СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГНЕЗДНОЙ АЛОПЕЦИИ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/577 

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии, и может быть использовано при диагностике и лечении гнездного облысения (alopecia areata).

Известны различные теории возникновения алопеции, например, трофоневротическая, нейроэндокринная, инфекционная и теория аутоантител [БМЭ, гл. ред. Б.В.Петровский, т.1, изд. "Советская энциклопедия", М.,1974 г.].

Этиология и патогенез гнездной алопеции не известны. Выпадение волос связывают с такими причинами, как общая интоксикация, нервный стресс, бактериальное и грибковое поражения, недостаток витаминов и микроэлементов и т.д.

Однако ни один из перечисленных факторов не может самостоятельно вызвать внезапную и стремительно прогрессирующую алопецию на фоне недавнего анамнестического благополучия.

Установлено, что некоторые негативные факторы, называемые "триггерными" (запускающими), способны потенцировать появление первых очагов облысения.

К таким факторам относят острый и хронический стресс,дисфункцию яичников, повреждение кожи головы (выдергивание волос, укол кожи, действие химических веществ и т.п.), черепно-мозговую травму, общий наркоз, некоторые пероральные контрацептивы, аллергические и атопические реакции, различного рода интоксикации, гиповитаминоз и т.д.

В клинической практике при выявлении причин болезни назначаются, как правило, анализы, характерные не для алопеции, а для определения сопутствующей патологии: общие анализы крови и мочи, биохимические анализы, содержание гормонов в крови, бактериологические и вирусологические исследования.

Известно, что постановку диагноза гнездной алопеции осуществляют в основном путем визуального осмотра состояния кожи и волос [В.В.Владимиров, "Диагностика и лечение кожных болезней", изд. ТОО Медтехтурсервис,1995 г.;
В.Я.Арутюнов, "Проблема алопеции", Вестник дерматологии и венерологии, N 12, 1971 г.].

Указанная диагностика не выявляет первопричин возникновения алопеции и не определяет эффективных путей ее лечения.

Изобретение направлено на повышение качества постановки диагноза гнездной алопеции ("стремительной алопеции").

При этом известный способ диагностики гнездной алопеции, характеризующийся проведением визуального осмотра состояния кожи и волос, дополняют проведением иммунологического анализа крови и по нарушению клеточного звена иммунной системы, главным образом по количеству натуральных киллеров - NK(CD16), превышающем норму по абсолютным и относительным показателям, определяют иммунореактивную фазу в развитии алопеции.

Проведенные авторами исследования в 1992-1998 гг. в медицинском Центре "Благовест" по лечению алопеции (г.Москва) показали, что развитие гнездной алопеции связано прежде всего с изменением иммунологического статуса организма. При этом повреждение клеток волосяного фолликула определяется не только гуморальными и нервными факторами, а в первую очередь строго дифференцированными клетками иммунной системы.

В патогенезе алопеции лежит генетическая предрасположенность. Генетическая аномалия иммунной системы не проявляется при рождении, она лишь потенцирует возможность развития заболевания.

Иммунодефицит не является универсальным, а проявляет строгую специфичность к определенному антигену. Внедрение антигена характеризуется отсутствием на данном этапе воспалительного процесса в парасосочковой зоне волосяного фолликула, что говорит о возможном дефекте в распознавании чужеродного агента антигенпредставляющими клетками.

Были рассмотрены два этиологических момента: случайная инвазия вируса с низкой вирулентностью (авирулентностью) и врожденный специфический дефицит противовирусной защиты. Поврежденные "триховирусом" клетки волосяного фолликула являются клетками-мишенями, которые после заражения не прекращают свои жизненно важные циклы и не препятствуют естественному росту волос.

Клетки Лангерганса (антигенпредставляющие кожные макрофаги) играют решающую роль в инициации первичного иммунного ответа. В норме именно они обязаны принять информацию от триховируса и экспрессировать на своей поверхности трихоантиген, запуская таким образом весь комплекс иммунных реакций. При алопеции же этого не происходит и антигенпредставляющими клетками становятся сами клетки-мишени волосяного фолликула, не способные к утилизации вируса.

