ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОЕ И АНТИТРОМБОЦИТАРНОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2004 года по МПК A61K31/05 A61P7/02 

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, и касается средства, обладающего гемореологическими и антитромбоцитарными свойствами.

Известны средства, проявляющие темореологические свойства - пентоксифиллин, диквертин, танакан [2, 6, 9, 10].

Известны средства, обладающие антитромбоцитарными свойствами - пентоксифиллин, ацетилсалициловая кислота, тиклопидин, дипиридамол [2, 7].

Наиболее близким (прототипом) является лекарственное средство - пентоксифиллин, обладающее как гемореологическими свойствами, так и антитромбоцитарными [2]. Пентоксифиллин способен улучшать деформируемость эритроцитов и уменьшать агрегацию эритроцитов, улучшая реологические свойства крови и микроциркуляции [2].

Задачей изобретения является расширение номенклатуры антиагрегантных средств, улучшающих реологические свойства крови и обладающих антитромбоцитарным эффектом.

Поставленная задача достигается использованием 4-(2-гидроксиэтил)-фенола, в дальнейшем именуемого как (п-тирозол) в качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства.

Известно, что п-тирозол обладает антиоксидантными свойствам [3].

Использование п-тирозола как гемореологического и антитромбоцитарного средства в литературе не описано.

Принципиально новым в предлагаемом изобретении является то, что в качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства используется п-тирозол. Данное свойство явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники. П-тирозол можно использовать для лечения больных с сердечно-сосудистыми и другими заболеваниями для уменьшения повышенной вязкости крови, спонтанной агрегации эритроцитов и повышения сниженной деформируемости эритроцитов, а также снижения агрегационной способности тромбоцитов.

Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленно применимо".

Материал и методы

Эксперименты по изучению гемореологических свойств п-тирозола проводили на 15 крысах-самцах Вистар массой 250-300 г. Животные были разделены на 3 группы: 5 животных получали внутрижелудочно 1 мл крахмальной слизи (ежедневно однократно в течение 5 суток) (контроль), 5 животных получали внутрижелудочно пентоксифиллин (100 мг/кг ежедневно однократно в течение 5 суток) (Группа I); 5 животных получали внутрижелудочно п-тирозол (100 мг/кг ежедневно однократно в течение 5 суток) (Группа II). Влияние препаратов на вязкость крови оценивали с использованием модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro [8]. Кровь забирали из общей сонной артерии под эфирным наркозом. В качестве стабилизатора использовали 3,8%-ный раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1:9. Вязкость крови измеряли на ротационном вискозиметре АКР-2 в диапазоне скоростей сдвига от 5 с^-1 до 300 с^-1 до и после инкубации образцов при температуре 44°С в течение 60 мин.

Эксперименты по изучению антитромбоцитарных свойств п-тирозола проводили на 18 крысах-самцах Вистар массой 250-280 г. Животные были разделены на 3 группы: 6 животных получали внутрижелудочно 1 мл крахмальной слизи (однократно) (контроль), 6 животных получали внутрижелудочно пентоксифиллин (400 мг/кг однократно) (Группа III); 6 животных получали внутрижелудочно п-тирозол (100 мг/кг однократно) (Группа IV). Через 2 ч после начала введения препарата у животных под эфирным наркозом катетеризировали общую сонную артерию для забора крови. В качестве стабилизатора использовали 3,8%-ный раствор цитрата натрия в соотношении с кровью 1:9. Получение богатой (БТП) и бедной (БеТП) тромбоцитами плазмы и подсчет числа тромбоцитов проводили по [I].

Из проб крови получали БТП и БеТП методом центрифугирования при 400 g и 1800 g соответственно на центрифуге ЦЛМН-Р10-01. В полученной БТП подсчитывали количество тромбоцитов микроскопическим методом при фазовом контрасте в камере Горяева. Для этого в силиконовую пробирку точно пипеткой отмеряли 1,98 мл разводящего 5%-ного раствора ЭДТА и осторожно вносили 0,02 мл БТП. В течение 2 мин содержимое пробирки тщательно перемешивали без вспенивания. Заполняли камеру Горяева и на 10 мин помещали для оседания тромбоцитов в чашку Петри со смоченной фильтровальной бумагой. Тромбоциты подсчитывали в 25 больших квадратах.

Для расчета числа тромбоцитов в 1 мм³ среднюю величину из двух параллельных определений умножают на 1000 (площадь 25 больших квадратов - 1 мм², высота камеры - 0,1 мм, разведение 1:100; следовательно, количество тромбоцитов должно быть умножено на 1×10×100=1000).

Нормальные пределы колебаний числа тромбоцитов в крови у крысы составляют от 430000 до 1 млн в 1 мм³ [4, 5].

После определения числа тромбоцитов в БТП проводили стандартизацию числа тромбоцитов, для чего БПТ разводили необходимым количеством БеТП до 400±30 тыс. в 1 мм³ в пробе.

