СРЕДСТВО С АНТИАГРЕГАНТНОЙ И ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2002 года по МПК A61K31/616 A61K31/35 A61P7/00 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, влияющего на реологию крови.

Известны средства, влияющие на агрегацию тромбоцитов, обладающие гемореологической активностью: тиклопидин, дипиридамол [12]. Однако количество этих средств ограничено.

Наиболее близким (прототипом) по положительному эффекту является ацетилсалициловая кислота, обладающая выраженными антиагрегантными, антикоагулянтными [1, 5, 10, 11, 15], а также гемореологическими свойствами [10, 15].

Однако в зависимости от условий ацетилсалициловая кислота способна либо улучшать, либо ухудшать, либо не изменять реологические параметры крови. Так, ацетилсалициловая кислота снижает вязкость крови и уменьшает агрегацию эритроцитов у больных с ревматическими митральными пороками и патологией кровообращения [6, 7, 14]. Вместе с тем у волонтеров применение ацетилсалициловой кислоты приводило к снижению деформируемости эритроцитов [16], а у больных гипертонической болезнью положительное действие ацетилсалициловой кислоты ограничивается достоверным влиянием лишь на величину гематокрита [8] .

Задачей изобретения является расширение номенклатуры средств с антиагрегантной и гемореологической активностью.

Поставленная задача достигается использованием в качестве средства с антиагрегантной и гемореологической активностью смеси ацетилсалициловой кислоты и диквертина при соотношении компонентов в весовых частях: ацетилсалициловая кислота 10, диквертин 1-2.

Ацетилсалициловая кислота является одним из представителей группы нестероидных противовоспалительных средств и нашла применение как антиагрегант и антикоагулянт в терапии и профилактике сосудистых заболеваний головного мозга и сердца [1, 5, 6, 11, 15].

Диквертин обладает гемореологическим, антиагрегантным, антиоксидантным, противовоспалительным, радиозащитным, ангиопротекторным, гастро- и гепатозащитным, гиполипидемическим и диуретическим действием [2, 9].

Использование смеси ацетилсалициловой кислоты и диквертина в литературе не описано.

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве атиагрегантного средства с гемореологической активностью используют смесь ацетилсалициловой кислоты и диквертина при следующем соотношении компонетов веществ от 10: 1 до 10:2. Данная совокупность облигатных признаков явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники. Смесь ацетилсалициловой кислоты и диквертина можно использовать для лечения больных с сердечно-сосудистыми и другими заболеваниями для уменьшения повышенной вязкости крови, спонтанной агрегации эритроцитов и повышения сниженной деформируемости эритроцитов.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Предлагаемое средство получают следующим способом: смешивают 10 частей ацетилсалициловой кислоты и от 1-й до 2-х частей диквертина. Использование смеси ацетилсалициловой кислоты и диквертина в предложенном соотношении стало возможным благодаря проведенным нами экспериментальным исследованиям.

Эксперименты проведены на 24 спонтанно гипертензивных крысах-самцах линии SHR массой 250-300 г и 10 нормотензивных крысах-самцах линии Вистар массой 250-300 г. Для установления гемореологических свойств веществ in vitro кровь брали под эфирным наркозом у крыс линии Вистар из общей сонной артерии. Гемореологические нарушения моделировали с помощью гипертермии [4]. Для этого пробы крови в объеме 1,5 мл помещали в термостат и инкубировали в течение часа при 42,5^oС. До и после инкубации измеряли вязкость крови и спонтанную агрегацию эритроцитов.

Для установления гемореологических свойств in vivo опытным группам крыс линии SHR ежедневно внутрижелудочно вводили смесь ацетилсалициловой кислоты и диквертина (АСК+ДКВ) в дозе 100 мг/кг и 20 мг/кг соответственно или ацетилсалициловую кислоту (АСК) в дозе 100 мг/кг в 1% крахмальной слизи, животные контрольной группы получали эквиобъемное количество 1% крахмальной слизи. На 14-е сутки после начала введения препарата у животных под эфирным наркозом катетеризировали общую сонную артерию, измеряли артериальное давление и проводили забор крови. У 3-х групп крыс линии SHR и у крыс линии Вистар исследовали следующие гемореологические параметры: вязкость крови и плазмы, гематокрит, спонтанную агрегацию и деформируемость эритроцитов, содержание фибриногена в плазме. Вязкость крови и плазмы определяли на ротационном вискозиметре АВК-2. Гематокрит измеряли методом центрифугирования в стеклянных капиллярах (центрифуга РС-6, 2000 об/мин, время центрифугирования 10 мин). Эритроцитарную агрегацию изучали методом силлектометрии на модифицированном микроколориметре МКМФ-1 с графической регистрацией на графопостроителе Н301. Критерием агрегационной способности эритроцитов являлся полупериод агрегации (время, за которое величина фотометрического сигнала снижается в два раза) [13]. Деформируемость эритроцитов определяли с помощью лазерного эктацитометра при скорости сдвига 890 с^-1 [4]. Показатель оценивали по индексу деформируемости эритроцитов (ИДЭ), рассчитываемому как отношение
ИДЭ=(L-H)/(L+H),
где L - больший диаметр эллипса;
Н - меньший диаметр эллипса.

