ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, конкретно к гемореологии, и касается способов получения препаратов из растительного сырья, которое может быть использовано для лечения сердечно-сосудистых, эндокринных и других заболеваний, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови (СПВК) и нарушениями микроциркуляции.

Известны средства, влияющие на реологические показатели крови (вязкость крови, вязкость плазмы, агрегацию эритроцитов) - пентоксифиллин, ацетилсалициловая кислота, дипиридамол, низкомолекулярные декстраны и другие [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э. 1985; Лакин К.М., Овнатанова М.С. 1976; Машковский М.Д. 1993].

Наиболее близким по природе происхождения (прототипом) является лекарственное средство - танакан (экстракт Гингко билоба - EGb 761), обладающее гемореологической активностью. Танакан уменьшает вязкость крови и агрегационную способность эритроцитов, повышает деформируемость эритроцитов [Ernst E. et al. 1986; Chang K.F. et al. 1987; Kooltringer P. et al. 1989]. Известен способ получения гемореологического средства танакан, заключающийся в экстракции растительного сырья Гингко билоба и последующем высушивании первичного извлечения до порошкообразного состояния [Ernst E. et al. 1986].

Вместе с тем, перечень препаратов, улучшающих гемореологический статус, ограничен [Машковский М. Д., 1993]. Следовательно, расширение арсенала гемореологических средств за счет препаратов растительного происхождения и повышение активности препаратов этого класса является актуальной задачей. Лекарственные средства растительного происхождения имеют более низкую токсичность по сравнению с синтетическими препаратами и при длительном применении, как правило, лишены выраженных побочных эффектов [Пашинский В.Г. 1989].

Задачей предполагаемого изобретения является расширение номенклатуры гемореологических средств, показаний к их применению и повышение фармакологической активности.

Поставленная задача достигается тем, что в качестве гемореологического средства предлагается сухая вытяжка из надземной части лихниса хальцедонского (Lychnis chalcedonica L.), полученная путем экстракции 40-70% этиловым спиртом при температуре 18-20^oC, при соотношении сырья и экстрагента 1:20, в течение 48 часов. Затем экстракт подвергали сушке до получения порошка темно-коричневого цвета, ароматного специфического запаха, горьковатого вкуса.

В литературе отсутствуют данные о возможности применения экстракта лихниса хальцедонского в качестве гемореологического средства. Предлагаемое гемореологическое средство можно использовать в медицинской практике для лечения сердечно-сосудистых, эндокринных и других заболеваний, сопровождающихся СПВК. Данное свойство явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники.

Таким образом, предлагаемое решение соответствует критериям изобретения - "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Применение в качестве экстрагента 40-70% этилового спирта обусловлено наиболее полным извлечением действующих веществ из сырья. Температурный режим и время экспозиции являются оптимальными и подобраны экспериментальным путем.

Гемореологическое средство получают следующим образом: измельченные воздушно-сухие листья и стебли лихниса хальцедонского (Lychnis chalcedonica, L. ) -и надземную часть - заливают 40-70% этиловым спиртом и экстрагируют при температуре 18-20^oC, при соотношении сырье:экстрагент 1:20, в течение 48 часов. Полученное извлечение процеживают через 4 слоя марли и упаривают под вакуумом досуха. Готовый высушенный экстракт представляет собой темно-коричневый гигроскопический порошок со специфицическим ароматным запахом, горьковатого вкуса. Выход продукта по загруженному сырью составляет 27-27%. Время процесса 60-72 часа.

Примеры конкретного выполнения способа.

Пример 1. 20 г воздушно-сухих измельченных листьев и стеблей лихниса хальцедонского (Lychnis chalcedonica, L.) заливают 400 мл 40% раствора этилового спирта и экстрагируют при температуре 20^oC в течение 48 часов. Извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через 4 слоя марли и упаривают под вакуумом досуха. Выход сухого экстракта 5,20 г, что составляет 26% от массы исходного сырья.

