МАТЕРИАЛЫ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ С ПОМОЩЬЮ СОЕДИНЕНИЯ ЦИСТЕАМИНА Российский патент 2011 года по МПК A61K31/145 A61K31/195 A61K31/522 A61P31/16 A61P31/12 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Эта заявка испрашивает приоритет предварительных заявок США № 60/740584, поданной 28 ноября 2005; № 60/810773, поданной 2 июня 2006; № 60/818885, поданной и 6 июля 2006; и № 60/847020, поданной 25 сентября 2006, которые все приведены здесь в качестве ссылки в полном объеме, включая любые фигуры и/или таблицы.

Уровень техники изобретения

Вирус является маленьким паразитом, состоящим из нуклеиновой кислоты (РНК или ДНК), заключенной в белковую оболочку. Вирусы способны осуществлять репликацию только с помощью инфицирования восприимчивой клетки хозяина и направления систем клетки хозяина на продукцию большего количества вирусов. Гликопротеины (находящиеся в белковой оболочке) опосредуют адсорбцию вируса на восприимчивой клетке хозяине и пенетрацию в нее.

Большинство вирусов классифицируют на много категорий, основываясь на типах нуклеиновых кислот, образующихся во время репликации, и пути, с помощью которого продуцируется mRNA. В целом, в качестве генетического материала вирусы имеют либо ДНК либо РНК, где нуклеиновая кислота может быть одно- или двухцепочечной. Важные семейства вирусов ДНК типа (также классифицируемые как вирусы Классов I и II - См. Harvey, L. et ah, Molecular Cell Biology, Fourth Edition, W.H. Freeman and Company (2000)) включают аденовирусы, вирусы герпеса, поксвирусы, паповавирусы, денсовирусы и парвовирусы. Семейства вирусов, которые обычно относят к РНК типу (также классифицируют как вирусы III-VI Классов, См. Molecular Cell Biology), включают бирнавирусы, реовирусы, астовирусы, артеривирусы, калицивирусы, коронавирусы, флавивирусы, пикорнавирусы, тогавирусы, полиовирусы, борнавирусы, филовирусы, парамиксовирусы, пневмовирусы, рабдовирусы, буньявирусы и ортомиксовирусы.

Грипп, общеизвестное как "грипп", является инфекционным заболеванием, вызываемым вирусом гриппа, по классификации относящимся к семейству ортомиксовирусов. Известно три вируса типа гриппа, которые поражают людей: грипп A, B и C. Вирусы гриппа A выделены у многих видов животных, а также людей, тогда как установлено, что вирусы гриппа B и C инфицируют преимущественно людей. Вирусы гриппа являются оболочечными вирусами, содержащими негативные одноцепочечные РНК, которые сегментированы и инкапсулированы. Оболочка вируса гриппа характеризуется наличием двух поверхностных гликопротеинов: гемагглютинина и нейраминидазы. Вирионы гриппа A и B являются плейоморфными и обычно имеют диаметр 80-120 нм. Вирион гриппа C имеет множество отличительных свойств и поэтому отличается от близкородственных вирионов A и B.

Вирусы гриппа атакуют дыхательные пути человека (например, нос, гортань и легкие). Например, заражение гриппа A или B часто может вызывать высококонтагиозное, острое респираторное заболевание. Инфекция гриппа обычно включает следующие симптомы: лихорадку, головную боль, утомляемость (может быть значительной), сухой кашель, боль в горле, заложенность носа и боли в теле.

Установлено, что миллионы людей в Соединенных Штатах - приблизительно от 10% до 20% жителей США - заболевают гриппом каждый год. Большая часть этой популяции в основном выздоравливает в течение от одной до двух недель. Хотя в некоторых случаях в результате инфекции гриппа могут развиваться осложнения. В группе риска развития осложнений вследствие гриппа находятся следующие лица: лица в возрасте старше 50 лет, дети в возрасте от 6 до 23 месяцев, женщины, находящиеся на сроке беременности более 3 месяцев, лица, находящиеся в лечебных учреждениях или институтах для хронических больных, лица с хроническими заболеваниями сердца, легких или почек, диабетом или ослабленной иммунной системой. Пневмония, бронхит, энцефалит, средний отит, ринит и синусит являются только несколькими примерами осложнений, которые могут возникнуть в результате инфекции гриппа. Более того, грипп может ухудшать хронические проблемы со здоровьем. Например, у людей с астмой могут развиваться приступы астмы при заболевании гриппом, а у людей с хронической застойной сердечной недостаточностью может наблюдаться ухудшение этого состояния, спровоцированного гриппом.

В Соединенных Штатах в среднем около 36000 человек в год умирают от гриппа и 114000 человек в год в результате инфекции подвергаются госпитализации. Следовательно, вирусы гриппа оказывают значительное влияние на заболеваемость, что приводит к увеличению числа госпитализаций и посещений медицинских работников. Например, часто наблюдается высокий уровень госпитализации субъектов старше 65, а также детей младше 5 лет.

Более того, распространение вируса гриппа среди популяции может приводить к эпидемии, которая имеет значительные экономические последствия. Высокий уровень смертности наблюдался вследствие инфекции гриппа при эпидемиях гриппа в 1957, 1968 и 1977 (Fields Virology, Second Edition, Volume 1, pp. 1075-1152 (1990)). Периодически вирус гриппа вызывает всемирную эпидемию. Например, пандемия гриппа в 1918 году по имеющимся данным стала причиной приблизительно 20 миллионов смертей во всем мире и приблизительно 500000 смертей в Соединенных Штатах (Medical Microbiology, Fourth Edition, University of Texas Medical Branch at Galveston (1996)).

Вирусы гриппа преимущественно передаются от человека к человеку через респираторные капельки (также известно как распространение воздушно-капельным путем), которые высвобождаются при кашле и/или чихании. Вирус гриппа может оставаться взвешенным в воздухе в респираторных капельках в течение 3 часов; но чувствителен к нагреванию и быстро инактивируется при температуре свыше 50ºC. Вирус может выживать в течение 24-48 часов на твердых, непористых поверхностях (например, на телефонных трубках, компьютерной клавиатуре, дверной ручке, столешнице кухонного стола, игрушках); 8 часов на одежде, бумаге и ткани; и пять минут на руках (см. Muir, P, "Treatment of Influenza. Essential CPE. Continuing Education from the Pharmaceutical Society of Australia," Paragon Printers, Australasia, ACT (2002)). К обычным способам передачи относятся контактирование слизистой оболочки с инфицированными респираторными капельками, находящимися в воздухе, контактирование человек - человек, контактирование с зараженными предметами (например, ткани, загрязненные инфицированными выделениями из носа и горла).

Передача вируса гриппа через респираторные капельки может возникать уже за день до того как человек начинает испытывать связанные с гриппом симптомы. Взрослые могут продолжать передавать вирус другим людям в течение последующих от трех до семи дней после начального появления симптомов. В отличие от взрослых, дети способны передавать вирус дольше, чем в течение семи дней. В основном, симптомы начинают проявляться в течение от одного до четырех дней после проникновения вируса в организм. В определенных случаях человек может быть инфицирован вирусом гриппа, но не иметь никаких симптомов. В течение этого времени эти люди все равно способны передавать вирус другим.

Доступно несколько способов профилактики инфекции гриппа, а способ лечения необходимо разрабатывать. Способы профилактики инфекции гриппа включают вакцинацию и противовирусные лекарственные средства. Три противовирусных лекарственных средства (амантадин, римантадин и оцелтамивир) были одобрены в Соединенных Штатах и коммерчески доступны для профилактики и лечения заболевания, вызываемого вирусом гриппа. Тем не менее, эти соединения являются наиболее эффективными при профилактическом применении, что может позволить вирусам гриппа быстро развивать резистентность к обоим соединениям. См. Патенты США № 3352912 и 3152180. Другие соединения, активные в отношении вирусов гриппа, раскрыты в Патентах США № 6271373; 5935957; 5821243; 5684024; 3592934; 3538160; 3534084; 3496228; и 3483254. Существует значительная потребность в новых способах лечения вирусных заболеваний.

