ПРОИЗВОДНЫЕ 2-АМИНО-4-ФЕНИЛ-4-ОКСОМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 1999 года по МПК C07C229/36 A61K31/195 

Изобретение относится к применению производных 2-aминo-4-фeнил-4-оксомасляной кислоты для предупреждения или лечения нейроперерожденных заболеваний, таких, например, как хорея Гентингтона, болезни Альцгеймера и Паркинсона, деменция, вызванная синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИДом) или инфарктом, церебральная ишемия, церебральная гипоксия или эпилепсия. Соединения действуют как ингибиторы кинурениназы и/или кинуренин-3-гидроксилазы, ферменты, которые образуют часть метаболического пути кинуренина.

Другая цель изобретения включает новые соединения, либо присутствующие в качестве единичных энантиомеров, либо в виде их смеси, полученной из 2-амино-4-фенил-4-оксомасляной кислоты и ее фармацевтически приемлемых солей, способ их получения, а также содержащие их фармацевтические композиции.

Известно, что метаболический путь триптофана через кинуренин приводит, с одной стороны, к образованию хинолиновой кислоты, а с другой - кинурениновой кислоты, как показано на следующей схеме:

Хинолиновая кислота
На приведенной выше схеме символ означает, что некоторые стадии метаболизма триптофана пропущены.

k-ase - кинурениназа
K-OH - кинуренин-3-гидроксилаза
3-OH-K-ase - 3-гидрокси-кинурениназа
KAT - кинуренин-аминотрансфераза
Церебральное образование хинолиновой кислоты, эндогенного антагониста рецептора N-метил-D-аспаргиновой кислоты, относили к патогенезу различных нейроперерожденных заболеваний (Life Science, v.35, 19-32, 1984).

Прямая инфузия хинолиновой кислоты в мозг лабораторных животных продуцирует специфические поражения, которые, c точки зрения гистопатологии, близко напоминают повреждения, наблюдаемые при нейроперерожденных заболеваниях человека, в частности при хорее Гентингтона и эпилепсии, связанной с височной долей головного мозга (Science, v.2l9, 316-318, 1983).

Метаболизм хинолиновой кислоты был изучен в течение многих лет на периферических органах (J. Biol. Chem., v.238, 3369-3377, 1963; v.239, 1208-1214, 1964). Не так давно хинолиновая кислота была идентифицирована в мозге грызунов и человека (Neuroac. Lett. , v.41, 247-252, 1983; Brain Res. v. 295, 352-356, 1984), где присутствуют ферменты, ответственные за метаболический путь, который приводит к ее образованию (J. Neurochem. v.47, 23-30, 1986; v. 44, 446-454, 1985).

В литературе имеются недавние сообщения об увеличении содержания хинолиновой кислоты, сопровождающей неустойчивую ишемию у песчанки (J. Neurochem. , v.60, 180-192, 1993). Это явление было связано с индукцией ферментов метаболизма кинуренинов, которая приводит к образованию хинолиновой кислоты.

Одновременно наблюдалось увеличение активности кинурениназы и кинуренин-3-гидроксилазы, вовлеченных в синтез этой кислоты.

Следовательно, соединения, способные ингибировать эти ферменты и чье действие было бы сопряжено с уменьшением образования хинолиновой кислоты (которую можно рассматривать как нейротоксичный продукт катаболизма триптофана), были бы полезны при предупреждении и лечении всех патологий, связанных с хинолиновой кислотой или чрезмерной активацией нейротрансмиссии, медиированной N-метил-D-аспаргиновой кислотой.

Цель настоящего изобретения представляет собой также применение производных 2-амино-4-фенил-4-оксомасляной кислоты формулы I, действующих как ингибиторы кинурениназы и/или кинуренин-3-гидроксилазы, для предупреждения или лечения нейроперерожденных заболеваний, таких, например, как хорея Гентингтона, болезни Альцгеймера и Паркинсона, деменция, вызванная синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИДом) или множественным инфарктом, церебральная ишемия, церебральная гипоксия или эпилепсия:

где каждая из групп X и Y независимо представляет собой водород, галоген, трифторметил, гидрокси, C₁-C₆ алкил, бензил, C₆-C₁₀ арил, -OR', -SR', SOR или SO₂R, где R' представляет собой C₁-C₆ алкил или бензил; R представляет собой гидрокси, амино, гидроксиламино, OR', -NHR', -NR'₂ или -NHOR', где R' имеет значения, определенные выше.

Настоящее изобретение включает также фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I, также все возможные изомеры (энантиомеры), включенные в формулу I, как по отдельности, так и в смеси, используемые для предупреждения и/или лечения перечисленных выше заболеваний.

