальконийфторида (FBK) определяют по минимальной концентрации и минимальному времени контакта с вирусом, которые вызывают уменьшение инфекционного титра вирусов на логарифмический фактор, равный по крайней мере 4. Испытания реализуют при 32^oC.

Эти опыты, следовательно, подтверждают противовирусную активность бензальконийфторида при следующих концентрациях (масса/объем) и временах контактирования: 0.01% за 30 минут в отношении энтеровируса polio 1; 0.02% за 120 минут в отношении аденовируса типа 5; 0.01% за 5 минут в отношении вируса простого герпеса типа 1; 0.01% за 15 минут в отношении вируса простого герпеса типа 2; при 32^oC, согласно норме AFNOR T 72 - 180.

Пример 2.

Противовирусную активность бензальконийфторида испытывают в отношении вируса ВИЧ-1 (штамм LAI), ответственного за СПИД, поставляемого Институтом Пастера, с помощью теста на инфекционность в отношении первичной культуры активированных человеческих лимфоцитов.

Изучение реализуют в два этапа; сначала вирус обрабатывают с помощью раствора бензальконийфторида (FBK) с концентрацией 20 мгк/мл, затем осуществляют исследование остаточной инфекционности обработанного вируса на первичной культуре активированных человеческих лимфоцитов.

Для обработки вируса, время контакта, при комнатной температуре, составляет 30 минут и 60 минут. 0.9 мл Вируса, к которым добавлено 100 мкл FBK, оставляют на 30 минут при комнатной температуре, затем разбавляют в 10 мл буфера NTE. Полученный образец обозначают REV 7. Образец REV 8 соответствует 0.9 мл вируса, к которому добавлено 100 мкл FBK, оставляемому на 60 минут при комнатной температуре, затем разбавляемому в 10 мл буфера NTE. После разбавления в буфере, образцы центрифугируют в течение 35 минут при скорости 40 000 об./мин., чтобы удалить в случае необходимости токсичный для клеток теста на инфекционность продукт и концентрировать остаточный инфекционный вирус. После центрифугирования осадок снова суспендируют в 1 мл культуральной среды, отобранной в виде аликвотной части и хранящейся при -80^oC.

Образцы REV 1, RET 2 и REV 3. 1 представляют собой положительные контрольные образцы эксперимента. REV 1 соответствуют 0.9 мл вирусной суспензии, замороженной при -80^oC. REV 2 соответствует 0.9 мл вирусной суспензии, разбавленной и центрифугированной таким же образом, что и образцы REV 7 и REV 8, чтобы оценить потери инфекционности во время стадии центрифугирования. REV 3/1 соответствует 0.9 мл вирусной суспензии, выдержанной при комнатной температуре в течение 60 минут (максимальная продолжительность исследования), затем разбавленной в буфере NTE и центрифугированной таким же образом, что и обработанные образцы, чтобы оценить потерю инфекционности за счет экспериментальных условий, используемых для FBK.

Образец REV 4 из 1 мл FBK с концентрацией 20 мкг/мл, разбавленный в 10 мл буфера NTE и центрифугированный в условиях, описанных для обработанного вируса, используют для контролирования возможной токсичности в отношении клеток тестов на инфекционность, которая возникает вследствие остаточного, не удаленного во время центрифугирования продукта. Этот образец, следовательно, используют в качестве отрицательного контрольного образца в отношении неинфицированных клеток теста на инфекционность.

Так называемые чистые опыты представляют собой поиск остаточной инфекционной способности образцов обработанного вируса в отношении активированных человеческих лимфоцитов PBMC. Для этой цели предварительно стимулированные лимфоциты инкубируют с 1 мл каждого образца обработанного вируса или необработанного вируса, при 10 10-кратных разбавлениях (10^-4-10^-7 для положительных контрольных образцов и 10^-1-10^-5 для образцов обработанного вируса). Клетки подвергают центрифугированию и снова суспендируют в количестве 10⁶ клеток на мл в полной среде. Все три или четыре дня клетки подсчитывают, снова высеивают и надосадочные жидкости хранят при -80^oC. После анализа результатов реализуют второй эксперимент идентичным образом, инокулируя клетки с помощью наполовину разбавленных образцов обработанного с помощью FBK вируса.

