СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ Российский патент 1999 года по МПК C12N1/20 C12Q1/10 A61K39/112 C12Q1/04 C12N1/20 C12R1/42 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам приготовления питательных сред для культивирования сальмонелл.

Известен способ приготовления питательной среды для культивирования сальмонелл (Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., 1978, С.362). Среда обогащения "М" (магниевая среда с малахитовым зеленым в прописи Г.П.Калины и В.Л.Шигановой). При этом поэтапно готовят три раствора:
Раствор А:
Пептон отечественный (семипалатинский) - 0,42 г
Хлорид Na - 0,7 г
Фосфат K - 0,15 г
Дрожжевой диализат - 0,9 мл
Дистиллированная вода - 89 мл
Раствор Б:
Хлорид Mg - 0,36 г
Дистиллированная вода - 9 мл
Раствор В:
Бриллиантовый зеленый (водный р-р 0,5%) - 0,09 мл
Затем эти растворы смешивают и стерилизуют при t=100^oC в течение 30 мин.

Недостатком данного способа приготовления питательной среды является ее многокомпонентность, сложность приготовления и использование в качестве питательной основы ценных пищевых продуктов (пептон, дрожжи).

Наиболее близким к заявляемому решению является способ приготовления питательной среды для культивирования энтеробактерий (SU a.c.N 1708834, МПК C 12 1/20, 1990). При этом берут следующие компоненты:
Фосфорнокислый двузамещенный Na, г - 8,2 - 8,7
Фосфорнокислый однозамещенный K, г - 2,2 - 2,7
Гуминовая кислота, г - 0,01- 0,04
разводят в 100 мл дистиллированной воды, затем доводят объем до 1000 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 минут.

В качестве питательной основы здесь используют непищевое сырье - гуминовую кислоту. Однако получение гуминовой кислоты требует больших технических затрат, поэтому данный способ дорогостоящий, а ростовые свойства в отношении сальмонелл недостаточно высокие.

Задача, решаемая изобретением - получение недорогой питательной среды из непищевого сырья с повышенными ростовыми свойствами в отношении сальмонелл.

Поставленная задача решается следующим образом: при приготовлении питательной среды бентонитовую глину смешивают с фосфатным буфером, имеющим pH 7,4, настаивают раствор 3-5 часов, затем фильтруют его и дистиллированной водой доводят до 1 л. Стерилизуют текучим паром дважды (100^oC 30 мин). При этом для приготовления 1 л питательной среды исходные компоненты берут в следующем соотношении, г/л:
Na фосфорнокислый двузамещенный - 8,2 - 8,7
K фосфорнокислый однозамещенный - 2,2 - 2,7
Бентонитовая глина - 100 - 150
Дистиллированная вода - До 1 л
Питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7,4. В полученную питательную среду дозированно вносят суспензию бактерий с целью накопления биомассы. Заражающая доза 1000 микробных клеток в 1 мл среды. Пробирки с инокулированной питательной средой инкубируют в термостате при 37^oC. 3атем, для определения прироста бактериальной массы, производят серийные высевы бактерий на чашки Петри с дифференциально-диагностическими средами (Плоскирева, висмут-сульфитный агар) с учетом необходимых разведений.

Испытания среды проведены со штаммом Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium.

Результаты роста сальмонелл на различных питательных средах приведены в таблице. Из приведенных данных видно, что прирост сальмонелл в заявляемой питательной среде, содержащей Na фосфорнокислого двузамещенного 8,2 - 8,7 г, К фосфорнокислого однозамещенного 2,2 - 2,7 г, бентонитовую глину 100 - 150 г на 40-50% выше по сравнению с прототипом. Процесс приготовления питательной среды прост, не требует специального оборудования и реактивов. Применение предлагаемой среды для культивирования сальмонелл в микробиологической промышленности и микробиологических исследованиях позволяет снизить себестоимость целевого продукта и повысить выход бактериальной массы.

Бентонитовые глины относятся к минералам группы монтмориллонита, которые характеризуются как присутствием в их составе большого разнообразия химических элементов: Si, Al, Mg, Ca, Na, K, Fe, P и в меньших количествах: Ba, Cu, B, Mn, Ag, Cr и т.д., так и являясь хорошим природным адсорбентом, значительно обогащены органическими веществами. В медицинской микробиологии благодаря их адсорбционным свойствам их используют в качестве коагулянтов бактерий (SU, а.с. N 1585335, НИ C 12 1/04, "Способ выделения иерсиний").

В предлагаемом изобретении бентонитовые глины применяют в качестве основы для питательных сред, т.к. благодаря наличию большого количества активных центров на поверхности минерала природные бентониты способны адсорбировать простые органические вещества (аминокислоты, липиды, углеводы) легкоусвояемые бактериями в отличие от гуминовых кислот, представляющих собой непостоянного состава смесь простых и сложных органических веществ, не всегда доступных для питания бактерий.

Сущность изобретения поясняется примерами.

Пример 1.

Для приготовления 1 л питательной среды 125 г измельченной бентонитовой глины заливают до 1 л фосфатно-буферным раствором, содержащим г/л: Na фосфорнокислый двузамещенный -8,5, К фосфорнокислый однозамещенный - 2,5, настаивают 4 часа. Полученный настой фильтруют, доводят до 1 л дистиллированной водой. Стерилизуют текучим паром дважды (100^oC в течение 30 минут).

Полученная питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7,4.

За сутки культивирования количество S.enteritidis составило 480±48, S. typhimurium - 364±28.

Пример 2.

Питательную среду готовят аналогично примеру 1. Состав питательной среды: г/л Na фосфорнокислый двузамещенный - 8,2; К фосфорнокислый однозамещенный - 2,2; бентонитовая глина - 100; дистиллированная вода - до 1 л. Бентонитовую глину настаивают 3 часа. Полученная питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7.4. За сутки культивирования количество S.enteritidis составило 565±34, S.typhimurium - 512±30.

Пример 3.

Питательную среду готовят аналогично примеру 1. Состав питательной среды: г/л Na фосфорнокислый двузамещенный - 8,7; К фосфорнокислый однозамещенный - 2,7, бентонитовая глина - 150, дистиллированная вода - до 1 л. Бентонитовую глину настаивают 5 часов. Питательная среда слегка опалесцирует, не имеет специфического запаха, pH среды 7,4. Испытание среды аналогично примеру 1. За сутки культивирования количество S.enteritidis составило 572±16, S.typhimurium - 515±25.

Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда содержит бентонитовую глину и фосфатный буфер с pН 7,4. Благодаря наличию активных центров на поверхности бентонитов происходит адсорбция органических веществ, легкоусвояемых бактериями. Применение среды позволит повысить выход бактериальной массы. 1 табл.

Способ приготовления питательной среды для культивирования сальмонелл, включающий смешивание компонентов среды и ее стерилизацию, отличающийся тем, что приготовление питательной среды ведут путем смешивания бентонитовой глины с фосфатным буфером, имеющим pH 7,4, настаиванием в течение 3 - 5 ч с последующим фильтрованием, при этом для приготовления 1 л питательной среды исходные компоненты берут в следующем соотношении, г/л:
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 8,2 - 8,7
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,2 - 2,7
Бентонитовая глина - 100 - 150
Дистиллированная вода - До 1 л