Изобретение относится также к некоторым новым производным соединений формулы I. Эти новые соединения, которые составляют другую цель изобретения, имеют формулу IA:

где каждая из групп X и Y независимо представляет собой водород, галоген, трифторметил, гидрокси, C₁-C₆ алкил, бензил, C₆-C₁₀ арил, OR', -SR', SOR или SO₂R, где R' представляет собой C₁-C₆ алкил или бензил; R представляет собой гидрокси, амино, гидроксиламино, OR', -NHR', -NR'₂ или -NHOR', где R' имеет значения, определенные выше, при условии, что R не является гидрокси, когда:
1) X и Y одновременно представляют собой водород или
2) X и Y находятся в положении 3 и 4 фенильного кольца и одновременно представляют собой гидрокси или -OR' - группу, где R' - метил; или
3) одна из групп X и Y представляет собой водород, а другая находится в положении 4 фенильного кольца и представляет собой гидрокси, хлор, фтор, метил, н-пропил или метокси.

Изобретение включает также фармацевтически приемлемые соли соединений формулы IA, а также все возможные изомеры (энантиомеры), включенные в формулу IA, как по отдельности, так и в смеси.

Соединения формулы IA представляют собой выбранный класс соединений формулы I и поэтому также активны при предупреждении и/или лечении всех заболеваний, для которых соединения формулы I были указаны в качестве терапевтических средств.

По отношению как к продуктам формулы I, так и к продуктам формулы IA, значения различных заместителей включают следующие радикалы.

Термин "C₁-C₆ алкил" включает, например, метил, зтил, н-пропил, изопропил и н-бутил; предпочтительно он представляет собой метил, этил или н-пропил.

Термин "галоген" включает хлор, фтор, иод или бром; предпочтительно он представляет собой хлор, бром или фтор.

Термин "C₆-C₁₀ арил" включает, например, фенил и нафтил; предпочтительно он представляет собой фенил.

Соединения формулы I или IA имеют асимметричный атом углерода, и по этой причине они могут существовать либо в смеси оптических изомеров (энантиомерной смеси), либо в качестве отдельного оптического изомера (энантиомера).

Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы I или IA включают соли фармацевтически приемлемых кислот, как неорганических (соляная, бромистоводородная, азотная или серная), так и органических кислот (лимонная, винная, малеиновая, фумаровая, метансульфо- или этансульфокислота), и соли фармацевтически приемлемых оснований, как неорганических (гидроокиси щелочных металлов, например калия или натрия, или щелочноземельных металлов, например кальция, магния, цинка или алюминия), так и органических оснований (метиламин, диэтиламин, триэтиламин, этиламин или гетероциклические амины, например пиперидин).

Отдельный класс соединений формулы IA согласно изобретению представляет собой соединения формулы IA, где R - гидрокси и где
а) одна из групп X и Y представляет собой водород, а другая - C₁-C₆ алкил или трифторметил в положении 2, 3 или 4 фенильного кольца, при условии, что когда C₁-C₆ алкил находится в положении 4 фенильного кольца, она не является ни метилом, ни н-пропилом; или
б) одна из групп X и Y представляет собой водород, а другая - галоген в положении 2, 3 или 4 фенильного кольца, при условии, что когда галоген находится в положении 4 фенильного кольца, она не является ни хлором, ни фтором; или
в) одна из групп X и Y представляет собой водород, а другая группа - -OR', где R' представляет собой C₁-C₆ алкил в положении 2, 3 или 4 фенильного кольца, при условии, что когда -OR' находится в положении 4 фенильного кольца, C₁-C₆ алкил не является метилом; или
г) одна из групп X и Y представляет собой -OR', где R' - C₁-C₆ алкил, а другая представляет собой галоген;
либо в виде отдельных изомеров, либо в виде их смеси, и их фармацевтически приемлемые соли.

Ниже приведены конкретные примеры предпочтительных соединений формулы IA либо в виде единичных изомеров, либо в виде их смеси:
2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(3'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(2'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(3'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(2'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(3'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
2 -амино-4-(3',4'-дихлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(2'-метилфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(2'-трифторметилфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(3'-трифторметилфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(4'-трифторметилфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(2'-метокси-5'-бромфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(2'-метокси-5'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
2-амино-4-(2'-метокси-5'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота;
и их фармацевтически приемлемые соли.

Соединения формулы I и IA получают способом, включающим следующие стадии:
А) взаимодействие соединения формулы II

где X и Y определены выше, с солью щелочного или щелочноземельного металла соединения формулы III

где R'' - водород или метил, получая в результате соединение формулы IV

где X, Y и R'' определены выше;
Б) обработку соединения формулы IV концентрированной галоидоводородной кислотой, получая соединение формулы I или IA, где X и Y определены выше и R представляет собой гидрокси;
В) необязательное превращение соединения формулы I или IA в другое соединение формулы I или IA, где R отличен от гидрокси;
Г) необязательное образование соли соединения формулы I или IA;
Д) необязательное разделение изомерной смеси соединения формулы I или IA на отдельные изомеры.