Затем измеряют активность инверсной транскриптазы (RT) в надосадочных жидкостях культуры клеток. Надосадочные жидкости, хранящиеся после каждой стадии метаморфоза клеток (дни N 3, 7, 10, 14, 17, 21, 24 для первого эксперимента и дни N 3, 6, 9, 13, 16 и 20 для второго эксперимента), испытывают и активность их инверсной транскриптазы определяют количественно после концентрирования путем ультрацентрифугирования.

Также реализуют количественные определения антигена P 25 ВИЧ-1 с помощью метода ферментного иммуносорбентного анализа "Sandwich" при использовании тех же надосадочных жидкостей культуры в дни N 3, 10, 17 и 24 для первого эксперимента и дни N 3, 9, 16 и 20 для второго эксперимента, после инокуляции клеток. Используют набор ELAVIA Ag 1, выпускаемый в продажу фирмой Diagnostic Pasteur. Констатируют, что контрольные образцы REV 4 нетоксичны для клеток теста на инфекционность.

В таблице 6 представлены полученные в отношении активности обратной транскриптазы результаты для контрольных образцов.

Из таблицы 6 следует, что спустя 14 дней после инфекции клетки, инокулированные с помощью разбавлений ниже или равных 10^-7 образцы REV 1 или с помощью разбавления 10^-4 для образцов REV 3.1, содержат (expriment вирусные частицы в надосадочных жидкостях культуры. В экспериментальных условиях инфекционного разбавления на 100%. Титры контрольных образцов составляют соответственно 10⁷ UI/мл для REV 1 и 10⁴ UI/мл для REV 2 и REV 3.1. Следовательно, для экспериментальных контрольных образцов констатируют снижение инфекционного титра. Это снижение составляет величину на логарифмический фактор порядка 3 для контрольного образца после центрифугирования и для контрольного образца вируса, выдерживаемого 1 часа при комнатной температуре и подвергнутого центрифугированию. Из фиг. 1 следует, что никакой активности обратной транскриптазы не обнаружено в надосадочной жидкости культур, инокулированных с помощью разбавления 1/10 образцов вирусов, обработанных с помощью FBK в течение 30 или 60 минут. Эти результаты сравнимы с таковыми, полученными с контрольным образцом RFV 3.1, который имеет инфекционный титр 10⁴ UI/мл.

Учитывая эти результаты второй эксперимент осуществляют путем инокуляции PBMC с помощью разбавлений 1/2 образцов вирусов, обработанных с помощью FBK, чтобы подтвердить отсутствие инфекционных вирусов в образцах. Результаты количественных определений активности RT в надосадочных жидкостях культуры представлены на фиг. 2. Никакой активности RT не обнаружено, тогда, как контрольный образец вируса REV 3.1 оказывается положительным при разбавлении 10^-5.

На фиг. 3 представлены результаты количественных определений антигена P 25 контрольных образцах вирусов. Количество антигена P 25 выражают в пг/мл и оценивают с помощью эталонной кривой, составленной на основе стандартного раствора антигенов, поставляемого изготовителем. Титры, оцениваемые спустя 16 дней после инфекции, составляют 10⁷ UI/мл для REV 1; 10⁵ UI/мл для REV 2 и 10⁴ UI/мл для КУМ 3.1.

На фиг. 4 представлено количественное определение антигенов P 25 в надосадочных жидкостях лимфоцитов, инокулированных с помощью разбавленных 1/2 растворов образцов вирусов, обработанных с помощью FBK. Констатируют, что образцы REV 7 и REV 8 отрицательны на антиген P 25. Эти результаты, следовательно, подтверждают и уточняют таковые, полученные, согласно вирусной экспрессии, путем количественного определения активности обратной транскриптазы в надосадочных жидкостях культур, подвергнутых воздействию обработанного или нет вируса.