Несмотря на то, что наблюдается значительный прогресс в развитии различных способов лечения бактериальных инфекций, существует немного приемлемых способов лечения вирусных инфекций. Как описано выше, противовирусные лекарственные средства и вакцины являются основными способами, применяемыми для профилактики и/или лечения инфекции гриппа. Ганцикловир, ацикловир и фоскарнет в настоящее время применяют для лечения вирусных инфекций герпеса. Несмотря на это, данные способы лечения могут вызывать значительные побочные эффекты, основанные на их отрицательном воздействии на репликацию ДНК клетки хозяина или их воздействии на ограниченное число вирусных инфекций. Помимо этого, как указано выше, известно, что у вирусов развивается резистентность к способам лечения, что приводит к прогрессирующему уменьшению эффективности. Насколько известно, ранее не сообщалось об эффективности соединения цистеамина для лечения вирусных инфекций.

Краткое содержание изобретения

Рассматриваемое изобретение предоставляет материалы и методы лечения субъектов с диагностированными вирусными инфекциями, а также профилактики начала развития вирусных инфекций. В одном варианте осуществления изобретение предоставляет способы лечения симптомов, связанных с вирусной инфекцией. В другом варианте осуществления рассматриваемое изобретение предоставляет способы профилактики или задержки развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией.

Соответственно настоящее изобретение предоставляет способы лечения и/или профилактики вирусных инфекций, вызываемых вирусами с I по V Классы (см. Lodish, H. et al., Molecular Cell Biology, Fourth Edition, W. H. Freeman and Company (2000)) с помощью введения субъекту соединения цистеамина. В частности, настоящее изобретение предоставляет способы лечения и/или профилактики вирусной инфекции I-V Классов; облегчения симптомов, связанных с вирусной инфекцией I-V Классов; а также профилактики или задержки развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией I-V Классов.

Вирусные инфекции, вызываемые следующими типами вирусов, подвергаются лечению и/или профилактике с помощью введения соединения цистеамина, как раскрыто здесь. К вирусам относятся вирусы с двухцепочечной ДНК (dsDNA), одноцепочечной ДНК (ssDNA), двухцепочечной геномной РНК (dsRNA), одноцепочечной позитивной РНК и одноцепочечной негативной РНК, такие как, но не ограничиваясь ими, вирусы гриппа, аденовирусы; вирусы герпеса; папилломавирусы человека; парвовирусы; реовирусы; пикорнавирусы; коронавирусы; флавивирусы; тогавирусы, ортомиксовирусы; буньявирусы; рабдовирусы и парамиксовирусы.

Рассматриваемое изобретение, в частности, применимо к здоровью как человека, так и животных, в особенности животных, инфицированных вирусами I-V Классов. Например, с помощью настоящего изобретения можно осуществлять лечение и/или профилактику вирусных инфекций и результирующих состояний, общих для млекопитающих, не относящихся к человеку, входящих в следующий неограничивающий список: circle virus 2 свиней, пикорнавирус; ортомиксовирус; коронавирус; тогавирус; парамиксовирус; рабдовирус и реовирус, включая любых их мутантов.

Особым образом здесь проиллюстрировано применение соединения цистеамина для лечения и/или профилактики инфекции, вызываемой вирусом гриппа. В соответствии с объектом изобретения, введение соединения цистеамина субъекту до попадания в организм вируса гриппа может помочь защитить субъект от инфекции гриппа или, по крайней мере, гарантировать, что симптомы, связанные с заболеванием, вызываемым вирусом гриппа, будут развиваться в меньшей степени, чем наблюдалось бы при отсутствии соединения цистеамина.

В другом варианте осуществления изобретения соединение цистеамина вводят для профилактики и/или приостановки развития связанных с гриппом осложнений у субъектов, имеющих повышенный риск развития этих осложнений. Например, связанные с гриппом осложнения, такие как энцефалит, бронхит, трахеит, миозит, ринит, синусит, астма, бактериальные инфекции (например, бактериальная инфекция streptococcus aureus, бактериальная инфекция haemophilus influenzae, пневмония, вызванная бактериальная стафилококковой инфекцией), осложнения со стороны сердца (например, фибрилляция предсердий, миокардит, перикардит), синдром Рейе, неврологические осложнения (например, спутанность сознания, конвульсии, психоз, неврит, синдром Гийена-Барре, кома, поперечный миелит, энцефалит, энцефаломиелит), синдром токсического шока, миозит, миоглобинурия и почечная недостаточность, круп, средний отит, вирусные инфекции (т.е. вирусная пневмония), легочный фиброз, облитерирующий бронхиолит, бронхоэктазия, обострения астмы, обострения хронического обструктивного заболевания легких, абсцесс легкого, эмпиема, аспергиллез легких, миозит и миоглобинемия, нарушения работы сердца, ранняя и поздняя смерть плода у беременных женщин, возросшая перинатальная смертность у беременных женщин, конгенитальные аномалии при рождении, могут быть уменьшены посредством потребления согласно рассматриваемому изобретению соединения цистеамина.

В другом варианте осуществления изобретения соединение цистеамина вводят субъекту с диагностированной инфекцией гриппа для облегчения симптомов, связанных с гриппом. Соединение цистеамина можно вводить в отдельности либо совместно с другими известными агентами, которые применяют для лечения/профилактики заболевания, вызванного вирусом гриппа (т.е. вакцины, противовирусные лекарственные средства), или для лечения симптомов, связанных с гриппом (т.е. противокашлевые средства, муколитики и/или отхаркивающие средства; антипиретики и анальгетики; средства против заложенности носа).

В одном варианте осуществления изобретения соединение цистеамина вводят в отдельности либо совместно с другими известными агентами, которые применяют для лечения/профилактики вирусной инфекции. Предпочтительно соединение цистеамина изобретения вводят субъекту до, во время или после контакта с вирусом гриппа совместно с известными агентами, которые применяют для лечения/профилактики заболевания, вызванного вирусом гриппа (т.e. вакцины, противовирусные лекарственные средства) или для лечения симптомов, связанных с гриппом (т.е. противокашлевые средства, муколитики и/или отхаркивающие средства; антипиретики и анальгетики; средства против заложенности носа).

В родственном варианте осуществления изобретения введение соединения цистеамина осуществляют в отдельности либо совместно с другими известными агентами, которые применяют для лечения и/или профилактики инфекции, вызванной вирусом птичьего гриппа (AFV). Согласно настоящему изобретению, соединение цистеамина можно вводить субъекту с помощью инъекций или орального введения для лечения и/или профилактики инфекции AFV.