Соединения формулы I или IA можно также получить непосредственно в виде отдельных оптических изомеров (энантиомеров) методом энантиоселективного синтеза.

Реакцию стадии А проводят, например, в присутствии подходящего растворителя, в частности этанола или диметилформамида (ДМФ), при температуре, которая может изменяться от 0 до 80^oC, и за время от 4 до 24 часов.

Реакцию стадии Б, которая вызывает гидролиз и одновременное декарбоксилирование соединения формулы IV, проводят, например, обработкой соединения формулы IV концентрированной галоидоводородной кислотой, например 37%-ной соляной или 48%-ной бромистоводородной кислотой, при температуре около 100^oC в течение 4-6 часов.

Конверсию стадии В проводят по хорошо известным методикам, взяв в качестве исходного соединения формулу I или IA, где X и Y определены выше и R представляет собой гидрокси.

Солеобразование по стадии Г осуществляют по стандартным методикам.

Разделение в соответствии со стадией Д проводят по хорошо известным методикам, например с помощью хроматографии на хиральной неподвижной фазе или разделением путем диастереоизомерного солеобразования и последующего разделения методом селективной кристаллизации.

Разделение с помощью кристаллизации диастереоизомерных солей, полученных по реакции солеобразования соединений формулы I или IA или их соответствующих защищенных производных с подходящими оптически активными кислотами или основаниями, проводят по известным методикам, обычно применяемым в процессах разделения аминокислот на их энантиомеры (см., например, P.Newman, Optical Resolution Procedures for Chemical Compounds, Vol.2,.part 1, Optical Resolution Information Centre, Manhattan College, Riverdale, New York, 1981).

Защиту на кислотном фрагменте и на основной группе соединения формулы I или IA осуществляют по известным методикам. К подходящим для этой цели защитным группам относятся, например, метиловый, этиловый, бензиловый и третбутиловый эфиры, предпочтительно бензиловый и третбутиловый эфиры. Подходящими защитными группами для амино-фрагмента являются амиды, в частности ацетиламид, трифторацетиламид или бензамид, предпочтительно ацетиламид, или карбаматы, в частности третбутоксикарбониламино или бензилоксикарбониламино, предпочтительно бензилоксикарбониламино.

Соединения формулы II представляют собой либо известные соединения, выпускаемые промышленностью, либо соединения, получаемые по хорошо известным методикам.

Кроме того, соединения формулы III представляют собой либо известные соединения, либо могут быть получены известными методами из известных продуктов.

Как было сказано, соединения формулы I или IA можно также получать посредством энантиоселективного синтеза по известным методикам.

Энантиомеры соединения формулы I или IA получают по хорошо известным методикам (см., например, F.G. Salituro and I.A. McDonald, J. Org. Chem., v. 53, 6138-39, 1988; R. Pelliciary, Tetragedron Letters, v.33, 3003-3004, 1992).

Общая методика энантиоселективного синтеза кратко представлена на схеме I, где все заместители, если не указано особо, определены выше и где Z представляет собой подходящую аминозащитную группу.

Более подробно, индивидуальный (R) или (S) энантиомер соединения формулы I или IA получают способом, который включает:
а) взаимодействие соединения формулы V

где X и Y определены выше, с индивидуальным (R) или (S) энантиомером соединения формулы VI

где Z - подходящая аминозащитная группа, получая индивидуальный (R) или (S) энантиомер соединения формулы VII

где X, Y и Z определены выше;
b) снятие защиты с соединения формулы VII, получая индивидуальный (R) или (S) энантиомер соединения формулы VIII

где X, Y и Z определены выше;
с) дополнительное снятие защиты с соединения формулы VIII, получая индивидуальный (R) или (S) энантиомер соединения формулы I или IA, которое в зависимости от условий реакции представляет собой свободную аминокислоту или ее соль, причем (R)- или (S)-конфигурация соединения формулы VI сохраняется в течение всего процесса, приводя к получению соединения формулы I или IA.

Соединения формулы I или IA можно также получить непосредственно из соединения формулы VII по известным методикам, например кислым гидролизом.

Предпочтительно подходящая аминозащитная группа Z представляет собой бензилоксикарбонильную группу.

Взаимодействие соединения формулы V с индивидуальным (R) или (S) энантиомером соединения формулы VI как источником соответствующей хиральности проводят, например, в присутствии каталитического количества растворимого палладиевого катализатора, в частности дихлорида палладия (II) с бис-трифенилфосфином, комплекса хлорида палладия (II) c диацетонитрилом или палладий-бис(дибензилиденацетона), в подходящем органическом растворителе, например толуоле, хлороформе или тетрагидрофуране, при температуре от 25 до 60^oC в течение 1-10 ч (см., например, J. Org. Chem., v.48, 4634-4642, 1983 и J. Am. Chem. Soc. , v.105, (19), 6129-6137, 1983), получая соединение формулы VII соответствующей (R)- или (S)-конфигурации, аналогичной конфигурации исходного соединения формулы VI. Как уже было сказано, указанная конфигурация исходного соединения формулы VI сохраняется по всему процессу.