Амплитуду агрегации тромбоцитов оценивали в стандартизованной плазме на приборе АТ-02, агрегатограммы регистрировали с помощью самописца Recorder 2210.

Статистическую обработку проводили с помощью ПСП "Statistica for Windows 4.3". Рассчитывали среднее значение, стандартную ошибку, для выявления межгрупповых различий использовали t-критерий Стьюдента.

Результаты исследований представлены в примерах 1-6.

Пример 1. Инкубирование крови в течение 60 мин при температуре 44°С приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 на 53%, 43%, 34%, 34% и 24% соответственно (табл.1, контроль).

Пример 2. У опытных крыс в группе I вязкость крови до инкубации была ниже, чем в контроле, при скоростях сдвига 50 с^-1 и 100 с^-1 на 10% и 5% соответственно. Инкубирование крови крыс этой группы приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 на 39%, 23%, 33%, 33% и 15% соответственно. После инкубации вязкость крови при скоростях сдвига 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 была ниже, чем в контроле, на 15%, 11%, 12% и 10% соответственно (табл.1, группа I).

Таким образом, на модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro пентоксифиллин ограничивает возрастание вязкости крови.

Пример 3. У опытных крыс в группе II до инкубации вязкость крови была ниже, чем в контроле, при скоростях сдвига 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 на 8%, 8%, 5% и 7% соответственно. Инкубирование крови крыс этой группы приводило к повышению вязкости крови при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1, 300 с^-1 на 26%, 25%, 23%, 21% и 16% соответственно. После инкубирования вязкость крови была ниже, чем в контроле, при скоростях сдвига 5 с^-1, 10 с^-1, 50 с^-1, 100 с^-1 и 300 с^-1 на 23%, 19%, 15%, 13% и 14% соответственно (табл. 1, группа II).

Таким образом, на модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro п-тирозол ограничивает возрастание вязкости крови. Выраженность гемореологического эффекта п-тирозола сопоставима с таковым у прототипа - пентоксифиллина.

Пример 4. В контрольной группе животных амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме составила 48±1% (табл.2, контроль).

Пример 5. У опытных крыс в группе III пентоксифиллин при однократном внутрижелудочном введении в дозе 400 мг/кг снижал амплитуду АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизированной плазме до 40±4%, что на 17% ниже показателя у крыс контрольной группы (табл.2, группа III).

Пример 6. У опытных крыс группы IV п-тирозол при однократном внутри-желудочном введении в дозе 100 мг/кг снижал амплитуду АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов в стандартизованной плазме до 39±3% (табл.2, группа IV). Амплитуда агрегации тромбоцитов была на 19% ниже, чем в контроле, и была близка к значению показателя у крыс в группе III.

Таким образом, п-тирозол в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно однократно обладает выраженным антиагрегантным эффектом, сравнимым по выраженности с пентоксифиллином в дозе 400 мг/кг.

Источники информации

1. Баркаган З.С., Момот А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза - Барнаул, 1998. - С.10-11.

2. Габриэлян Э.С., Акопов С.Э. Клетки крови и кровообращение. - Ереван, 1985. - 399 с.

3. Гуреева Н.В., Дарюхина Е.Н., Крысин А.И., Сторожок Н.М., Храпова Н.Г., Бурлякова Е.Б. О взаимосвязи строения и активности природных и синтетических антиоксидантов // Цитология. - 1999. - №9. - С.814-815.

4. Закревская А.Л. Тромбоциты крыс как модель исследования ингибиторов агрегации // Патологич. Функцион. Системы гемостаза. - Л., 1990. - С.46-54.

5. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Захария Е.А. Лабораторные животные - Киев, 1974. - 303 с.

6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина. - 1992. – 624 с.

7. Носаль Р. Современное состояние и перспективы антитромбоцитарной терапии / Словакофарма ревю. 2000. - №1-2. - С.14-19.

8. Плотников М.Б., Колтунов А.А., Алиев О.И. Метод отбора лекарственных веществ, влияющих на реологические свойства крови in vitro // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1996. - №6. - С.57-58.

9. Плотников М.Б., Алиев О.И., Маслов М.Ю., Васильев А.С., Тюкавкина Н.А. Коррекция синдрома повышенной вязкости крови в условиях ишемии мозга у крыс комплексом диквертина и аскорбиновой кислоты / Эксперим. и клинич. фармакология. - 1999. - №6. - С.45-47.

10. Koltringer P., Eber O., Lind P. et al. Microzirkulationun Viscoelastizitat des Vullblutes inter Gingko biloba extrakt. Eine placebocontrollierte randomisierte Doppelblind-Studie // Perfusion. - 1989. - Bd.1. - S.28-30.

Предложено гемореологическое и антитромбоцитарное средство. Средство представляет собой 4-(2-гидроксиэтил)-фенол, ранее известный как адаптоген, и средство против утомления и старости. Изобретение расширяет арсенал средств указанного назначения. 2 табл.

Применение 4-(2-гидроксиэтил)-фенола в качестве гемореологического и антитромбоцитарного средства.