Предпочтительно, соединение цистеамина вводят в отдельности либо совместно с другими известными агентами, которые применяют для лечения и/или профилактики различных подтипов вирусов птичьего гриппа. Более предпочтительно, соединение цистеамина изобретения вводят отдельно либо совместно с другими известными агентами, которые применяют для лечения и/или профилактики подтипа H5N1 AFV. Доза по крайней мере 0,1 мг/мл гидрохлорида цистеамина, более предпочтительно по крайней мере 1 мг/мл гидрохлорида цистеамина, и еще более предпочтительно по крайней мере 2 мг/мл цистеамина гидрохлорида может быть введена субъекту для лечения и/или профилактики любых подтипов AFV, перечисленных выше, предпочтительно инфекции H5N1 AFV. В определенных предпочтительных вариантах осуществления изобретения доза цистеамина гидрохлорида, вводимого для лечения и/или профилактики инфекции H5N1 AFV, коррелирует с концентрацией вируса, присутствующего в организме субъекта. Более предпочтительно, доза гидрохлорида цистеамина, вводимого для лечения и/или профилактики инфекции H5N1 AFV коррелирует с начальной концентрацией, равной приблизительно LD50. В соответствии с рассматриваемым изобретением, величина суточной дозы соединения цистеамина, вводимой субъекту до вирусной инфекции для защиты субъекта от вирусной инфекции, может составлять приблизительно от 10 мг до 3000 мг. Предпочтительно, соединение цистеамина вводят в количестве от приблизительно 50 мг до 1500 мг в сутки. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения для профилактики/лечения начала развития заболевания, вызываемого вирусом гриппа (таким как вирус птичьего гриппа, гриппа A, гриппа B и гриппа C или любым их мутантом), субъекту вводят приблизительно от 200 мг до 900 мг цистеамина гидрохлорида в сутки. В соответствии с рассматриваемым изобретением, величина суточной дозы соединения цистеамина, вводимого субъекту, у которого были обнаружены симптомы, связанные с вирусной инфекцией, составляет приблизительно от 10 мг до 3000 мг. Предпочтительно, соединение цистеамина вводят в количестве приблизительно от 200 мг до 1500 мг в сутки. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения для лечения и/или уменьшения тяжести симптомов, связанных с заболеванием, вызываемым вирусом гриппа (таким как вирус птичьего гриппа, гриппа A, гриппа B и гриппа C или любым их мутантом), субъекту вводят приблизительно от 450 мг до 900 мг цистеамина гидрохлорида в сутки. В соответствии с рассматриваемым изобретением, величина суточной дозы соединения цистеамина, вводимого субъекту с риском развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией, составляет приблизительно от 10 мг до 3000 мг. Предпочтительно, соединение цистеамина вводят в количестве приблизительно от 200 мг до 1500 мг в сутки. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения для профилактики и/или задержки начала развития осложнений, связанных с гриппом (таким как вирус птичьего гриппа, гриппа A, гриппа B и гриппа C или любым их мутантом), субъекту вводят приблизительно от 450 мг до 900 мг цистеамина гидрохлорида в сутки.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 показан цистеамин как составная часть кофермента A.

На фиг. 2 показан метаболический путь цистеамина.

Подробное раскрытие изобретения

Рассматриваемое изобретение предоставляет материалы и методы лечения вирусных инфекций. В частности, рассматриваемое изобретение предоставляет материалы и методы профилактики вирусной инфекции I-V классов; лечения/улучшения течения симптомов, связанных с вирусными инфекциями I-V Классов; и/или профилактики/задержки начала развития осложнений, связанных с вирусными инфекциями I-V Классов. В предпочтительных вариантах осуществления изобретение предоставляет способы профилактики инфекции гриппа, лечения/улучшения течения симптомов, связанных с инфекцией гриппа, а также профилактики/задержки начала развития осложнений, связанных с инфекцией гриппа, у пациентов, находящихся в зоне повышенного риска.

Применяемый здесь термин "симптом(ы)" относится к общим признакам или указаниям на то, что субъект страдает специфическим состоянием или заболеванием. Например, симптомы, связанные с вирусной инфекцией, как применяются здесь, относятся к общим признакам или указаниям на то, что субъект инфицирован вирусом I-V Класса. К рассматриваемым здесь симптомам, связанным с гриппом, относятся, но не ограничиваясь ими, лихорадка, головная боль, истощение/усталость, мышечные боли, воспаление суставов, раздражение и слезотечение из глаз, дискомфорт, тошнота и/или рвота, озноб, боль в груди, чихание и респираторные симптомы (т.e. воспаление слизистых оболочек дыхательных путей, жжение за грудиной, выделения из носа, жжение/боль в горле, сухой кашель, потеря обоняния).

В соответствии с рассматриваемым изобретением, симптомы, связанные с вирусной инфекцией гриппа, могут появиться в течение от 24 до 48 часов после инфицирования и могут начаться внезапно. Дрожь или ощущение озноба часто являются первыми указаниями на грипп. Лихорадка обычно наблюдается в течение первых нескольких дней, и температура может подниматься до 102°F до 103°F. Во многих случаях субъекты чувствуют себя значительно больными, чтобы оставаться в постели в течение нескольких дней; субъекты часто испытывают боли и ломоту в теле, наиболее ярко выраженные в спине и ногах. Применяемый здесь термин "осложнение(я)" относится к патологическому процессу или явлению, возникающему во время заболевания или состояния, не являющемуся существенной частью заболевания или состояния; где оно может развиваться в результате из заболевания/состояния или по независимым причинам. Следовательно, термин осложнение(я) относится к медицинским/клиническим проблемам, которые наблюдаются у субъектов с диагнозом вирусной инфекции I-V Класса.

Одним из осложнений вирусной инфекции гриппа является то, что вирусная инфекция гриппа может ухудшать хронические проблемы со здоровьем. Например, к осложнениям, связанным с вирусной инфекцией, относятся, но не ограничиваясь ими, энцефалит, бронхит, трахеит, миозит, ринит, синусит, астма, бактериальные инфекции (т.e. бактериальная инфекция streptococcus aureus, бактериальная инфекция haemophilus influenzae, пневмония, вызванная бактериальной стафилококковой инфекцией), осложнения со стороны сердца (например, фибрилляция предсердий, миокардит, перикардит), синдром Рейе, неврологические осложнения (т.е. спутанность сознания, конвульсии, психоз, неврит, синдром Гийена-Барре, кома, поперечный миелит, энцефалит, энцефаломиелит), синдром токсического шока, миозит, миоглобинурия и почечная недостаточность, круп, средний отит, вирусные инфекции (т.е. вирусная пневмония), легочный фиброз, облитерирующий бронхиолит, бронхоэктазия, обострения астмы, обострения хронической обструктивной болезни легких, абсцесс легкого, эмпиема, аспергиллез легких, миозит и миоглобинемия, нарушение работы сердца, ранняя и поздняя смерть плода у беременных женщин, возросшая перинатальная смертность у беременных женщин, конгенитальные аномалии при рождении.

Применяемые здесь термины "грипп", "вирус гриппа" или "грипп" относятся к вирусам РНК семейства ортомиксовирусов, включающего грипп A, грипп B и грипп C и их мутантов. К рассматриваемым вирусам гриппа относятся вирусы, которые имеют два антигенных гликозилированных энзима на своей поверхности: нейраминидазу и гемагглютинин. Различные подтипы вируса гриппа можно лечить с применением материалов и методов изобретения, включая, но не ограничиваясь ими, подтипы H1N1, H1N2, H2N2, H3N2, H3N8, H5N1, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H9N2 и H10N7, включая следующие подтипы, широко известные как: "испанский грипп", "азиатский грипп", "гонконгский грипп", "птичий грипп", "свиной грипп", "лошадиный грипп" и "собачий грипп".

Применяемый здесь термин "субъект" описывает организм, включая людей и млекопитающих, для которого предоставляется лечение композициями настоящего изобретения. К видам млекопитающих, для которых эффективны раскрытые способы лечения, относятся, но не ограничиваясь ими, обезьяны, шимпанзе, орангутанги, люди, мартышки; и одомашненные животные (т.e. домашние животные), такие как собаки, кошки, мыши, крысы, морские свинки и хомяки. Термины "совместное введение" и "совместно вводимые", применяемые здесь, включают введение соединения или применение терапевтического способа, подходящего для применения со способами изобретения (введение соединения цистеамина) при лечении вирусных инфекций I-V Классов или при лечении симптомов/осложнений, связанных с инфекцией I-V Классов. Субъекту с диагностированной инфекцией гриппа соединение цистеамина можно вводить совместно с вакцинами, противовирусными лекарственными средствами, противокашлевыми средствами, муколитиками и/или отхаркивающими средствами; антипиретиками и анальгетиками; средствами против заложенности носа. В качестве примера соединение может быть предоставлено в смеси с соединением цистеамина, например в фармацевтической композиции; или соединение и цистеамин могу быть предоставлены в виде отдельных соединений, например в виде отдельных фармацевтических композиций, вводимых последовательно, одновременно или в разное время. Если соединение цистеамина и известный агент (или терапевтический способ) для лечения/профилактики инфекции гриппа и/или лечения связанных с гриппом симптомов/осложнений вводят раздельно, предпочтительно их вводить с таким интервалом времени, чтобы соединение цистеамина и известный агент (способ) не могли взаимодействовать.