Соединение формулы VII может быть последовательно подвергнуто снятию защиты по известным методикам до получения соответствующего (R) или (S) энантиомера соединения формулы VIII (Chem. Pharm. Bull., v.17 (8), 1679-1686, 1969), например, обработкой соединения формулы VII разбавленной водной гидроокисью щелочного металла, в частности гидроокисью натрия, калия или лития, предпочтительно гидроокисью натрия, в подходящем органическом растворителе, например этаноле или метаноле.

Соединение формулы VIII можно дополнительно подвергнуть снятию защиты по известным методикам до получения соответствующего (R) или (S) энантиомера соединения формулы I или IA, например, взаимодействием с триметилсилилиодидом в подходящем органическом растворителе, например хлороформе (см. J. Chem. Soc. Comm., 495-496, 1979), или каталитической гидрогенизацией (см. J. Org. Chem. , v.44, 3442-44, 1979 и J. Org. Chem., v.43, 4194-96, 1978), или кислым гидролизом, обычно нагревая соединение формулы VIII в 6 н. соляной кислоте при температуре от 60 до 110^oC в течение 2-10 ч.

Соединения формулы I или IA, полученные по приведенным выше методикам, могут находиться в виде свободных аминокислот или их солей; при желании по известным методикам можно провести конверсию соли в соответствующую свободную аминокислоту, например, обработкой соответствующей соли соединения формулы I или IA, растворенной в подходящем растворителе, обычно изопропаноле, с пропиленоксидом, или с применением ионообменной хроматографии, или вызывая осаждение свободной аминокислоты из его водного раствора в изоэлектрической точке.

Соединения формулы V представляют собой известные соединения (J. Chem. Soc. B, 1036-40, 1967 и J. Organometallic Chem., v.10, 529-30, 1967) или могут быть получены по известным методикам - либо прямым трансметаллированием соответствующих ароматических углеводородов, т.е. замещением металла в металлорганическом (литийорганическом) соединении (J. Org. Chem., v.41, 3653-63, 1976 и J. Org. Chem., v.41, 1487-1493, 1976, и J. Organometallic Chem., v.11, 209-216, 1968), либо металогалогенным обменом подходящим образом замещенного бром- или иодбензола (R.G. Janes, Org. React., VI, 339-366) с последующим взаимодействием с хлоридом триметилолова в подходящем органическом растворителе, например этиловом эфире или тетрагидрофуране. Соединения формулы V можно также получить по методикам, описанным в Bull. Chem. Soc. Japan, v.56, 3855-56, 1983, по реакции гексаметилдиолова с соответствующим арилиодидом, катализируемой палладием.

Соединения формулы VI представляют собой известные соединения или могут быть получены по известным методикам (Tetragedron, v.42, 6551-54, 1986, Synthetic Communications, v.20(22), 3507-3517, 1990).

По другому варианту соединения формулы I или IA можно получить либо в виде индивидуальных энантиомеров, либо в виде энантиомерной смеси по представленной ниже схеме II, где все заместители, если не указано особо, были определены выше:

где R₁ представляет собой водород, метил, трифторметил, C₁-C₆ алкокси или бензилокси.

Более подробно соединения формулы I или IA в виде индивидуального энантиомера (S) или (R) либо в виде рацемической смеси получают следующим способом который включает:
а') взаимодействие соединения формулы IX

где X и Y определены выше, с соединением формулы X

где R₁ представляет собой водород, метил, трифторметил, C₁-C₆ алкокси или бензилокси, либо в виде индивидуального энантиомера (S) или (R), либо в виде рацемической смеси, получая соединение формулы XI,

где X и Y определены выше, либо в виде индивидуального энантиомера (S) или (R), либо в виде рацемической смеси;
б') превращение соединения формулы XI, присутствующего либо в виде индивидуального энантиомера (S) или (R), либо в виде рацемической смеси, в индивидуальный энантиомер (S) или (R) либо в рацемическую смесь соединения формулы I или IA, где X и Y определены выше и R представляет собой гидрокси, и при желании превращение соединения формулы I или IA, где R представляет собой гидрокси, в соединение формулы I или IA, где R отличен от гидрокси.

Предпочтительно R₁ представляет собой водород, метокси или этокси.