Пример 2. 20 г воздушно-сухих измельченных листьев и стеблей лихниса хальцедонского (Lychnis chalcedonica, L.) заливают 400 мл 70% раствора этилового спирта и экстрагируют при температуре 18^oC в течение 48 часов. Извлечение отделяют от обработанного сырья процеживанием через 4 слоя марли и упаривают под вакуумом досуха. Выход сухого экстракта 4,95 г, что составляет 24,7% от массы исходного сырья.

Для установления гемореологических свойств экстракта проведены 4 серии экспериментов. Кровь для исследования брали под эфирным наркозом у крыс линии Вистар из общей сонной артерии. В качестве стабилизатора использовали гепарин в конечной концентрации 50 ЕД на мл крови для оценки агрегации и деформируемости эритроцитов и 3,6% цитрат натрия в соотношении с кровью 1:9 для исследования вязкости крови. Гемореологические нарушения моделировали с помощью гипертермии [Алиев и другие, 1995]. Измеряли исходную вязкость крови и величину обратимой агрегации эритроцитов и деформируемость эритроцитов. Затем пробы крови в объеме 0,5 мл помещали в термостат и инкубировали в течение часа при 42,5^oC. Исследуемые соединения или растворитель вносили за 15 минут до термостатирования в объеме 10 мкл. Вязкость крови измеряли на капиллярном гемовискоозиметре ВК-4. Обратимую агрегацию эритроцитов оценивали силлектометрическим методом на модифицированном микроколориметре МКМФ-1 с графической регистрацией на графопостроителе H306, критерием агрегации эритроцитов служила величина Т_1/2 (полупериод агрегации) время за которое величина фотометрического сигнала уменьшается в два раза. [Плотников и другие, 1995]. Деформируемость эритроцитов определяли методом эктацитометрии [Белкин А. В. и другие, 1991] , показатель оценивали по индексу деформируемости эритроцитов (ИДЭ), рассчитываемому как отношение:
ИДЭ = (L-H)/(L+H),
где L - больший диаметр эллипса;
H - меньший диаметр эллипса.

Статистическую обработку результатов всех серий опытов проводили с помощью t-критерия Стьюдента и непараметрического критерия Вилкоксона.

Результаты исследований представлены в примерах 1-4.

Примеры гемореологической активности препарата
Пример 1
Тепловое воздействие на кровь в течение часа при 42,5^oC приводило к выраженному увеличению вязкости на 26% по сравнению с исходной величиной, уменьшению на 37% полупериода агрегации эритроцитов и индекса деформируемости эритроцитов при скоростях сдвига 90 с^-1, 180 с^-1, 350 с^-1 и 890 с^-1 на 34%, 39%, 35% соответственно (таблица).

Пример 2
Танакан в концентрации 10^-5 г/мл, внесенный в пробу за 15 мин до термостатирования, снижал вязкость крови на 12%, вызывал увеличение полупериода агрегации эритроцитов на 47% и увеличивал деформируемость эритроцитов на скорости сдвига 90 с^-1, 180 с^-1,350 с^-1 890 с^-1 на 36%, 32%, 21%, 26% соответственно по сравнению с контрольными значениями (таблица).

Пример 3
Экстракт лихниса хальцедонского, приготовленный с использованием 40% этанола, внесенный в пробу за 15 мин до термостатирования в конечной концентрации 10^-5 г/мл крови, уменьшал вязкость крови на 15%, агрегацию эритроцитов на 47% по отношению к контролю. Наблюдалось увеличение способности эритроцитов к деформируемости при скоростях сдвига 90 с^-1, 180 с^-1, 350 с^-1 и 890 с^-1 на 33%, 37%, 36%, 30% соответственно по сравнению с контролем (таблица).