В определенных вариантах осуществления изобретения соединение цистеамина можно вводить совместно с, но не ограничиваясь ими, вакциной, противовирусными лекарственными средствами, такими как амантадин, римантадин, рибавирин, идоксуридин, трифлуридин, видарабин, ацикловир, ганцикловир, фоскарнет, зидовудин, диданозин, залцитобин, ставудин, фамцикловир, оцелтамивир и валацикловир (материалы и/или способы, применяемые для лечения вирусной инфекции); или противокашлевыми средствами, муколитиками, и/или отхаркивающими средствами; антипиретиками и анальгетиками; средствами против заложенности носа (материалы, применяемые для лечения симптомов, связанных с инфекцией гриппа). В качестве примера соединение для применения с соединением цистеамина изобретения может быть предоставлено в смеси с соединением цистеамина, например в фармацевтической композиции. В альтернативном варианте соединение и цистеамин могут быть предоставлены в виде отдельных соединений, например в виде отдельных фармацевтических композиций, вводимых последовательно, одновременно или в разное время. Если соединение цистеамина и известный агент (или терапевтический способ) для лечения/профилактики инфекции гриппа и/или лечения связанных с гриппом симптомов/осложнений вводят раздельно, предпочтительно их вводить с таким интервалом времени, чтобы соединение цистеамина и известный агент (способ) не могли взаимодействовать.

Применяемая здесь ссылка на "соединение цистеамина" включает цистеамин, различные соли цистеамина, которые включают фармацевтически приемлемые соли соединения цистеамина, а также пролекарства цистеамина, которые могут, например, легко подвергаться метаболизму в организме с образованием цистеамина. Также в объем рассматриваемого изобретения охватывает аналоги, производные, конъюгаты и метаболические предшественники (такие как цистеин, цистамин, пантетин и подобные), а также метаболиты (такие как таурин, гипотаурин и подобные) цистеамина, которые обладают способностью, как описано здесь, лечения и/или профилактики стресса и связанных со стрессом симптомов/осложнений посредством уменьшения уровней кортизола, а также усиления иммунной активности. Различные аналоги, производные, конъюгаты и метаболиты цистеамина хорошо известны и легко применяются специалистами в области техники и включают, например, соединения, композиции и способы доставки, как изложено в Патентах США № 6521266; 6468522; 5714519; и 5554655.

Как рассмотрено здесь, соединение цистеамина включает пантотеновую кислоту. Пантотеновая кислота является витамином природного происхождения, который преобразуется у млекопитающих в кофермент A, вещество, жизненно необходимое для многих физиологических реакций. Цистеамин является составной частью кофермента A, повышение уровней кофермента А приводит к повышенным уровням циркулирующего цистеамина. Соли щелочных металлов, такие как трехосновный магния фосфат и сульфит магния (соли Epsom), усиливают образование кофермента A. Кроме того, распад кофермента А до цистеамина усиливается при наличии восстановителя, такого как лимонная кислота. Таким образом, комбинация пантотеновой кислоты и солей щелочных металлов приводит к повышенной продукции кофермента А и соответственно цистеамина.

Применяемый здесь термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к любой соли соединения цистеамина, которая является фармацевтически приемлемой и значительно не уменьшает или не ингибирует активность соединения цистеамина. Подходящие примеры включают соли присоединения кислот, с органической или минеральной кислотой, такой как ацетат, тартрат, трифторацетат, лактат, малеат, фумарат, цитрат, метан, сульфонат, сульфат, фосфат, нитрат или хлорид. Соответственно в одном варианте осуществления настоящего изобретения преимуществ цистеамина, как сформулировано здесь, можно достичь с помощью активации эндогенной продукции цистеамина посредством естественного метаболического процесса, например посредством активности кофермента A или как предшественника и/или как метаболита цистеина (см. фиг. 1 и 2). Этого можно достичь, например, с помощью введения пантотеновой кислоты.

Применяемый здесь термин «эффективное количество» относится к количеству, необходимому для получения желаемого биологического ответа. В соответствии с настоящим изобретением, эффективным количеством соединения цистеамина является количество, необходимое для лечения/профилактики вирусной инфекции Классов I-V; лечения/уменьшения интенсивности симптомов, связанных с вирусными инфекциями Классов I-V; и/или профилактики/задержки/уменьшения интенсивности начала развития осложнений, связанных с вирусными инфекциями Классов I-V, в предпочтительном варианте осуществления эффективным количеством соединения цистеамина является количество, необходимое для лечения/профилактики инфекции гриппа; лечения/уменьшения интенсивности симптомов, связанных с инфекцией гриппа; и/или профилактики/задержки/уменьшения интенсивности начала развития осложнений у пациентов с повышенным риском для уменьшения числа осложнений, связанных с инфекцией гриппа. Уменьшение тяжести симптома и/или осложнения может составлять 5%, 10%, 15%, 20%, 25% 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99%.

Применяемый здесь термин "вирусы I-V Классов" относится к различным классам вируса, идентифицированного в соответствии с составом генома и стратегией для синтеза мРНК, как описано в Lodish, H. et al, Molecular Cell Biology, Fourth Edition, W.H. Freeman and Company (2000). Вирусы Классов I-V идентифицируют следующим образом:

- вирусы Класса I содержат одну молекулу двухцепочечной ДНК;

- вирусы Класса II содержат одну молекулу одноцепочечной ДНК;

- вирусы Класса III содержат двухцепочечную геномную РНК;

- вирусы Класса IV содержат одну цепь вирусной мРНК (также известную как позитивная/плюс цепь геномной РНК), где вирусная мРНК кодирует белки и сама является инфекционной; и

- вирусы Класса V содержат одну цепь последовательности РНК, которая является комплементарной геномной вирусной мРНК (также известной как негативная/минус цепь геномной РНК), где геномная РНК действует как шаблон для синтеза мРНК, но самостоятельно не кодирует белки.