Взаимодействие соединения формулы IX с соединением формулы X в соответствии с описанной выше стадией а') проводят по известным методикам (см., например, J.E.Nordlamder, J. Org. Chem., v.50, pp.3619-22, 1985 и D.G.Melillo, J. Org. Chem. , v.52, pp.5143-50, 1987); например реакцию проводят в присутствии подходящего катализатора в виде кислот Льюиса в инертном растворителе, например в дихлорметане или дихлорэтане, обычно в дихлорметане, или в подходящем ароматическом углеводороде, например в хлорбензоле, бензоле, нитробензоле, или смеси таких растворителей при температуре от -5^oC до 60^oC и необязательно в присутствии сорастворителя, например нитрометана. Походящая кислота Льюиса может представлять собой, например, безводный трихлорид алюминия, безводный дихлорид олова, тетрахлорид титана или дихлорид цинка, но, как правило, трихлорид алюминия.

Превращение соединения формулы XI в соединение формулы I или IA в соответствии с описанной выше стадией б') проводят по известным методикам в кислых или щелочных средах.

Щелочной гидролиз осуществляют с помощью гидроокиси щелочного металла, в частности лития, натрия или калия, или карбоната натрия, в подходящем растворителе, в частности водном метаноле или этаноле, при температуре от 0 до 50^oC. Кислый гидролиз осуществляют с помощью галоидоводородной кислоты, например хлористо- или бромистоводородной кислоты, при температуре от 60 до 100^oC за время, которое изменяется от 4 до 12 часов.

Превращение соединения формулы I или IA, где R представляет собой гидрокси, в соединение формулы I или IA, где R отличен от гидрокси, проводят по известным методикам.

В тех случаях, когда соединение формулы XI получают в виде региоизомеров, соответствующие изомеры выделяют с помощью известных методов, в частности хроматографией или селективной кристаллизацией.

Соединения формулы IX и X представляют собой известные соединения или могут быть получены известными методами.

Эффективность заявленных соединений в отношении ингибирования кинурениназы была оценена в экспериментах на гомогенатах печени крысы, описанных О. Такикавой (Takikawa О. et al. в J.Biol. Chem., v. 261(8), 3648-3652 (1986), с незначительными изменениями.

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии представлял собой по существу метод Такикавы с использованием флуориметрического детектора с длиной волны 313-420 нм, но на колонке Нова-Пак C18 размером 3,9 х 300 мм с подвижной фазой в виде фосфатного буфера (80 мМ) с 13% CH₃CN и pH 2,5.

Эффективность заявленных соединений по ингибированию кинуренин-3-гидроксилазы была измерена на гомогенатах печени крысы путем определения конверсии L-кинуренина в L-3-гидроксикинуренин по описанной ниже методике.

Тест на ингибирование кинурениназы в печени крысы
Печень крысы гомогенизируют в холодном 0,32 М растворе сахарозы. Гомогенаты центрифугируют при скорости вращения 12000 об/мин в течение 30 мин при 4^oC. Осадок после трехкратной промывки 0,32 М раствором сахарозы повторно суспендируют в смеси 20 мМ K-буфера + 0,14 М KCl при pH 7 (1 г печени в 6,5 мл).

Реакционная смесь (200 мкл) содержит 65 мкл ресуспендированного гомогената, 50 мл фосфатного буфера при pH 7,5, MgCl₂ (2 мМ), 6-фосфат глюкозы (1,5 мМ), глюкозо-6-фосфатгидрогеназу (4 мкл), никотинамидаденин-динуклеотид-фосфат (NADP) (0,4 мМ) и 25 мкМ кинуренина и молекулы, которые должны быть испытаны при скрининговой дозе в 1 мМ и 100 мкМ.

Реакцию при 37^oC заканчивают добавлением 200 мкМ HClO₄ после 10-минутной инкубации. Содержание 3-гидроксикинуренина, полученного в присутствии и в отсутствие испытываемых молекул, определяют методом ВЭЖХ с кулонометрическим детектором (+0,20), используя для разделения колонку с обращенной фазой типа C18 длиной 10 см и размером частиц 3 мкМ. Состав подвижной фазы: 950 мл воды для ВЭЖХ, 20 мл ацетонитрила, 9 мл триэтиламина, 5,9 мл фосфорной кислоты, 100 мг натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и 1,5 г гептансульфоновой кислоты.

Заявленные соединения - (R, S) 2-амино-4-фенил-4-оксомасляная кислота (FCE 27377) и (R,S) 2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота (FCE 27384) были испытаны по описанным выше методикам. Полученные результаты, представленные в Таблице 1, демонстрируют эффективность испытываемых соединений для ингибирования активности кинурениназы и/или кинуренин-3-гидроксилазы в гомогенатах печени крысы при указанных концентрациях (см. в конце описания).

Эффективность заявленных соединений как ингибиторов кинурениназы и/или кинуренин-3-гидроксилазы была также оценена на гомогенатах мозга крысы по описанным ниже методикам.

Тест на ингибирование кинурениназы в мозгу крысы
Частичную очистку кинурениназы мозга крысы проводили по методике, описанной в сб. "Успехи в исследовании триптофана" Ли с соавторами (Lee et al., "Isolation and characterization of kinureninase from rat liver", Advances in Tryptophan Research, 431-434, 1992).