Триховирус изменяет фрагмент ДНК шестой хромосомы, отвечающей за экспрессию антигенов главного комплекса гистосовместимости. Прежде всего это касается антигенов 1-ого класса гистосовместимости HLA-A9, В12, BW18. Эти антигены представляются аномальными рецепторами на поверхности матированной клетки. Мутация клеток является точечной и не препятствует нормальному росту волоса, не активирует цитотоксические Т-лимфоциты (CD8) и не запускает весь комплекс иммунного ответа с образованием антител в начале заболевания. Она лишь делает узнаваемыми пораженные клетки для натуральных киллеров -NK ( CD16).

Исследования показали, что в иммунореактивной фазе лимфоцитоз обусловлен повышением числа натуральных киллеров -NK(CD16), которые осуществляют контакт с мутированными клетками, экспрессировавшими тропные рецепторы. Такая экспозиция приводит киллеры в состояние возбуждения с проявлением цитотоксичности. Освобожденные киллером лимфотоксины нарушают мембранную проницаемость клеток-мишеней и индуцируют апоптоз (самостоятельную гибель клетки). Подтверждением апоптоза является отсутствие воспаления и некротического процесса в очагах облысения при Alopecia areata ("Стремительной алопеции").

Известно проведение иммунологических исследований для диагностики различных заболеваний. Так например, для определения субпопуляций и количества иммунных клеток используют моноклональные антитела, метод получения которых разработан Ц.Мильштейном и Г.Келером в 1975 г.

Для иммунофенотипирования (определения) субпопуляций лимфоцитов используется иммунофлуоресцентный анализ (ИФА) крови, в котором моноклональные антитела, меченные флуорохромом, связываются с мембранными антигенами живых клеток при их смешивании. Затем указанная взвесь под давлением поступает в оптико-электронный прибор-цитофлуориметр (например, производства фирмы Бектон Дикинсон Becton Dickinson, США).

Принцип фенотипического анализа клеток заключается в определении размера клеток и выявлении связанных с клетками определенных моноклональных антител, что отражается в иммунограмме
["Лимфоциты. Методы", Дж. Клаус, Москва. "Мир",1990 г ].

Основными лимфоцитами, определяемыми с помощью моноклональных антител, являются: Т-лимфоциты (CD3), В-лимфоциты (CD19), Т-хелперы (CD4), Т-супрессоры (CD8), натуральные киллеры - NK (CD16) и т.д., количество которых и взаимное соотношение может меняться в зависимости от исходного состояния иммунной системы и ее реакции в результате заболевания.

Количества указанных лимфоцитов, принятые за норму, приведены в таблице в конце описания.

Как показывают исследования авторов, иммунофенотипический анализ крови больных с гнездной алопецией выявляет отклонения в иммунограмме от нормы. Нарушение клеточного звена иммунной системы при алопеции прежде всего касается натуральных киллеров- NK(CD16). Превышение их числа от нормы до 100% и более в абсолютных количествах, а также увеличение относительного количества до 70% от верхней границы нормы указывает на избыточную пролиферацию натуральных киллеров -NK(CD16) при гнездной алопеции. Снижение количества Т-лимфоцитов (CD3) от нижней границы нормы колеблется в пределах 0-15% в относительных количествах и 0-31% в абсолютных.

Из изложенного можно сделать вывод о том, что гнездная (очаговая) алопеция - это аутоиммунная реакция организма, направленная на мутированные клетки волосяного фолликула. При этом аутоиммунный ответ реализуется через воздействие натуральных киллеров NK(CD16) на клетки-мишени волосяного фолликула, в которых запускается механизм программированной клеточной гибели(апоптоз).

Ниже представлены примеры клинических обследований больных гнездной алопецией, проведенные в 1998 г. в медицинском Центре "Благовест" на базе НИИ Иммунологии (г. Москва) с использованием иммунографического анализа.