Настоящее изобретение предоставляет материалы и способы лечения и/или профилактики вирусной инфекции Классов I-V посредством введения субъекту соединения цистеамина. Лечение и/или профилактику вирусных инфекций, являющихся результатом следующих типов вирусов, осуществляют с помощью введения соединения цистеамина, как раскрыто здесь. К вирусам относятся вирусы с двухцепочечной ДНК (dsДНК), одноцепочечной ДНК (ssДНК), двухцепочечной геномной РНК (dsРНК), односпиральной позитивной РНК и одноцепочечной негативной РНК. К рассмотренным вирусам, лечение которых можно осуществлять в соответствии с рассматриваемым изобретением, относятся, но не ограничиваясь ими, арбовирусы (включая, но не ограничиваясь ими, вирус лихорадки Денге, желтую лихорадку и т.п.); аденовирусы (включая, но не ограничиваясь ими, острое респираторное заболевание, пневмонию, конъюнктивит, гастроэнтерит, фарингит, острый геморрагический цистит, африканскую лихорадку свиней, цирковирус свиней, аденовирусы свиней A, B и C); вирусы герпеса (включая, но не ограничиваясь ими, вирус простого герпеса, вирус ветряной оспы (ветряная оспа и опоясывающий лишай), вирус Энштейн-Барра); папилломавирусы человека (включая, но не ограничиваясь ими, HPV типов 1-65); парвовирусы (включая, но не ограничиваясь ими, парвовирус B 19, парвовирус собак); реовирусы (включая, но не ограничиваясь ими, орбивирус, ротавирус, аквареовирус, колцивирус); пикорнавирусы (включая, но не ограничиваясь ими, энтеровирус, риновирус, гепатовирус); коронавирусы (включая, но не ограничиваясь ими, коронавирус и торовирус); флавивирусы (включая, но не ограничиваясь ими, петсивирус, вирусы, подобные вирусу гепатита C); тогавирусы (включая, но не ограничиваясь ими, альфавирус и рубивирус), ортомиксовирусы (включая, но не ограничиваясь ими, вирусы инфлюэнцы A, B и C, вирус инфлюэнцы птиц, вирус Тогото); буньявирусы (включая, но не ограничиваясь ими, Хантавирус, Найровирус, флебовирус); рабдовирусы (включая, но не ограничиваясь ими, вирус бешенства, эфемеровирус, везикуловирус); и парамиксовирусы (включая, но не ограничиваясь ими, вирус кори и вирус паротита).

Настоящее изобретение особенно применимо к состоянию здоровья субъекта, не относящегося к человеку, особенно к субъектам, не относящимся к человеку, инфицированным вирусом Классов I-V. Например, с помощью настоящего изобретения можно осуществлять лечение и/или профилактику заболеваний, вызываемых вирусами, и результирующих состояний, общих для субъектов, не относящихся к человеку, входящих в следующий неограничивающий список: пикорнавирус (энцефаломиелит птиц, гепатит пекинских уток и калицивирусная (кошачья) инфекция); ортомиксовирус (чума домашних птиц и гриппа птиц (H5N1)); коронавирус (инфекционный бронхит и энтерит домашних птиц, вызываемый коронавирусом, и собачий коронавирус у собак); тогавирус (энцефалит фазанов); парамиксовирус (болезнь Ньюкасла у домашних птиц и чума собак и парагриппа собак); рабдовирус (бешенство и вирусная геморрагическая болезнь рыб); и реовирус (инфекционный бурсит домашних птиц).

Относительно субъектов, относящихся к человеку, настоящее изобретение особенно подходит для лечения и/или профилактики вирусной инфекции гриппа, особенно гриппа птиц. Согласно настоящему изобретению, соединение цистеамина можно применять для лечения и/или профилактики различных штаммов гриппа птиц, включая вирусы подтипа H1N1, H1N2, H2N2, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H9N2 и H10N7. В одном варианте осуществления цистеамина гидрохлорид вводят субъектам (или человеку или животному) для лечения и/или профилактики гриппа птиц H5N1. Известно, что цистеамина гидрохлорид можно применять в отдельности либо одновременно с другими известными агентами, эффективными для лечения и/или профилактики инфекции гриппа.

В сопутствующем варианте осуществления соединение цистеамина (такое как цистеамина гидрохлорид) вводят в отдельности либо одновременно с другими известными агентами, которые используют для лечения и/или профилактики инфекции вируса гриппа птиц (AIV). Соединение цистеамина можно вводить субъекту с помощью инъекции или орального введения.

Предпочтительно, дозу по крайней мере 0,1 мг/мл цистеамина гидрохлорида, более предпочтительно по крайней мере 1 мг/мл цистеамина гидрохлорида, и еще более предпочтительно по крайней мере 2 мг/мл цистеамина гидрохлорида можно вводить субъекту для лечения и/или профилактики AIV H5N1 инфекции.

В определенных предпочтительных вариантах осуществления доза цистеамина гидрохлорида, применяемого для лечения и/или профилактики AIV (включая вирусы подтипа H1N1, H1N2, H2N2, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H9N2 и H10N7), коррелирует с концентрацией вируса, присутствующего у субъекта. Более предпочтительно, дозировка цистеамина гидрохлорида, применяемого для лечения и/или профилактики AIV H5N1 инфекции, коррелирует с концентрацией приблизительно LD50 вируса, присутствующего у субъекта.

Композиции изобретения можно применять с помощью различных путей введения, включая, например, формы, подходящие для орального введения, такие как таблетки, капсулы или подобные лекарственные формы, или с помощью парентерального, внутривенного, внутримышечного, трансдермального, буккального, подкожного пути введения, в виде суппозиториев или с помощью другого пути. Такие композиции упоминаются здесь в основном как «фармацевтические композиции». Как правило, они могут быть представлены в лекарственной форме для однократного применения, а именно в физически раздельных единицах, подходящих для однократных доз для введения человеку, где каждая единица содержит заданное количество активного компонента, вычисленное для получения желаемого терапевтического эффекта совместно с одним или более другим фармацевтически приемлемым компонентом, то есть разбавителем или носителем.

Соединения цистеамина рассматриваемого изобретения можно составить согласно известным способам получения фармацевтически эффективных композиций. Композиции описаны во множестве источников, которые известны и легко доступны для специалистов в области техники. Например, в Remington 's Pharmaceutical Science (Martin EW [1995] Easton Pennsylvania, Mack Publishing Company, 19th ed.) описаны композиции, которые можно применять совестно с настоящим изобретением. К композициям, подходящим для парентерального введения, относятся, например, водные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, антимикробные добавки и растворенные вещества, которые придают композиции изотоничность крови заданного реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие и загущающие агенты. Композиции могут находиться в емкостях с однократной дозой или мультидозой, например, в герметичных ампулах и пробирках, и их можно хранить в высушенном сублимацией (лиофилизированном) состоянии, требующем перед применением только наличия стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций. Экстемпоральные инъекционные растворы и суспензии можно изготовить из стерильного порошка, гранул, таблеток и т.д. Необходимо понимать, что в дополнение к компонентам, в особенности упомянутым выше, композиции настоящего изобретения могут включать другие агенты, известные в технике, имеющие отношение к типу рассматриваемой композиции. К композициям, включающим соединение цистеамина, относятся композиции, подходящие для орального, ректального, назального, местного (включая буккальный и сублингвальный), влагалищного, парентерального (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, интрадермальный, интратекальный и эпидуральный) путей введения, а также введения в глаза. Композиции для удобства могут быть представлены в лекарственной форме для однократного введения и могут быть получены с помощью любого из способов, хорошо известных в области фармацевтической техники. Такие способы включают шаг связывания объединения цистеамина с носителем, который составляет один или более дополнительных компонентов. В основном композиции получают с помощью однородного и тесного объединения соединения цистеамина с жидкими носителями или тонкоизмельченными твердыми носителями или обоими, и затем, при необходимости, придания продукту формы. В определенных вариантах осуществления соединение цистеамина может предоставляться в композиции для применения в кожном пластыре. Введение соединения цистеамина в соответствии с настоящим изобретением можно осуществлять с помощью любого подходящего способа и техники, известных в настоящее время или перспективно специалистам в уровне техники. В предпочтительном варианте осуществления соединению цистеамина придают патентоспособную и удобную для применения форму оральной композиции, такой как пилюля, леденец, таблетка, жевательная форма, напиток и т.д. Препарат употребляют во время, до, либо после воздействия стрессового явления и/или когда необходимо усилить иммунную активность (например, после выявления инфекции гриппа).