Для выполнения этого теста готовят смесь конечным объемом 0,2 мл и pH 8, содержащую 100 мМ tris-HCl, 50 мкл пиридоксальфосфата, 300 мкМ кинуренина, 20 мкл частично очищенного энзима и 100 мкМ раствора ингибитора.

Реакцию проводят при 37^oC в течение 3 часов и затем останавливают добавлением 50 мкл 2 н. хлорной кислоты. После центрифугирования со скоростью вращения 11000 об/мин в течение 15 мин определяют антраниловую кислоту в верхнем слое методом ВЭЖХ с флуорометрическим детектором по методике, описанной для теста с печенью крысы.

Тест на ингибирование кинуренин-3-гидроксилазы в мозгу крысы
Активность в отношении кинуренин-3-гидроксилазы количественно определяют по конверсии L-кинуренина в 3-гидроксикинуренин. Мозг гомогенизируют в охлажденном на льду 0,32 М растворе сахарозы и центрифугируют при 12000g в течение 30 мин при 4^oC. Лепешку промывают 3 раза 0,32 М раствором сахарозы с помощью центрифугирования и суспендируют в 0,14 М растворе KCl и 20 мМ K-фосфатном буфере с pH 7 (1 г ткани в 2 мл буфера).

Реакционная смесь содержит 75 мкл суспендированного гомогената; 100 мкл раствора субстрата, содержащего 50 мМ K-фосфатный буфер с pH 7,5, 2 мМ MgCl₂, 0,4 мМ NADPH и 50 мкМ L-кинуренина (конечная концентрация); 25 мкл раствора ингибиторов различной концентрации.

Реакцию останавливают добавлением 200 мкл 1М раствора HClO₄ после 60-минутной инкубации. Образующийся 3-гидроксикинуренин количественно определяют методом ВЭЖХ с кулонометрическим детектором (рабочее напряжение +0,2 В). Используют колонку C18 длиной 10 см с обращенной фазой (3 мкм). Подвижная фаза состояла из 950 мл дистиллированной воды, 20 мл ацетонитрила, 9 мл триэтиламина, 5,9 мл фосфорной кислоты, 100 мг натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и 1,5 г гептансульфоновой кислоты. Скорость потока составляет 1 мл/мин.

Представительный ряд соединений, заявленных в настоящем изобретении, а именно:
FCE 27377 (R,S)-2-амино-4-фенил-4-оксомасляная кислота;
FCE 28486 (S)-2-амино-4-фенил-4-оксомасляная кислота;
FCE 28469 (R)-2-амино-4-фенил-4-оксомасляная кислота;
FCE 27384 (R,S)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28631 (R,S)-2-амино-4-(2'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28628 (R,S)-2-амино-4-(4'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28630 (R,S)-2-амино-4-(2'-метилфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28626 (S)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28629 (R,S)-2-амино-4-(3'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28680 (R,S)-2-амино-4-(3'-трифторметилфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28751 (R,S)-2-амино-4-(4'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28752 (R,S)-2-амино-4-(3'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28753 (R,S)-2-амино-4-(2'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28764 (R,S)-2-амино-4-(3'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28766 (R, S)-2-амино-4-(2'-метокси-5'-фторфенил)-4- оксомасляная кислота;
FCE 28833 (R,S)-2-амино-4-(3',4'-дихлорфенил)-4-оксомасляная кислота;
FCE 28836 (R, S)-2-амино-4-(2'-метокси-5'-хлорфенил)-4- оксомасляная кислота;
был испытан по методикам на описанных выше гомогенатах мозга крысы.

Полученные результаты, представленные в Табл. 2 (см. в конце описания), демонстрируют эффективность испытываемых соединений для ингибирования активности кинурениназы и/или кинуренин-3-гидроксилазы в гомогенатах мозга крысы. Активность соединений была представлена в виде процентного выражения величины ингибирования при концентрации 100 мкМ и в некоторых случаях в виде величины IC₅₀ (концентрация, которая ингибирует 50% активности энзима).

Соединения, заявленные в настоящем изобретении, назначают млекопитающему, в том числе человеку, в различных дозируемых формах, например орально в виде таблеток, капсул, сахаросодержащих или покрытых пленкой таблеток, жидких растворов или суспензий; ректально в виде суппозиториев; парентерально, например, путем внутримышечной или внутривенной инъекции или путем инфузии.

Дозировка зависит от возраста, веса, состояния пациента и пути введения препарата; например доза, пригодная для орального применения у взрослых, может изменяться приблизительно от 25 от 500 мг на единичную дозу при одно- - пятикратном приеме.