Таким образом, эти опыты показывают, что бензальконийфторида в концентрации 20 мкг/мл вызывает потерю инфекционной способности вируса ВИЧ-1 ин витро на логарифмический фактор 5 в отношении активированных человеческих лимфоцитов. Таким образом, бензальконийфторид в концентрации 20 мкг/мл оказывается противовирусные ин витро в отношении вируса СПИДа.

Пример 3.

Локальную и общую толерантность в отношении введения бензальконийфторида внутривенно испытывают на собаке.

Двух гончих собак, самца и самку, с первоначальным весом около 10 кг, в возрасте 6 месяцев, с хорошим здоровьем, подвергнутых вакцинации и удалению паразитов, помещают в виварий. Их подвергают обработке внутривенно с помощью 2 мг/кг и в день бензальконийфторида, разбавленного до концентрации 2.10 г/л в изотоническом стерильном растворе апирогенного хлорида натрия. Раствор упакован в ампулах по 10 мл, и путем инъекции вводят 0.95 мл на кг и в день, осуществляя ротацию инъекций в вену каждой конечности. Инъекцию реализуют с помощью надчерепного микроперфузора, смонтированного на пластиковом шприце, и введение осуществляют внутривенного медленно в течение примерно 1.5 минут. Обработку осуществляют в течение 28 дней. Исследования мочи проводят перед началом обработки, в середине обработки (спустя 14 дней) и по окончании обработки.

Точно также, отбор крови осуществляют из яремной вены до начала обработки, спустя 14 дней и спустя 28 дней после обработки. Эту кровь исследуют с гематологической точки зрения и проводят полный биохимический анализ.

По окончании обработки, животных умерщвляют и проводят патолого-анатомические исследования и взвешивание следующих органов: печень, почки, селезенка, надпочечники, тестикулы, яичники, тимус, щитовидные железы. Также проводят гистологические исследования большинства жизненных органов.

Никакого изменения симптоматологического поведения в течение обработки не наблюдалось. В течение первых двух недель инъекции могут быть реализованы без затруднений. Впоследствии появляется отек.

Вес тела животного остается стабильным в течение высей продолжительности экспериментирования. Ректальная температура самца остается стабильной, а ректальная температура самки повышается на 1^oC в течение эксприментирования. Никакого заметного изменения кровяного давления и частоты сокращений сердца не смогли наблюдать. Точно также, различные электрокардиографические параметры остаются стабильными в течение всей продолжительности экспериментирования.

В случае самки, в начале, в середине и по окончании обработки не обнаружено путем исследований мочи никакого следа гемолиза. В случае найдено наличие большого количества крови в моче в начале обработки. Собаку помещали в клетку для диуреза на 48 часов. По истечении 48 часов анализ мочи показал отсутствие крови, следы кетоновых веществ, отсутствие глюкозы и следы протеинов. Количественные определения натрия и калия подвергались изменениям в случае самца, но остались почти стабильными для самки. По окончании обработки не обнаружено никакого следа крови в моче, отобранной из мочевого пузыря самца в момент аутопсии.

Из гематологических параметров только число лейкоцитов повышается спустя недели в случае самки и спустя 4 недели для самца. Это повышение соответствует появлению отека на лапе.

В случае биохимических парамтеров можно констатировать повышение содержания щелочных фосфатаз и LDH. Никакого другого заметного изменения не обнаружено.

Гистологическое исследование различных органов не показывает изменения вследствие обработки, если при этом речь не идет о локальных реакциях в местах инъекции. Таким образом, несмотря на строгость обработки, не выявлен никакой заметный токсический эффект бензальконийфторида, вводимого путем внутривенной инъекции.