В соответствии с изобретением, композиции включают в качестве активного компонента эффективное количество цистеамина и одного или более нетоксичных, фармацевтически приемлемых носителей или разбавителей. Примеры таких носителей для применения в изобретении включают этанол, диметилсульфоксид, глицерин, оксид кремния, оксид алюминия, крахмал, сорбит, инозит, ксилит, D-ксилозу, маннит, порошковую целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, тальк, коллоидный диоксид кремния, карбонат кальция, карбонат магния, фосфат кальция, алюмосиликат кальция, гидроокись алюминия, натрия крахмала фосфат, лецитин и эквивалентные носители и разбавители. Для обеспечения введения таких лекарственных форм для желаемого терапевтического эффекта композиции изобретения обычно включают приблизительно от 0,1% до 95% всей композиции, включая носитель или разбавитель. Применяемая дозировка может различаться в зависимости от возраста, веса, здоровья или пола человека, лечение которого проводится. В одном варианте осуществления доза цистеамина, водимая пациенту для проявления желаемой реакции, составляет от приблизительно 10 мг до приблизительно 3000 мг в сутки. К желаемой реакции может относиться (1) профилактика вирусных инфекций Классов I-V; предпочтительно инфекции гриппа; (2) уменьшение тяжести, продолжительности, или интенсивности симптомов, ассоциированных с Классами I-V инфекции, предпочтительно симптомов, ассоциированных с инфекцией гриппа; и (3) профилактика, задержка развития или уменьшение тяжести, продолжительности или интенсивности осложнений, связанных с вирусными инфекциями Классов I-V, осложнений, связанных с инфекциями гриппа. Предпочтительно, цистеамина гидрохлорид вводят ежедневно в дозе приблизительно от 50 мг до 1000 мг для получения желаемой реакции. В более предпочтительном варианте осуществления, доза цистеамина гидрохлорида, вводимая пациенту для получения желаемой реакции, составляет приблизительно от 200 до 900 мг в сутки.

Далее представлены примеры, которые иллюстрируют способы практического осуществления изобретения. Эти примеры не должны быть рассмотрены как ограничивающие. Все проценты выражены по весу, и все пропорции смеси и растворителя выражены по объему, если не указано иначе.

Пример 1. Лечение симптомов, связанных с гриппом

Субъект мужского пола, инфицированный вирусом гриппа, демонстрирующий симптомы (отделяемое из носа, лихорадка, истощение), связанные с инфекцией гриппа, первоначально получал лечение отпускаемыми без рецепта назальными противоотечными средствами и муколитическими препаратами.

Лекарственные препараты, отпускаемые без рецепта, оказались неэффективны в лечении связанных с гриппом симптомов в течение 24 часов.

После отсутствия эффекта от лекарственных средств, отпускаемых без рецепта, субъекту орально вводили цистеамина гидрохлорид в дозе приблизительно 700 мг. В течение 24 часов исчезли симптомы, связанные с инфекцией гриппа. У субъекта наблюдалось общее ощущение состояния здоровья.

Пример 2. Исследование противовирусной активности цистеамина в отношении вируса гриппа птиц H5N1: исследования in vitro и in vivo с применением озелтамивира фосфата в качестве контроля

Согласно одному варианту осуществления изобретения, цистеамин демонстрирует противовирусную активность в отношении вируса гриппа птиц H5N1. Предмет настоящего изобретения имеет особое преимущество вследствие его неожиданных результатов воздействия на вирус гриппа птиц. Например, как описано ниже, цистеамин особенно эффективен в лечении вируса гриппа птиц H5N1, даже более эффективен, чем озелтамивира фосфат (дженериковое название TAMIFLU®), который является лицензионным лекарственным средством в отношении вируса инфлюэнцы птиц.

Материалы и Способ

Цистеамин (в дальнейшем называемый «TG21»; включающий 99% цистеамина), поставлен Omega Bio-Pharma (H.K.) Limited. В этом эксперименте применяли оплодотворенные яйца от свободных от специфических патогенов (SPF) кур (Пекин, Китай).

CV штамм H5N1 вирусов гриппа птиц выделили от инфицированных цыплят. Цыплят Roman приобрели у Hebei без иммунизации вакциной вируса гриппа птиц. TAMIFLU® (Roche (China) Ltd., Shanghai, China) использовали, как описано здесь.

Оценка токсичности TG21 на оплодотворенных куриных яйцах

Один грамм TG21 растворили в 10 мл (1:10) 0,01 моль/л, в PBS (1:10, 10 мг/мл) c pH 7,2, и затем изготовили 2-кратные серийные разведения от 1:10 до 1:5120. Разведенное лекарственное средство (опытная группа) или буфер PBS (контрольная группа) инокулировали в хориоаллантоисные полости 10-дневных оплодотворенных куриных яиц, по 5 яиц на каждое разведение. Яйца инкубировали при 37ºC и проводили мониторинг дважды в день в течение 5 дней для наблюдения выживания эмбриона и определения LD50 (50% летальная доза вируса).

Оценка EID50 вируса гриппа птиц H5N1 в оплодотворенных куриных яйцах

Из исходного раствора штамма CV вируса гриппа птиц изготовили 10-кратные серийные разведения с 0,01 М PBS с pH 7,2 от 10^-1 до 10^-10. 0,2 мл разведенного вируса (опытная группа) или буфера PBS (контрольная группа) инокулировали в хориоаллантоисные полости 10-дневных оплодотворенных куриных яиц, 5 яиц на каждое разведение. Яйца инкубировали при 37ºC и проводили мониторинг дважды в день в течение 5 дней для наблюдения выживания эмбриона. EID50 (доза, инфицирующая 50% яиц) вычислили на основе способа Reed-Muench.

Оценка противовирусного воздействия TG21 на грипп птиц на оплодотворенных куриных яйцах

Один грамм TG21 растворили в 10 мл 0,01 моль/л, в PBS с pH 7,2 (1:10, 100 мг/мл), и затем изготовили 2-кратные серийные разведения от 1:10 до 1:5120. Разбавленный раствор TG 21 инкубировали с тем же объемом 10 или 100-кратной EID50 штамма CV вируса гриппа птиц H5N1 при комнатной температуре в течение 30, 60 и 120 минут соответственно, а затем 0,2 мл раствора смеси вируса и лекарственного средства инокулировали в хориоаллантоисные полости 10-дневных оплодотворенных куриных яиц SPF. Все оплодотворенные яйца инкубировали при 37ºC и проводили мониторинг дважды в день в течение 5 дней для наблюдения выживания эмбрионов. Вычислили IC50.

В качестве позитивного контроля противовирусный эффект TAMIFLU® на вирус гриппа птиц оценивали при 100-кратной EID50.

Оценка LD50 вируса гриппа птиц на цыпленке

Из исходного раствора штамма CV вируса гриппа птиц изготовили 10-кратные серийные разведения с 0,01 М PBS с pH 7,2 от 10^-1 до 10^-9, и затем использовали их для инфицирования цыплят с помощью закапывания в нос, каждое разведение на 10 цыплят. Мониторинг животных производили дважды в день в течение 7 дней для наблюдения выживаемости. LD50 вирусов гриппа птиц для цыплят вычислили в соответствии с выживаемостью животных.

Оценка эффективности TG21 в отношении гриппа птиц у цыплят.

Цыплятам Roman в возрасте от 4 до 6 недель вводили TG21 через питьевую воду, в дозах 40, 20, 10 мг TG21/цыпленка - день^-1 в течение трех дней, затем производили заражение цыплят 2, 5, 25, 250 EID50 с помощью закапывания в нос однократно в день в течение трех дней. Животным продолжали получать лечение TG21 в одинаковых дозах в течение пяти дней после заражения. Мониторинг цыплят проводили дважды в день в течение 7 дней. Параллельно проводили отрицательный контроль без лечения. Выживание животных регистрировали и оценивали эффективность лекарственного средства TG21 в соответствии со следующей формулой: эффективность = (показатель смертности в контрольной группе - показатель смертности опытной группы)/(показатель смертности контрольной группы) × 100 %.