Изобретение предлагает также фармацевтические композиции, включающие соединение в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Фармацевтические композиции, содержащие заявленные соединения, готовят по стандартным методикам и назначают в подходящих фармацевтических формах. Например, твердые формы для орального применения могут содержать активный ингредиент вместе с разбавителями, например лактозой, декстрозой, сахарозой, целлюлозой, кукурузным или картофельным крахмалом; замасливателями, например тальком, стеариновой кислотой, стеаратом магния или кальция и/или полиэтиленгликолями; связующими, например крахмал, гуммиарабик, желатин, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза или поливинилпирролидон; дезаггрегирующими агентами, например крахмалом, альгининовой кислотой, альгинатами или гликолятом натрийсодержащего крахмала; вспенивающими смесями; красителями; смачивателями, например лецитином, полисорбитом, лаурилсульфатами; и, как правило, с нетоксичными и фармакологически инертными веществами, используемыми в фармацевтических препаративных формах.

Указанные фармацевтические препаративные формы получают известными методами, например смешиванием, гранулированием, таблетированием и с помощью различных пленкообразующих процессов. Жидкие дисперсии для орального применения могут представлять собой сиропы, эмульсии и суспензии. Сиропы содержат носитель, например сахарозу или сахарозу с глицерином, и/или маннит, и/или сорбит; в частности сироп, назначаемый пациентам, больным диабетом, может содержать в качестве носителей продукты, которые не дают вообще или дают лишь незначительное количество глюкозы в качестве продуктов метаболизма, например сорбит.

Суспензии или эмульсии содержат в качестве носителя, например, природную смолу, агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливиниловый спирт.

Суспензии или растворы для внутримышечных инъекций содержат вместе с активным ингредиентом фармацевтически приемлемый носитель, например стерильную воду, оливковое масло, этилолеат или гликоли, в частности пропиленгликоль, и при желании подходящее количество гидрохлорида лидокаина.

Растворы для внутривенных инъекций или вливаний могут содержать в качестве носителя стерильную воду или предпочтительно находяться в виде
изотонических водных солевых растворов.

Суппозитории могут содержать вместе с активным соединением фармацевтически приемлемый носитель, например кокосовое масло, полиэтиленгликоль, поверхностно-активное вещество на основе полиоксиэтиленовых эфиров сорбита или лецитин.

Следующие примеры иллюстрируют, но не ограничивают настоящее изобретение.

При этом приняты следующие обозначения:
MS - масс-спектрометрия;
¹H-NMR - ПМР (протонный магнитный резонанс);
t - триплет, s - синглет, d - дублет, broad d/s - широкий дублет/синглет, dd - двойной дублет, q - квартет;
Calculated - вычислено; Found - найдено.

Пример 1
Получение этил-4-(2'-метоксифенил)-4-оксо-2-формиламидо- 2-карбоэтоксибутирата
Добавляют 2,85 г диэтил-α-формамидомалоната (0,014 моля) к раствору этилата натрия, полученного из 0,32 г (0,014 моля) металлического натрия и 30 мл абсолютного этанола и оставляют при перемешивании на 45 мин при 40-50^oC. Полученному раствору дают остыть до комнатной температуры, прибавляют по каплям к раствору α-бром-2'-метоксиацетофенона (3 г, 0,0131 моля, в 10 мл абсолютного этанола) и оставляют при перемешивании на 24 часа. Смесь выпаривают досуха, разбавляют этилацетатом и промывают водой. Органический слой отделяют, сушат (Na₂SO₄), фильтруют и выпаривают, получая 5 г темно-коричневого масла, отверждающегося самопроизвольно при стоянии. Твердый остаток растирают этиловым эфиром с получением 2,8 г желаемого продукта в виде белого твердого вещества с т.пл. 100-112^oC.

Следующие соединения могут быть получены по той же методике:
этил-4-фенил-4-оксо-2-формиламидо-2-карбоэтоксибутират, т.пл. 110-111^oC;
этил-4-(3'-метоксифенил)-4-оксо-2 -формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(4'-метоксифенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2'-фторфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2-карбоэтоксибутират;
этил-4-(3'-фторфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2-карбоэтоксибутират;
этил-4-(4'-фторфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2-карбоэтоксибутират;
этил-4-(2'-хлорфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2-карбоэтоксибутират;
этил-4-(3'-хлорфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2-карбоэтоксибутират;
этил-4-(4'-хлорфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2-карбоэтоксибутират;
этил-4-(2'-бромфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(3'-бромфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(4'-бромфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2'-метилфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(3'-метилфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(4'-метилфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2'-трифторметилфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(3'-трифторметилфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(4'-трифторметилфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2',4'-дихлорфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2',5'-дихлорфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(3',4'-дихлорфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2', 4'-диметоксифенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2', 5'-диметоксифенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(3', 4'-диметоксифенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(3', 5'-диметоксифенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2'-метокси-4'-хлорфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират;
этил-4-(2'-метокси-4'-бромфенил)-4-оксо-2-формиламидо-2- карбоэтоксибутират.

