СПОСОБ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ИНФАРКТА МИОКАРДА Российский патент 1999 года по МПК G01N33/577 

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и предназначено для оценки тяжести течения инфаркта миокарда.

Способы оценки тромботических состояний, основанные на изучении функциональной активности тромбоцитов, широко используются в клинической медицине и по значимости нередко превосходят другие лабораторные показатели системы гемостаза. Как известно, тромбоциты, одними из первых, как наиболее лабильные клетки крови, отвечают при формировании ишемического очага изменением адгезивно-агрегационных свойств (Н.А.Федоров, 1991, Stock J. 1993).

Известны методы оценки тромбогенной опасности и тяжести течения ИБС с помощью определения микроагрегатов тромбоцитов (А. С.Осьмак, В.В.Петраш, 1968), турбидометрического способа исследования агрегации тромбоцитов в его модификациях (Born G. V. R., Latimer P., 1977, O'Brien Y.R., 1979), метода лазерной агрегатометрии (З.А.Габбасов, Е.Г.Попов и др., 1989). В понимании механизмов регуляции функционального состояния тромбоцитов, как основных факторов патогенеза острого инфаркта миокарда, особое значение в последние годы придается проблеме формирования активных сайтов связывания на мембране тромбоцитов к фибриногену (Koeb R., Santoro S., 1994-1995).

Однако, до настоящего времени все используемые методы изучения функциональных свойств кровяных пластинок, применяемых в клинической практике, не отвечают задаче изучения рецепторного аппарата тромбоцитов.

Наиболее близким техническим решением предлагаемого способа определения состояния рецепторного аппарата тромбоцитов, а именно адгезивных рецепторов у больных инфарктом миокарда, является метод ELISA (Stock J., Hollger N., 1994), который служит для определения суммарной рецепторной активности мембраны тромбоцитов. Принцип его состоит в реакции антиген-антитело (Ar - Am), происходящей на мембране тромбоцитов, заключающейся в отмывании тромбоцитов, инкубации с раствором альбумина и последующей инкубацией с соответствующим Am. Этот метод не позволяет оценить степень тяжести инфаркта миокарда, характер течения его, вероятность возникновения тромбогенных осложнений, поскольку производится учет интенсивности экспрессии всех интегриновых рецепторов мембраны тромбоцитов, а не только тех, которые являются заинтересованными в активации при тромбогенезе.

В связи с этим, целью является определение тяжести течения инфаркта миокарда по состоянию адгезивных (интегриновых) рецепторов мембран тромбоцитов. Эта цель достигается тем, что оценивается экспрессия и сродство интегриновых рецепторов к фибриногену, роль которых определяет исход троботического состояния. Предлагаемый способ отличается от прототипа тем, что микрофильтровое плато после отмывания тромбоцитов инкубируется в 0,1% р-ром коллагена и фибриногена в течение 5 минут при t = 24^oC, тем самым обеспечивается возможность оптимальной активации рецепторного аппарата тромбоцитов в условиях поражения сосудистой стенки при ОИМ. Затем тромбоцитарная суспензия инкубируется с 0,1% раствором коллагена и фибриногена в течение 40 минут с последующей отмывкой. Адгезированные тромбоциты подсчитываются при помощи фазово-контрастного микроскопа. Добавляется 3% раствор альбумина для блокирования свободных сайтов связывания. После 30 минут инкубации супернатант отбирали и добавляли анти-GP IIb/IIIa (мышиные моноклональные Ig G1) против человеческих GP IIb/IIIa в растворе фосфатного буфера. После инкубации (30 минут) плато отмывается раствором Тироде и определяется экспрессия интегриновых рецепторов при величине экстинкции 405 нМ. Измерение производится троекратно при различных разведениях (1:20, 1:200, 1:500). Интенсивность связывания измеряют в условных единицах, производя соотношение с калибровочной кривой. Затем рассчитывают среднее арифметическое значение экспрессии GP IIn/IIIa комплекса мембран адгезированных клеток.

Забор крови у больных ОИМ осуществляется на 1, 7, 14, 21 сутки от начала заболевания. В том случае, если величина рассчитываемого показателя изменяется в сторону увеличения относительно первого дня заболевания и приближается на 21 сутки течения заболевания к показателям здоровых лиц (0,15 - 0,20 у.е. ), можно говорить о благоприятном течении инфаркта миокарда. Если же значения экспрессии не изменяются в динамике стационарного наблюдения, можно ожидать осложненное течение заболевания с вероятностью развития рецидива.