Результаты

1. Токсичность

Через 120 часов после инокуляции TG21 в оплодотворенные яйца обнаружили некоторую токсичность при больших дозах в пределах от приблизительно 100 мг/мл (разбавление 1:10) до 25 мг/мл (1:40). LD50 TG21 для оплодотворенных куриных яиц составила 32,1 мг/мл. При дозах менее 12,5 мг/мл (1:80) не обнаружили никаких побочных эффектов.

2. EID50 вируса инфлюэнцы птиц H5N1 для оплодотворенных куриных яиц, и LD50 для цыпленка

Когда исходный раствор вируса разбавили более чем в 10^-9 раз (концентрация 10^-9), оплодотворенные яйца выжили. Согласно Способу Reed-Muench, EID50 вируса гриппа птиц H5N1 для оплодотворенных куриных яиц вычисляли как 10^-8,17. При разбавлении исходного раствора вируса до 10^-8 или ниже исследуемый вирус не был смертельным. LD50 гриппа птиц H5N1 для цыпленка составила 10^-5,41/0,2 мл.

3. Противовирусное воздействие TG21 на вирус гриппа птиц H5N1 в оплодотворенных куриных яйцах.

До введения в оплодотворенные куриные яйца вирус гриппа птиц H5N1 обработали разными разведениями TG21 в течение 30, 60, и 120 минут. IC50s TG21 в отличие от вируса гриппа птиц H5N1 составляли 15,6, 14,9, и 6,8 мг/мл соответственно, при времени обработки 30, 60, и 120 минут до 10 раз.

EID50 доза вирусного заражения. IC50 составляли 17,5 и 16,1 мг/мл соответственно, когда вирус обрабатывали TG21 в течение 30 и 120 минут до инокуляции при дозах вируса в 10 раз больше LD50 (см. таблицу 1 ниже).

В группе позитивного контроля, которую обрабатывали TAMEFLU®, IC50 TAMIFLU® в отличие от гриппа птиц H5N1 в оплодотворенных куриных яйцах составляли 25,1 и 19,4 мг/мл соответственно, при 30 и 120 минутах воздействия до введения при дозе вируса в 100 раз больше EID50. В группе отрицательного контроля (никакое лекарственное средство не вводили) все оплодотворенные куриные яйца погибли.

Таблица 1   Противовирусное воздействие TG21 на H5Nl AIV
в оплодотворенных куриных яйцах     Примечание: Мин=минуты; ^aEID50: доза лекарственного средства, инфицирующая 50% яиц; ^bВремя взаимодействия лекарственного средства и вируса до инокуляции; ^сначальная концентрация лекарственного средства составляет 100 мг/мл; ^dвыжившие/общее количество; ^eIC50: концентрация лекарственного средства, необходимая для выживания 50% эмбрионов.  

Эффективность TG21 в отношении вирусов гриппа

птиц H5N1 у цыплят

Цыплятам в возрасте 4-6 недель вводили 10-40 мг TG21/цыпленка.день-1 через питьевую воду в течение трех дней до и в течение пяти дней после заражения высокой дозой вируса (250X LD50), средней дозой вируса (25X LD50), и низкой дозой вируса (2,5X LD50) инфекционных вирусов гриппа птиц H5N1. Результаты противовирусного воздействия TG21 на вирус гриппа птиц H5N1 у цыплят показаны ниже в таблице 2. Все опытные цыплята умерли в течение трех дней при инфицирующей дозе вируса, в 250 раз превышающей LD50, включая животных в контрольной группе, получавших TAMIFLU®. Это может наблюдаться вследствие слишком высокой дозы A вирусной инфекции, такой что никакое медикаментозное лечение, включая TAMIFLU®, не может обеспечить эффективную защиту против вирусной инфекции.

Защита TG21 от вируса гриппа птиц H5N1 у цыплят в дозах 40, 20, 10 мг/цыпленка.день^-1 составляла 100%, 62,5% и 87,5%, соответственно, при инфицирующей дозе вируса в 2,5 раза превышающей LD50, и 70%, 80% и 50% соответственно, при инфицирующей дозе вируса в 25 раз превышающей LD50. Статистическое различие эффективности TG21 и негативного контроля (отсутствие лекарственного средства) было чрезвычайно значительным (весь p объем, определенный при помощи теста хи-квадрат, <0,01). Эффективность TAMIFLU® (5 мг/цыпленка - день^-1) составляла 50% при заражающих дозах вируса в 25 раз превышающих LD50. Не обнаружено никакого значительного различия между LD50 TG21 (10 мг /цыпленка - день^-1) и TAMIFLU® (5 мг/ цыпленка - день^-1) (P> 0,05) при заражающих дозах вируса в 25 раз превышающих LD50 (таблица 2).

Таблица 2   Противовирусное воздействие TG21 на вирус гриппа
птиц H5Nl у цыплят     Примечание: ** P ‹0,01 сравнивают с контрольной группой с помощью способа хи-квадрат; a: выжившие/общее количество  

Резюме

Десятидневные оплодотворенные яйца от куриц SPF («свободный от специфических патогенов») и цыплят в возрасте 4-6 недель использовали в этом исследовании для тестирования противовирусного воздействия TG21 на штамм CV вируса гриппа птиц H5N1. В первую очередь определяли LD50 (50% смертельная доза) вируса для цыпленка, EID50 (доза, инфицирующая 50% яиц) вируса для оплодотворенных яиц, и LD50 TG21 для оплодотворенных яиц. При исследованиях in vitro вирусы подвергали предварительной инкубации с TG21 в различной концентрации в течение 30-120 минут соответственно, а затем инокулировали в оплодотворенные яйца, чтобы наблюдать выживаемость эмбрионов. Вычисляли IC50 (концентрация лекарственного средства, требуемая для выживания 50% эмбрионов) TG21. При исследованиях in vivo цыплятам вводили TG21 в высоких, средних и низких дозах ATV через питьевую воду в течение трех дней до и через пять дней после заражения вирусами. Зарегистрировали выживаемость животных и произвели оценку эффективности лекарственного средства. В параллельных исследованиях произвели позитивный контроль (TAMIFLU®) и негативный контроль (без лекарственного средства). Результаты показали, что (1) IC50 TG21 в отношении вирусов гриппа птиц H5N1 в оплодотворенных куриных яйцах составили 15,6, 14,9, 6,8 мг/мл соответственно, когда вирусов в дозе, в 10 раз превышающей EID50, обрабатывали TG21 за 30, 60, 120 минут до инокуляции, 17,5 и 16,1 мг/мл соответственно, когда вирусов в дозе, в 100 раз превышающей EID50, обрабатывали лекарственным средством за 30 и 120 минут до инокуляции. IC50s TAMIFLU® в отношении вируса гриппа птиц H5N1 в оплодотворенных куриных яйцах составили 25,1 и 19,4 мг/мл соответственно, когда вирусов в дозах, в 100 раз превышающих EID50, инкубировали с TAMIFLU® в течение 30 и 60 минут до инокуляции; и (2) эффективность TG21 в дозах 40, 20, 10 мг/цыпленка - день^-1 в отношении вируса гриппа птиц H5N1, индуцирующего гибель цыплят, составляла 100%, 62,5% и 87,5% соответственно, при заражающей дозе вируса в 2,5 раза превышающей LD50, и 70%, 80% и 50% при заражающей дозе вируса в 25 раз превышающей LD50, тогда как эффективность TAMIFLU® (5 мг/цыпленка - день^-1) составила 50%. Эти результаты позволяют предположить, что цистеамин обладает сильной противовирусной активностью в отношении вируса гриппа птиц H5N1, где она может обеспечить подобную или даже лучшую защиту от вируса гриппа птиц H5N1, по сравнению с современными лицензионными лекарственными средствами от гриппа птиц, такими как TAMIFLU®.