Пример 1. Больной М. , 15 лет, выявление первого очага алопеции за 2 месяца до обследования. При визуальном осмотре отмечено продолжение процесса выпадения волос. В общем анализе крови отмечается небольшой лимфо- и моноцитоз, биохимические и гормональные показатели в пределах нормы. Диагноз: гнездная алопеция, субтотальная стадия, 30% наличия волос.

При иммунологическом обследовании на цитофлуориметре (3-цветная проточная лазерная цитометрия, реагенты и оборудование фирмы Бектон Дикинсон-Becton Dickinson, США) выявлено содержание Т-лимфоцитов CD3+ в абсолютных показателях 1258 кл/мкл и в относительных 57%. При этом содержание натуральных киллеров -NK (CD16) составило в абсолютных и относительных количествах соответственно 717 кл/мкл и 33%.

Заключение: отмечено превышение над нормой абсолютного и относительного показателей для натуральных киллеров и снижение Т-лимфоцитов, что показывает ярко выраженную иммунореактивную фазу гнездной алопеции.

Пример 2. Больная Ж.,28 лет, первые очаги алопеции отмечены в 7-летнем возрасте, через 1 год волосяной покров головы полностью восстановился. Рецидивирование заболевания началось за 5 месяцев до обследования, при этом волосы на голове потеряны полностью. В общем анализе крови отмечена незначительная лимфопения. Респираторными заболеваниями болеет редко, считает себя здоровой. Диагноз: гнездная алопеция, тотальная стадия.

При иммунологическом обследовании на цитофлуориметре (3-цветная проточная лазерная цитометрия, реагенты и оборудование фирмы Бектон Дикинсон - Becton Dickinson, США ) выявлено содержание Т-лимфоцитов CD3+ в абсолютных показателях 842 кл/мкл и в относительных 59 %. При этом содержание натуральных киллеров -NK(CD16) составило в абсолютных и относительных количествах соответственно 463 кл/мкл и 33%.

Заключение: отмечено превышение над нормой абсолютного и относительного показателей для натуральных киллеров и снижение Т-лимфоцитов, что также свидетельствует о иммунореактивной фазе заболевания.

Всего обследовано 78 больных с разными стадиями гнездной алопеции (очаговой, субтотальной, тотальной, универсальной), среди которых было 42 ребенка от 5 до 13 лет, 23 подростка от 13 до 17 лет и 13 взрослых. Все они находились на разных стадиях потери волос и в разных фазах иммунологической активности (иммунореактивная фаза, иммуноиндиффирентная фаза).

Общей особенностью для большинства больных оказалось то, что повышение числа натуральных киллеров- NK(CD16) и снижение количества Т-лимфоцитов (CD3) сопровождало стремительный процесс объективного выпадения волос. Это доказывает участие натуральных киллеров в патогенезе гнездной ("стремительной") алопеции.

Количество больных с нарушениями иммунологического статуса в период активного выпадения волос составило 68,5% по натуральным киллерам и 39,6% по Т -лимфоцитам (CD3), что показывает иммунореактивную фазу в остром периоде заболевания.

Результаты проведенных исследований подтвердили возможность достоверной идентификации иммунореактивной фазы гнездной алопеции, позволяющей сформировать новое представление об этиологии и патогенезе заболевания.

Изобретение относится к области медицины, в частности к дерматологии, и может быть использовано при диагностике и лечении облысения, в частности гнездной алопеции. Визуально оценивают состояние кожи и волос, дополнительно проводят иммунологический анализ крови и по нарушению клеточного звена иммуной системы главным образом по количеству натуральных киллеров- NК (СD 16), превышающем норму, определяют иммуно-реактивную фазу развития заболевания. Способ обеспечивает повышение точности постановки диагноза. 1 табл.

Способ диагностики гнездной алопеции путем проведения визуального осмотра состояния кожи и волос, отличающийся тем, что дополнительно проводят иммунологический анализ крови и по нарушению клеточного звена иммунной системы, главным образом по количеству натуральных киллеров-NK (CD 16), превышающем норму, определяют иммунореактивную фазу развития заболевания.