Содержание фибриногена в плазме определяли гравиметрически (по Рутберг) [3] . Статистическую обработку проводили с помощью пакета статистических программ "Statistica for Windows 4.3". Рассчитывали среднее значение, стандартную ошибку; для выявления межгрупповых различий использовали t-критерий Стьюдента.

Результаты исследований представлены в примерах 1-10.

Пример 1.

Тепловое воздействие на кровь в течение часа при 42,5^oС приводило к выраженному увеличению вязкости на скоростях сдвига 3-300 с^-1 на 11-38% по сравнению с исходной величиной и уменьшению полупериода агрегации эритроцитов на 32% (табл.1).

Пример 2.

Комплекс ацетилсалициловой кислоты в концентрации 10^-4 г/мл и диквертина в концентрации 10^-3 г/мл, внесенный в пробу за 10 мин до термостатирования, увеличивал вязкость крови на скоростях сдвига 3-300 с^-1 на 20-35% по отношению к контрольным значениям и не влиял на полупериод кривой агрегации эритроцитов (табл.1).

Таким образом, комплекс ацетилсалициловой кислоты и диквертина в соотношении 1: 10 (соответственно 10^-4 г/мл и 10^-3 г/мл) ухудшает реологические свойства крови.

Пример 3.

Комплекс ацетилсалициловой кислоты в концентрации 10^-4 г/мл и диквертина в концентрации 10^-4 г/мл, внесенный в пробу за 10 мин до термостатирования, достоверно не изменял реологические параметры крови по сравнению с контролем (табл.1).

Таким образом, комплекс ацетисалициловой кислоты и диквертина в соотношении 10: 10 (соответственно 10^-4 г/мл и 10^-4 г/мл) не проявляет гемореологический эффект (табл.1).

Пример 4.

Комплекс ацетилсалициловой кислоты в концентрации 10^-4 г/мл и диквертина в концентрации 2•10^-5 г/мл, внесенный в пробу за 10 мин до термостатирования, уменьшал вязкость крови на скоростях сдвига 5 с^-1 и 300 с^-1 на 29% и 16% соответственно по отношению к контрольным значениям. Полупериод агрегации эритроцитов был на 26% больше, чем в контроле (табл.1).

Таким образом, комплекс ацетилсалициловой кислоты и диквертина в соотношении 10: 2 (соответственно 10^-4 г/мл и 2•10^-5 г/мл) проявляет значительный гемореологический эффект, ограничивая повышение вязкости крови как на низкой (5 с^-1), так и на высокой (300 с^-1) скоростях сдвига, а также уменьшает спонтанную агрегацию эритроцитов.

Пример 5.

Комплекс ацетилсалициловой кислоты в концентрации 10^-4 г/мл и диквертина в концентрации 10^-5 г/мл, внесенный в пробу за 10 мин до термостатирования, уменьшал вязкость крови на скорости сдвига 3 с^-1 на 4% по отношению к контрольным значениям. Полупериод агрегации эритроцитов был на 25% больше, чем в контроле (табл.1).

Таким образом, комплекс ацетилсалициловой кислоты и диквертина в соотношении 10: 1 (соответственно 10^-4 г/мл и 10^-5 г/мл) проявляет существенный гемореологический эффект, ограничивая повышение вязкости крови на низкой (3 с^-1) скорости сдвига и спонтанную агрегацию эритроцитов.

Пример 6.

Комплекс ацетилсалициловой кислоты в концентрации 10^-4 г/мл и диквертина в концентрации 5•10^-6 г/мл, внесенный в пробу за 10 мин до термостатирования, не изменял реологические параметры крови по сравнению с контрольными значениями (табл.1).

Таким образом, комплекс ацетилсалициловой кислоты и диквертина в соотношении 10:0,5 (соответственно 10^-4 г/мл и 5•10^-6 г/мл) не проявляет гемореологический эффект (табл.1).

Согласно полученным данным гемореологическими свойствами обладает комплекс ацетилсалициловой кислоты с диквертином в соотношении компонентов от 10:1 до 10:2, который способен ограничивать повышение вязкости крови и снижать агрегацию эритроцитов.

Использование комплекса ацетилсалициловой кислоты и диквертина в соотношении компонентов 10:10 и 20:1 не оказывает влияние на реологические свойства крови.