Пример 4.

Острую токсичность бензальконийфторида при одноразовом введении мыши и морской свинке определяют по методу Behrens и Karber, причем введение осуществляют интракардиально, внутривенно и интраперитонеально. Подопытными животными являются белые мыши и белые морские свинки, взрослые и молодые. На вводимую дозу используют по 10 животных, пять самок и пять самцов. Бензальконийфторид применяют в виде раствора с концентрацией 3 г/л в стерильном изотоническом растворе апирогенного хлорида натрия. Животных наблюдают в течение 7 дней после одноразового введения, реализуемого с помощью стерильной иглы, приспособленной к градуированному шприцу на 10 миллилитров, для того, чтобы можно было обрабатывать каждое животное с помощью точно известной дозы. Животных взвешивают все дни, в течение которых проводят наблюдение.

Определяют ЛД₅₀ (летальная доза 50). Результаты приводятся в таблице 7.

Таким образом, констатируют, что введенный внутривенно, интраперитонеально или интракардиально бензальконийфторид достаточно мало токсичен, так что можно предусматривать его введение интраваскулярно в дозах, где он тем не менее активен, а именно порядка 20 - 23 мг на литр крови излечиваемого пациента.

Пример 5.

Испытания ин виво осуществляют на пораженных парвовирусом собаках. Этих собак обрабатывают путем медленного вливания бензальконийфторида с C₁₄, растворенного в концентрации 2.1 г/л в стерильном изотоническом растворе апирогенного хлорида натрия.

Самца немецкой овчарки весом 20 кг в возрасте восьми месяцев, пораженного парвовирусом (гастроэнтерит с обезвоживанием, серогеморрагический энтерит с высоким содержанием мочевины) обрабатывают с помощью двух инъекций с интервалом в 12 часов двух ампул. Спустя 6 дней после начала обработки констатируют одновременно отличную толерантность и выздоровление собаки.

Самку немецкой овчарки в возрасте 7 месяцев и весом порядка 10 кг, больную парвовирусом около 4-х дней (гастроэнтерит с обезвоживанием, субкоматозное состояние, гемоконцентрирование, высокое содержание мочевины, геморрагическая соль) обрабатывают с помощью двух инъекций, разделенных по времени 12-ю часами, раствора согласно изобретению. Первая инъекция составляет 10 мл, а вторая - 20 мл. Общую комбинированную обработку осуществляют в течение 8 дней. Толерантность обработки оказывается превосходной. Несмотря на очень плохое состояние собаки в начале обработки, по истечении 20 дней констатируют полное выздоровление.

Самца собаки породы ньюфаундленд в возрасте 6 месяцев и весом около 28 мг, пораженного парвовирусом, также обрабатывают с помощью двух разделенных по времени 12-ю часами инъекций по 10 мл путем медленного внутривенного вливания. По истечении второго дня из мочи исчезает кровь и у собак более нет рвоты. По истечении четвертого дня животное возобновляет прием пищи. На 18-тый день констатируют полное выздоровление.

Самку собаки породы ротвейлер в возрасте 4-х месяцев и весом 15 кг, пораженную парвовирусом, также обрабатывают таким же образом. По истечении 18 дней констатируют полное выздоровление.

Точно такую же обработку проводят в случае самки собаки породы немецкая легавая в возрасте 2-х месяцев, весом примерно 12 кг. Точно также констатируют выздоровление (возобновление приема пищи на 4-ый день и полное подтвержденное выздоровление на 18-ый день).

Трех щенков (самца в возрасте 4 месяцев и весом 12 кг; самца в возрасте 4 месяца и весом 7 кг; самки в возрасте 2-х месяцев ив сом 6 кг), пораженных сильным эволютивным гастроэнтеритом, также обрабатывают путем медленного внутривенного вливания двух инъекций с интервалом 12 часов. Щенки больны серогеморрагическим гастроэнтеритом. В течение двух дней констатирована гибель.