Таким образом, экстракт лихниса хальцедонского, приготовленный с использованием 40% этанола, обладает выраженными гемореологическими свойствами и не уступает прототипу (танакан) по способности нормализовать патологический сдвиг вязкости крови, эритроцитарной агрегации и улучшать деформируемость эритроцитов. По способности улучшать деформируемость эритроцитов на скорости сдвига 350 с^-1 экстракт лихниса хальцедонского превосходит танакан (различия достоверно значимы при P < 0,05 (таблица).

Пример 4
Экстракт лихниса хальцедонского, приготовленный с использованием 70% этанола, внесенный в пробу за 15 мин до термостатирования в конечной концентрации 10⁵ г/мл крови, уменьшал вязкость крови на 13%, агрегацию эритроцитов на 28% по отношению к контролю. Наблюдалось увеличение способности эритроцитов к деформируемости при скоростях сдвига 90 с^-1, 180 с^-1, 350 с^-1 и 890 с^-1 на 26%, 31%, 30%, 28% соответственно по сравнению с контролем (таблица).

Таким образом, экстракт лихниса хальцедонского, приготовленный с использованием 70% этанола, обладает выраженными гемореологическими свойствами и не уступает прототипу (танакан) по способности нормализовать патологический сдвиг вязкости крови, эритроцитарной агрегации и улучшать деформируемость эритроцитов (таблица).

Использование данного средства в клинической практике позволит расширить номенклатуру гемореологических препаратов.

Источники информации принятые во внимание
1. Алиев О.И., Колтунов А.А., Баскакова И.В. Способ воспроизведения повышенной вязкости крови.//Труды молодых ученых НИИФ ТНЦ РАМН. Томск, 1995. С. 46-47.

2. Балуда В.П., Баркаган З.С., Гольдберг Е.Д. и соавт. Лабораторные методы исследования системы гемостаза. - Томск, 1980. - С. 192.

3. Белкин А. В. , Сторожок С.А., Катюхин Л.Н. // Физиол. журн. СССР. - 1991. - N 1. - С. 133-138.

4. Габриэлян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение. - Ереван, 1985. - 400 с.

5. Лакин К.М., Овнатанова М.С. // Фармакол. и токсикол. - 1976. - N 3. - с. 358-367.

6. Машковский М. Д. Лекарственные средства. - М. 1993. - Т. 1. - С. 529-530.

7. Пашинский В.Г. Растения в терапии и профилактике болезней. - Томск, 1989. - 208 с.

8. Плотников М.Б., Алиев О.И., Попель Ф.В. // Клинич. лаб. диагностика. - 1995. - N 3. - С. 457-458.

9. Chung K.F., G. Dent, M. McCusker, Ph Guinot, C.P. Page, PJ. Barnes. // Lancet, i: 248-51.

10. Ernst E. , Matrai A.: Hamorheologishe In-vitro-Effect von Gingko biloba. Herz Kreisi. 1986, 18: 358-360.

11. Koltringer P., O. Eber, P. Lind et at. // Perfusion, 1989, 1: 28-30.

Изoбpeтeниe относится к медицине и может быть использовано для лечения сердечно-сосудистых, эндокринных и других заболеваний, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови. В качестве гемореологического средства используют сухую вытяжку из надземной части лихниса хальцедонского, полученную путем экстракции 40 - 70%-ным этиловым спиртом при соотношении сырье: экстрагент 1 : 20 при 18 - 20°С в течение 48 ч. Изобретение позволяет расширить арсенал гемореологических средств и повысить их активность. 2 с. п. ф-лы, 1 табл.

1. Средство, обладающее гемореологической активностью, содержащее сухую вытяжку из растительного сырья, отличающееся тем, что оно содержит вытяжку из надземной части лихниса хальцедонского 40 - 70%-ным этиловым спиртом. 2. Способ получения средства, обладающего гемореологической активностью, заключающийся в экстракции растительного сырья и высушивании первичного извлечения, отличающийся тем, что экстрагируют измельченную надземную часть лихниса хальцедонского 40 - 70%-ным этиловым спиртом при соотношении сырье : экстрагент 1 : 20 в течение 48 ч при 18 - 20^oC.