Использование комплекса ацетилсалициловой кислоты и диквертина в соотношении компонентов 1:10 ухудшает реологические свойства крови.

Пример 7.

Сравнение исследуемых показателей у крыс линии SHR проводили с соответствующими показателями крыс линии Вистар (контроль 1). У крыс линии Вистар системное артериальное давление составляло 95±3 мм рт. ст., вязкость плазмы - 1,43±0,04 сПз, гематокрит - 45,1±0,1 %, полупериод агрегации эритроцитов - 9,6±0,5 с, содержание фибриногена в плазме крови - 215±12 мг%, индекс деформируемости эритроцитов на скорости сдвига 890 с^-1 - 0,535±0,014 (табл.2), вязкость крови на скоростях сдвига 3 с^-1, 5 с^-1, 7 с^-1, 10 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 равнялась 6,3±0,2 сПз, 6,1±0,2 сПз, 5,8±0,2 сПз, 4,2±0,1 сПз, 3,9±0,1 сПз, 3,6±0,1 сПз соответственно (табл.3).

Пример 8.

У крыс линии SHR (контроль 2) системное артериальное давление составляло 125±3 мм рт. ст., вязкость плазмы - 1,40±0,02 сПз, гематокрит - 49,4±0,6 %, полупериод агрегации эритроцитов - 8,6±0,4 с, содержание фибриногена в плазме крови - 260+20 мг%, индекс деформируемости эритроцитов на скорости сдвига 890 с^-1 - 0,300±0,007 (табл.2), вязкость крови на скоростях сдвига 3 с^-1, 5 с^-1, 7 с^-1, 10 с^-1, 100 c^-1, 300 с^-1 равнялась 8,5±1,0 сПз, 7,7±0,7 сПз, 7,3±0,6 сПз, 7,0±0,6 сПз, 5,3±0,5 сПз, 4,5±0,2 сПз соответственно (табл.3). По сравнению со значениями у крыс линии Вистар (контроль 1) у крыс линии SHR выявлено достоверное увеличение системного артериального давления (на 24 %), вязкости крови на скоростях сдвига 3 с^-1, 5 с^-1, 7 с^-1, 10 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 (на 36%, 21%, 21%, 30%, 27%, 20% соответственно), вязкости плазмы (на 3%), содержания фибриногена в плазме (на 18%), агрегантной активности эритроцитов (полупериод агрегации снижался на 11 %) и снижение способности эритроцитов к деформации на скорости сдвига 890 с^-1 (на 44%) (табл.2, 3).

Пример 9.

После курсового внутрижелудочного введения ацетилсалициловой кислоты в дозе 100 мг/кг у крыс линии SHR выявлены следующие значения показателей: системное артериальное давление - 115±5 мм рт. ст. , вязкость плазмы - 1,40±0,03 сПз, гематокрит - 51,1±0,8 %, полупериод агрегации эритроцитов - 9,7±0,8 с, содержание фибриногена в плазме крови - 255+30 мг%, индекс деформируемости эритроцитов на скорости сдвига 890 с^-1 - 0,338±0,017 (табл.2), вязкость крови на скоростях сдвига 3 с^-1, 5 с^-1, 7 с^-1, 10 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 равнялась 12,1±1,4 сПз, 10,7±1,2 сПз, 9,4±0,9 сПз, 8,3±0,6 сП_з, 5,2±0,2 сПз, 4,9±0,1 сПз соответственно (табл.3).

По сравнению со значениями в контрольной группе (контроль 2) выявлено достоверное увеличение деформируемости эритроцитов на скорости сдвига 890 с^-1 (на 12%), а также повышение вязкости крови на низких скоростях сдвига - 3 с^-1 и 5 с^-1 (на 30% и 29% соответственно), существенно не изменялись вязкость плазмы, гематокрит, артериальное давление, содержание фибриногена в плазме, величина агрегации эритроцитов (табл.2, 3).

Пример 10.

После курсового внутрижелудочного введения смеси ацетилсалициловой кислоты и диквертина в дозе 100 мг/кг и 20 мг/кг соответственно у крыс линии SHR выявлены следующие значения показателей: системное артериальное давление - 121±3 мм рт. ст., вязкость плазмы - 1,50±0,04 сПз, гематокрит - 50,5±0,7 %, полупериод агрегации эритроцитов - 11,6±0,5 с, содержание фибриногена в плазме крови - 250±36 мг%, индекс деформируемости эритроцитов на скорости сдвига 890 с^-1 - 0,391±0,012 (табл.2), вязкость крови на скоростях сдвига 3 с^-1, 5 с^-1, 7 c^-1, 10 с^-1, 100 c^-1, 300 с^-1 равнялась 8,4±0,3 сПз, 7,9±0,2 сПз, 7,5±0,2 сПз, 7,2±0,1 сПз, 4,9±0,1 сПз, 4,6±0,1 сПз соответственно (табл. 3). По сравнению с контрольной группой (контроль 2) наблюдалось ослабление агрегации эритроцитов (на 26%), увеличение деформируемости эритроцитов на скорости сдвига 890 с^-1 (на 24 %) (табл.2). Следовательно, смесь ацетилсалициловой кислоты и диквертина при курсовом применении в дозе 100 мг/кг и 20 мг/кг соответственно оказал выраженное положительное влияние на реологические свойства крови крыс линии SHR.