Таким образом, за исключением трех неудач, полученных в отношении очень молодых и пораженных тяжелыми заболеваниями животных, согласно изобретению можно лечить собак от паровирусов.

Пример 6.

Изобретение используют для лечения собак, пораженных болезнью Карре. Это заболевание, рассматриваемое как смертельное и без лечения на сегодняшний день, вызывается ультравирусом.

Двенадцать собак обрабатывают по одной ампуле, на каждую, с 10 мл раствора бензальконийфторида с концентрацией 2.1 г/л на 20 кг веса животного. Инъекцию реализуют одни раз в день в течение трех дней. Собак подвергают комбинированным обработками (витамины, антибиотики, вакцины...).

Обработка оказалась эффективной для семи собак, которых смогли спасти и для которых по истечении 18 дней констатировано полное выздоровление.

Из семи вылеченных собак, пять из них происходят из своры, в которой уже были констатированы две смерти, и очень поражены болезнью. Их уже подвергали первой, оказавшейся неэффективной, обработке. Симптомами особенно являются гноетечения из ноздрей, кашель, диареи, гнойный конъюнктивит, лихорадка (жар) с температурой 40 - 40.5^oC в среднем. Эффективность обработки, следовательно, особенно удивительная.

Пять других обработанных собак имели все нервного происхождения симптомы (общая дрожь) и их нельзя было лечить. Следовательно, изобретение позволяет осуществлять лечение случаев болезни Карре, не сопровождающиеся симптомами нервного происхождения.

Пример 7.

Определяют ин витро гемолитическую концентрацию бензальконийфторида в случае человеческой крови, крови морской свинки и кролика, причем кровь содержит все компоненты.

Это экспериментирование осуществляют с помощью проводимой в больнице процедуры исследования периферической анемии. Используют 3 разбавления раствора бензальконийфторида на литр: 300 мг/л; 150 мг/л и 75 мг/л; в стерильном изотоническом растворе апирогенного хлорида натрия. Каждый раствор из трех разбавлений смешивают с равным объемом крови трех видов (человек, морская свинка и кролик). Смесь медленно перемешивают в течение 5.5 минут, затем центрифугируют в течение 3-х минут при скорости 35000 об./мин. Гемолиз выражается в более или менее интенсивном красном окрашивании плазматической надосадочной жидкости. Реальные испытуемые концентрации бензальконийфторида составляют, следовательно, 150 м.д. (миллионных долей), 75 м.д. и 35.5 м.д. Каждый опыт повторяют дважды.

Не обнаружив гемолиза при концентрации 37.5 мг/л, реализуют новые испытания на шести образцах человеческой крови в тех же условиях с концентрацией бензальконийфторида 20 мг/л и 35 мг/л.

В таблице 8 приводятся полученные результаты.

Таким образом, бензальконийфторида при концентрации, равной или ниже 20 мг/л, не вызывает гемолиза крови человека, и это с хорошим диапазоном безопасности.

Согласно изобретению тем не менее перед инъекцией можно легко проверять гемолитическую концентрацию бензальконийфторида в отношении крови излечиваемого пациента.

Пример 8.

Больных СПИДом в эволютивной или конечной фазе обрабатывают раствором, содержащим 2.1 г/л бензальконийфторида. Перед инъекцией определяют гемолитическую концентрацию бензальконийфторида и удостоверяются в том, что она намного выше таковой используемого раствора.