Сравнение заявляемого технического решения с прототипом позволило установить соответствие его критерию "новизна".

При изучении других известных технических решений в данной области, технические признаки, отличающие заявляемый способ от прототипа, не были выявлены и поэтому они обеспечивают заявляемому техническому решению соответствие критерию "существенное отличие".

По предлагаемому способу было обследовано 63 больных острым инфарктом миокарда. В этой группе у 41 был трансмуральный инфаркт миокарда, у 22 - нетрансмуральный. Мужчин было 52 человека, женщин - 11 в возврате от 40 до 68 лет.

У 44 больных был первичный инфаркт миокарда, у остальных - повторный. У 42 больных инфаркт миокарда локализовался в области передней стенки левого желудочка, у 21 - в области задней стенки левого желудочка. В 80% случаев инфаркт протекал с различными осложнениями.

Диагноз инфаркта миокарда основывался на жалобах пациентов, данных клинического наблюдения, характерных изменений на ЭКГ (наличие патологического зубца Q или комплекса QS), подъема активности КФК, ее МВ - фракции, ЛДГ. В качестве клинических критериев осложненного течения ОИМ учитывались: развитие рецидива ОИМ, острые нарушения ритма сердца, острая левожелудочковая недостаточность с сердечной астмой или отеком легких.

В исследование не включены больные старше 68 лет и лица, имеющие выраженные аллергические состояния. Летальный исход составил 5%.

В результате проведенных исследований нами были получены количественные критерии, характеризующие структурную и функциональную организацию рецепторного аппарата тромбоцитов, которые позволили разделить всех больных ОИМ на две группы: с осложненным течением и без осложнений.

Ранее (1994) была изучена структурная и функциональная организация рецепторного аппарата тромбоцитов у здоровых лиц. Показатели экспрессии интегриновых рецепторов всегда были выше 0,151 у.е., но ниже 0,2 у.е. Результаты исследований у больных ОИМ показали возможность использования полученных количественных критериев с целью прогноза течения инфаркта миокарда. В случае снижения экспрессии интегриновых рецепторов к 21 дню заболевания можно говорить о благоприятном исходе. И наоборот, отсутствие изменений интенсивности экспрессии интегриновых рецепторов тромбоцитов дает возможность прогнозирования поздних рецидивов и говорит о неблагоприятном прогнозе.

Динамические исследования на протяжении стационарного наблюдения приобретают важное значение для определения развития и стабилизации тромбоза.

Способ относится к медицине, а именно к кардиологиии, и предназначен для оценки тяжести течения острого инфаркта миокарда. У больного осуществляют забор крови на 1, 7, 14, 21 сутки от начала заболевания острым инфарктом миокарда (ОИМ). Определяют экспрессию интегриновых рецепторов группы GР IIв/IIIа в динамике виутристационарного наблюдения (1, 7, 14, 21 сутки болезни). Сопоставляют эти показатели с показателями здоровых лиц (0,151-0,20 у. е. ) и при изменении степени экспрессии интегриновых рецепторов в сторону увеличения относительно первого дня заболевания и снижении к 21 дню заболевания до 0,151-0,20 у. е. (приближение к показателям здоровых лиц) прогнозируют благоприятное течение острого инфаркта миокарда, а при отсутствии изменений относительно первого дня - ухудшение течения заболевания и возможности развития рецидива. Метод позволяет более точно оценить степень тяжести инфаркта миокарда, характер течения его, вероятность возникновения тромбогенных осложнений. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Способ оценки тяжести течения острого инфаркта миокарда (ОИМ) путем определения функциональной активности рецепторного аппарата отмытых тромбоцитов больных острым инфарктом миокарда, отличающийся тем, что определяют экспрессию интегриновых рецепторов группы GP IIb/IIIа в динамике внутристационарного наблюдения (1, 7, 14 и 21 сутки болезни), сопоставляют эти показатели с показателями здоровых лиц (0,151 - 0,20 у.е.) и при изменении степени экспрессии интегриновых рецепторов в сторону увеличения относительно первого дня заболевания и снижении к 21 дню заболевания до 0,151 - 0,20 у.е. (приближение к показателям здоровых лиц) прогнозируют благоприятное течение ОИМ, при отсутствии изменений относительно первого дня - ухудшение течения заболевания и возможности развития рецидива. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что кровяные пластинки инкубируются в присутствии коллагена и фибриногена для оптимальной активации адгезивных (интегриновых) рецепторов.