По сравнению с группой животных, получавших ацетилсалициловую кислоту, смесь ацетилсалициловой кислоты и диквертина достоверно снижала вязкость крови на скоростях сдвига 3 с^-1 и 5 с^-1 (на 31% и 27% соответственно), увеличивала деформируемость эритроцитов на скорости сдвига 890 с^-1 (на 14%); существенно не изменялись величина артериального давления, содержание фибриногена в плазме и вязкость плазмы (табл.2, 3).

Таким образом, комплекс ацетилсалициловой кислоты и диквертина в предлагаемом соотношении компонентов оказывает значительное нормализующее влияние на реологические свойства крови спонтанно гипертензивных крыс линии SHR. Это влияние реализуется за счет ослабления агрегации эритроцитов и улучшения способности эритроцитов к деформации. Кроме того, смесь ацетилсалициловой кислоты и диквертина в данном соотношении более выражено улучшает реологические параметры крови крыс со спонтанной артериальной гипертензией по сравнению с ацетилсалициловой кислотой, так как эта смесь снижает вязкость крови, а также более существенно и закономерно увеличивает деформируемость эритроцитов.

Источники литературы
1. Ашкинази И.Я. // Тер. архив. - 1981. - Т. 53, 5. - С.61-65.

2. Алиев О.И., Колтунов А.А., Баскакова И.В. // Труды молодых ученых НИИФ ТНЦ РАМП. - Томск, 1995. - С.46-47.

3. Балуда В.П., Баркаган З.С., Гольдберг Е.Д., Кузник Б.И., Лакин К.М. Лабораторные методы исследования системы гемостаза -Томск, 1980. - С.189-196.

4. Белкин А. В. , Сторожок С.А., Катюхин Л.Н. // Физиол. журн. СССР. - 1991. - 1. - С.133-138.

5. Вашкинель А.М., Мамбетова Н.М. // Гематол. и трансфузиол. -1990. - Т. 35, 10. - С.14-16.

6. Габриелян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение. -Ереван, 1985. - 399 с.

7. Джанашия П. Х., Чигогидзе, Мурашко В.В. // Кардиология. -1988. - Т. 28, 5. - С.69-72.

8. Джанашия П. Х. , Сороколетов С.М., Жиляев Е.В. и соавт. // Реологические исследования в медицине. - М., 1997. - С.68-74.

9. Кубатиев А.А., Ядигарова З.Т., Рудько И.А., Тюкавкина Н.А., Быков В. А. // Вопр. биол., мед- и фармацевт, химии. - 1999, - 3. -С.47-51.

10. Левин Г. Я., Шереметьев Ю.А. // Фармакол. и токсикол. - 1978. - Т. 41, 1. - С.85-89.

11. Ляпина А. Г. , Паспоров К.В. // Вест. Московского университета. - 1991. - 3. - С.30-33.

12. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М., 1997. - Т. 1-2.

13. Плотников М.Б., Алиев О.И., Попель Ф.В. // Клиническая лабораторная диагностика. - 1995. - 3 - С.457-458.

14. Покровский А.В., Дмитриева В.А. // Кардиология. - 1979. - Т. 19, 2. - С.54-61.

15. Шереметьев Ю.А., Штыхно Ю.М., Левин Г.Я. // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1980. - Т. 90, 9. - С.276-279.

16. Saniabadi A.R., Fisher Т.С., McLaren M., et al. // Cardiovasc. Res. - 1991. - V. 25. - P.177-183.

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, влияющего на реологию крови. Изобретение заключается в том, что средство включает смесь ацетилсалициловой кислоты и диквертина при соотношении компонентов: ацетилсалициловая кислота 10, диквертин 1-2. Изобретение обеспечивает улучшение реологических свойств крови. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Средство с антиагрегантной и гемореологической активностью на основе ацетилсалициловой кислоты, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит диквертин. 2. Средство по п. 1, отличающееся тем, что смесь содержит ацетилсалициловую кислоту и диквертин в следующем соотношении компонентов, вес. ч: ацетилсалициловая кислота - 10, диквертин - 1-2.