Мужчина в возрасте 37 лет весом 70 кг имеет следующие симптомы: астения, истощение, кандидомикоз ротовой полости, лихорадка с температурой 39.7^oC, тесты ELISA ("ферментный иммуносорбентный анализ) и вестерн-блотирования (подтверждающий тест) положительные, число CD₄ (рецепторы на поверхности лимфоцитов T, ответственные за регуляцию иммунного отвеса) меньше 200 (нормальная величина порядка 1000). Пациента лечат путем медленных внутривенных инъекций по 50 мл бензальконийфторида с C₁₄ в концентрации 2.1 г/л, повторяющихся каждые двенадцать часов, в виде двух курсов лечения по три дня, разделенных промежутком в 5 дней наблюдения. Несмотря на боль в момент инъекции, появляющуюся в конце второго курса лечения, наблюдения спустя месяц и семь месяцев после лечения демонстрируют хорошее общее состояние пациента, который может возобновлять свою активность. Число CD₄ повышается до 600.

Мужчина в возрасте 28 лет весом 57 кг имеет следующие симптомы: астения, истощение, рвота, диареи, кандидомикоз ротовой полости, лихорадка с температурой 39.5^oC, больной полностью лежачий, тесты ELISA и вестерн-блотирования положительные, число CD₄=20. Это пациента подвергают двум курсам лечения по 3 дня, как указано выше. На 10-ый день после начала лечения отмечают отчетливое улучшение общего состояния, исчезновение жара, рвот и диарей и восстановление веса (59.6 кг). Больной может подниматься и ходить.

Мужчина в возрасте 44 года весом 78 кг имеет следующие симптомы: астения, анорексия, бессонницы, лихорадка с температурой 39.7^oC, тесты ELISA и вестерн-блотирования положительные. число CD₄ составляет 650. Пациента лечат путем медленных внутривенных инъекций по 50 мл бензальконийфторида с C₁₄ при концентрации 2.1 г/л, повторяющихся каждые восемь часов в течение трех дней, с дополнительным лечением антибиотиком (на основе доксициклина) по две желатиновые капсулы с лекарством каждый вечер.

На шестой день после начала лечения (обработки) исчезает лихорадка (жар). Спустя два месяца после начала лечения отмечают постепенное исчезновение астении. На четвертый месяц пациент, к которому вернулось нормальное общее состояние, восстановливает свою жизнедеятельность.

Мужчина в возрасте 42 года весом 52 кг имеет следующие симптомы: астения, анорексия, потовыделение, ингвинальная аденопатия, диареи, резкие головные боли, кандидомикоз ротовой полости, лихорадка с температурой 39^oC, тесты ELISA и вестерн-блоитирования положительные, число CD₄=200. Пациента лечат путем проведения курса лечения в три дня с помощью бензальконийфторида с C₁₄ при концентрации 2.1 г/л в виде медленных внутривенных инъекций каждый 12 часов. Начиная с третьего дня констатируют отчетливое снижение жара (лихорадки). Спустя 3.5 месяца после начала лечения пациент имеет хорошее общее состояние, вес 56 кг, число CD₄ повышается до 700 и никаких клинических симптомов.

Пример 9.

Определяют активность ин витро бензальконийфторида на туберкулезных микобактериях (дикий штамм).

Это экспериментирование осуществляют путем процедуры импрегнирования поверхности среды BOWEINSTEIN JENSEN. Количество активного вещества, абсорбируемого средой, выражают в см² .

Используемый объем соответствующего разбавления бензальконийфторида составляет 0.25 мл на пробирку со средой, чтобы достичь концентраций бензальконийфторида 0.1, 0.2 и 0.3% на поверхность в см² среды BOWEINSTEIN JENSEN.

Для каждой серии испытаний используют контрольную пробирку без бензальконийфторида.

Реализуют три серии тестов с разбавлениями 0.1, 0.01 и 0.001 приготовленного маточного раствора штамма Bacterium Tuberculosus с концентрацией 1 мг/мл.

Все тесты осуществляют два раза.

После инкубирования в течение 4-х недель при 37^oC полученные результаты показывают ингибирование культуры с помощью концентраций бензальконийфторида 0.1, 0.2 и 0.3% на поверхность в см² среды BOWEINSTEIN JENSEN и это наблюдают для трех разбавлений 0.1, 0.01 и 0.001 маточной культуры Bacterium Tuberculosis.