Пример 3. Противовирусная активность цистеамина в отношении вируса гриппа птиц H5N1 у мышей

Материалы и Способ

Цистеамин (в дальнейшем именуемый как "TG21"; включающий 99% цистеамина), был поставлен Omega Bio-Pharma (H.K.). Limited. Штамм WV вируса гриппа птиц H5N1 выделили от инфицированных цыплят. TAMIFLU® (Roche (China) Ltd., Shanghai, China) использовали, как описано здесь

Оценка 50% смертельной дозы вируса гриппа птиц H5N1 у мышей (mLD50)

Исходный раствор вируса птичьего гриппа H5N1 (Штамм WV) первоначально развели 1:5, а затем изготовили 5 четырехкратных серийных разведений с PBS (1:5 к 1:1280). Мышиных особей женского пола в возрасте от 6 до 8 недель обезболили при помощи внутримышечной инъекции 100 мкл 1% барбитурата натрия и затем инокулировали при помощи закапывания 50 мкл разведенного штамма WV вируса гриппа птиц H5N1 в носовую полость каждой мыши (n=10 мышей на каждое разведение). Мониторинг животных проводили ежедневно в течение 14 дней, и вычислили mLD50 на основании гибели мышей с помощью способа Reed-Muench. Результаты указывают на то, что выживаемость мышей составляет 0% в группах разведения вируса 1:5, 10% в группах разведения вируса 1:20, 25% в группах разведения вируса 1:80, 80% в группах разведения вируса 1:320, и 90% в группах разведения вируса 1:1280. mLD50 вируса гриппа птиц H5N1 (штамм WV) составила 10^-2,1509/0,05 мл или 1:141,5 разведение/0,05 мл.

Терапевтическая роль цистеамина у мышей, инфицированных вирусом гриппа птиц

Пятьдесят мышей женского пола (6-8 недель) распределили на три группы, получающие лечение (T1, T2 и T3), одну группу негативного контроля (не получающую лечения), и одну группу позитивного контроля (TAMIFLU®), по 10 мышей в каждой группе. После анестезии посредством внутримышечной инъекции 100 мкл 1% барбитурата натрия всех мышей инокулировали интраназально вирусом гриппа H5N1 в дозе, в 10 раз превышающей mLD50, в 50 мкл PBS. В течение одного часа после заражения животные получали лечение в течение 12 дней с помощью орального введения с искусственным питанием TG21 в суточной дозе 4,8, 2,4, 1,2 мг на мышь в группах лечения TITS соответственно, TAMIFLU ® 0,3 мг на мышь в сутки в группе позитивного контроля и такой же объем PBS в группе негативного контроля. Мониторинг мышей проводили дважды в день в течение 14 дней для выявления клинических симптомов инфекции и для определения выживаемости. Вычислили показатель защиты TG21 от гриппа птиц H5N1 и значительные различия между группами сравнили с помощью способа хи-квадрат. Например, уравнение для идентификации степени защиты (%) = (показатель смертности в контрольной группе - показатель смертности опытной группы)/(показатель смертности контрольной группы) х 100%. Результаты показывают, что защита составляет 50%, 70% и 10% при лечении TG21 группы T1 (4,8 мг/мышь/день), группы T2 (2,4 мг/мышь/день) и группы T3 (1,2 мг/мышь/день) соответственно; при степени защиты 0% в группе негативного контроля и степени защиты 60% в группе позитивного контроля (TAMIFLU®). Степень защиты TG21 в группе T1 (P 0,05), в группе T2 (P 0,01), и в группе T3 (P<0,05) значительно отличалась от таковой в группе негативного контроля. Эти результаты указывают на то, что TG21 обладает стойкой противовирусной активностью в отношении вируса гриппа птиц H5N1 как идеальное лекарственное средство в лечении вирусных инфекций, вызываемых гриппом птиц.

Все патенты, заявки на патенты и публикации, связанные с описанием или указанные, приведены здесь в качестве ссылки в полном объеме, включая все фигуры и таблицы, при условии, что они не противоречат конкретным положениям этого описания.

Необходимо понимать, что описанные здесь примеры и варианты осуществления предназначены только для иллюстрации, и что различные модификации или изменения в этом свете будут предложены специалистам в области техники и включены в сущность и сферу действия этой заявки.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использована для лечения вирусной инфекции гриппа, уменьшения тяжести, интенсивности или продолжительности осложнений, связанных с вирусной инфекцией гриппа, а также к композиции для профилактики вирусной инфекции гриппа. Для этого после диагностирования вирусной инфекции гриппа субъекту вводят эффективное количество цистеамина или его соли. Также предложена композиция для профилактики вирусной инфекции гриппа, включающая эффективное количество цистеамина или его соли и противовирусное средство. Изобретения обеспечивают эффективность лечения, снижают риск развития осложнений, связанных с вирусной инфекцией гриппа, а также способствуют профилактике заражения вирусной инфекцией гриппа. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.

1. Способ лечения вирусной инфекции гриппа, где указанный способ включает диагностирование у субъекта вирусной инфекции гриппа; и введение субъекту эффективного количества цистеамина или его соли.

2. Способ по п.1, в котором вирусная инфекция гриппа выбрана из группы, состоящей из вирусов гриппа птиц и вирусов гриппа А, В и С.

3. Способ по п.2, где субъект инфицирован по крайней мере одним представителем из группы, состоящей из вирусов гриппа птиц подтипа H1N1, H1N2, H2N2, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H9N2 и H10N7.

4. Способ по п.1, который включает введение субъекту по крайней мере 0,1 мг цистеамина или его соли ежедневно.

5. Способ по п.4, который включает введение по крайней мере от 2 мг до 3000 мг цистеамина или его соли ежедневно.

6. Способ по п.1, в котором указанной солью цистеамина является цистеамина гидрохлорид или цистеамина фосфат.

7. Способ по п.1, в котором указанный цистеамин или его соль принимают перорально, парентерально, внутривенно, внутримышечно, трансдермально, буккально, подкожно или посредством суппозитория.

8. Способ уменьшения тяжести, интенсивности или продолжительности осложнений, связанных с вирусной инфекцией гриппа, где указанный способ включает диагностирование у субъекта вирусной инфекции гриппа; и введение субъекту эффективного количества цистеамина или его соли.

9. Способ по п.8, в котором вирусная инфекция гриппа выбрана из группы, состоящей из вирусов гриппа птиц и вирусов гриппа А, В и С.

10. Способ по п.9, где субъект инфицирован по крайней мере одним представителем из группы, состоящей из вирусов гриппа птиц подтипа H1N1, H1N2, H2N2, H3N2, H3N8, H5N1, H5N2, H5N3, H5N8, H5N9, H7N1, H7N2, H7N3, H7N4, H7N7, H9N2 и H10N7.

11. Способ по п.8, который включает введение субъекту по крайней мере 0,1 мг цистеамина или его соли ежедневно.

12. Способ по п.11, который включает введение субъекту от 2 мг до 3000 мг цистеамина или его соли ежедневно.

13. Способ по п.8, в котором солью цистеамина является цистеамина гидрохлорид или цистеамина фосфат.

14. Способ по п.8, в котором указанный цистеамин или его соль вводят орально, парентерально, внутривенно, внутримышечно, трансдермально, буккально, подкожно или посредством суппозитория.

15. Композиция, включающая эффективное количество цистеамина или его соли для профилактики вирусной инфекции гриппа и противовирусное лекарственное средство.

16. Композиция по п.15, в которой вирусной инфекцией гриппа является вирус гриппа птиц; и в которой противовирусное лекарственное средство выбирают из группы, состоящей из ганцикловира, ацикловира, фоскарнета, амантадина, римантадина и озелтамивира.