В таблице 9 представлены полученные результаты.

Изобретение может быть использовано в медицине для борьбы с вирусами или ретровирусами, особенно герпеса или LVA, ответственных за СПИД. Заявленный раствор позволяет лечить больных с тяжелыми формами заболеваний без опасности гемодиза в определенном диапазоне концентраций. Раствор содержит 0,005-0,23 мас.% по меньшей мере одного бензальконийфторида формулы

где R - алкильный радикал С₈H₁₇-С₁₈H₃₇ пригодном для интраваскулярного введения эксципиенте. Заявленные способы борьбы с вирусными и инфекционными заболеваниями, со СПИДом и туберкулезом осуществляются путем интраваскулярной инъекции раствора. 4 с.п. ф-лы, 15 з.п.ф-лы, 4 ил., 9 табл.

1. Раствор для интраваскулярного введения, содержащий 0,005 - 0,23 мас.% по меньшей мере одного бензальконийфторида формулы

где R - алкильный радикал C₈H₁₇ - C₁₈H₃₇,
в пригодном для интраваскулярного введения эксципиенте. 2. Раствор по п.1, содержащий 0,2 мас.% бензальконийфторида. 3. Раствор по п.1 или 2, содержащий более 0,05 мас.% бензальконийфторида. 4. Раствор по любому из пп.1 - 3, содержащий бензальконийфторид, в котором R равен C₁₂H₂₅ - C₁₄H₂₉. 5. Раствор по любому из пп. 1, 3 и 4, содержащий 0,21 мас.% бензальконийфторида, в котором R равен C₁₄H₂₉. 6. Раствор по любому из пп.1 - 5, упакованный в ампулы объемом 5 - 6 мл, предпочтительно 10 мл, содержащие 0,5 - 23 мг, предпочтительно 21 мг, бензальконийфторида. 7. Раствор по любому из пп.1 - 6, в котором эксципиентом является физиологический раствор. 8. Раствор по любому из пп.1 - 7, дополнительно содержащий по крайней мере одно металлическое производное фтора. 9. Раствор по п.8, в котором металлическим производным фтора является фторид лития. 10. Способ борьбы с вирусными и инфекционными заболеваниями, предпочтительно обусловленными иммунодефицитом, отличающийся тем, что он осуществляется путем интраваскулярной инъекции раствора по пп.1 - 9. 11. Способ борьбы со СПИДом, отличающийся тем, что он осуществляется путем интраваскулярной инъекции раствора по пп.1 - 9. 12. Способ борьбы с туберкулезом, отличающийся тем, что он осуществляется путем интраваскулярной инъекции раствора по пп.1 - 9. 13. Способ борьбы по любому из пп.10 - 12, отличающийся тем, что используют раствор, содержащий 0,2 мас.% бензальконийфторида. 14. Способ борьбы по любому из пп.10 - 12, отличающийся тем, что осуществляют медленную инъекцию раствора до достижения дозы бензальконийфторида 0,5 - 23 мг, предпочтительно 21 мг, на литр крови излечиваемого пациента. 15. Способ борьбы по любому из пп.10 - 12, отличающийся тем, что используют раствор, содержащий бензальконийфторид, имеющий R, равный C₁₂H₂₅ - C₁₄H₂₉. 16. Способ борьбы по любому из пп.10 - 12, отличающийся тем, что используют раствор, содержащий 0,5 - 23 мг, предпочтительно 21 мг, бензальконийфторида в объеме 10 мл. 17. Способ борьбы по любому из пп.10 - 12, отличающийся тем, что используют бензальконийфторид в физиологическом растворе. 18. Способ борьбы по любому из пп.10 - 12, отличающийся тем, что используют раствор бензальконийфторида, дополнительно содержащий металлическое производное фтора. 19. Способ борьбы по п.18, отличающийся тем, что металлическим производным фтора является фторид лития.