Пример 2
Перечисленные ниже соединения получают по методике Примера 1, используя диэтилацетамидомалонат вместо диэтилформамидомалоната.

Этил-4-(3'-метоксифенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2- карбоэтоксибутират, полученный с 43%-ым выходом в виде бесцветных пластинок с т.пл. 119-120^oC.

MS (EI; 70 eV): 385 (M⁺⁰, 23), 320 (5), 292 (54), 250 (38), 233 (23), 204 (12), 135 (100).

¹H-NMR (200 MHz; CDCl₃) ppm: 1.12 (6H, t), 1.98 (3H, s), 3.85 (3H, s), 4.28 (4H, q), 7.10-7.60 (4H, m).

C₁₈H₂₃NO₇ Calculated: C 59.16; H 6.35; N 3.84
Found: C 59.16; H 6.42; N 3.76.

Этил-4-(4'-метоксифенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2- карбоэтоксибутират, полученный с 78%-ым выходом в виде бесцветных иголок с т.пл. 120-122^oC.

MS (EI; 70 eV): 365 (M⁺⁰, 12), 320 (2), 292 (54), 261 (8), 250 (30), 204 (9), 135 (100).

¹H-NMR (80 MHz, CDCl₃) ppm: 1.21 (6H, t), 1.95 (3H, s), 3.90 (3H, s), 4.25 (2H, s), 4.28 (4H, q), 6.89 (2H, d), 7.10 (1H, broad s), 7.90 (2H, d).

C₁₈H₂₃NO₇ Calculated: C 59.17; H 6.30; N 3.83
Found: C 59.16; H 6.40; N 3.80.

Этил-4-(2'-фторфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2-карбоэтоксибутират, полученный с 72%-ым выходом в виде бесцветных призматических кристаллов с т.пл. 79-81^oC.

MS (EI, 70 eV): 353 (M⁺⁰, 5), 280 (19), 238 (38), 192 (21), 123 (100).

¹H-NMR (80 MHz; CDCl₃) ppm: 1.20 (6H, t), 1.98 (3H, s), 4.25 (4H, q), 4.30 (2H, s), 7.0-7.7 (3H, m), 7.88 (1H, dd).

C₁₇H₂₀FNO₆ Calculated: C 57.84; H 5.71; N 3.96
Found: C 56.36; H 5.99; N 3.98.

Этил-4-(3'-фторфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2-карбоэтоксибутират, полученный с 48%-ым выходом в виде бесцветных пластин с т.пл. 121-123^oC.

MS (EI; 70 eV): 354 (M⁺⁰, 22), 280 (9), 238 (23), 123 (100).

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃) ppm: 1.20 (6H, t), 1.96 (3H, s), 4.25 (2H, s), 4.28 (4H, q), 7.20 (1H, broad s), 7.28 (1H, m), 7.46 (1H, m), 7.62 (1H, dd), 7.88 (1H, dd).

C₁₇H₂₀FNO₆ Calculated: C 57.84; H 5.71; N 3.96
Found: C 57.88; H 5.86; N 3.82.

Этил-4-(2'-хлорфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2-карбоэтоксибутират, полученный с 37%-ым выходом в виде бесцветных иголок с т.пл. 157-158^oC.

MS (EI; 70 eV) m/z: 369 (M⁺⁰, 1.8), 296 (13), 254 (20), 208 (5.4), 139 (100).

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃) ppm: 1.27 (6H, t), 2.0 (3H, s), 4.25 (2H, s), 4.32 (4H, q), 7.12 (1H, broad s), 7.24-7.57 (4H, m).

C₁₇H₂₀ClNO₆ Calculated: C 55.26; H 5.46; N 3.79; Cl 9.60
Found: C 55.39; H 5.57; N 3.82; Cl 9.40.

Этил-4-(3'-хлорфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2-карбоэтоксибутират, полученный с 58%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл.84-86^oC.

Этил-4-(2'-метилфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2-карбоэтоксибутират, полученный с 55%-ым выходом в виде желтоватых пластинок с т.пл. 146-147^oC.

MS (EI; 70 eV) m/z: 349 (M⁺⁰, 10.7), 304 (2.3), 276 (19), 234 (27), 119 (100).

¹H-NMR (80 MHz, CDCl₃) ppm: 1.25 (6H, t), 2.0 (3H, s), 2.46 (3H, s), 4.22 (2H, s), 4.29 (4H, q), 7.1-7.6 (m, 4H), 7.8 (1H, dd).

C₁₈H₂₃NO₆ Calculated: C 61.94; H 6.64; N 4.01
Found: C 61.80; H 6.72; N 4.03.

Этил-4-(2'-трифторметилфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2- карбоэтоксибутират, полученный с 37%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл. 104-105^oC.

MS (EI; 70 eV) m/z: 403 (M⁺⁰; 3.8), 358 (2.3), 330 (16), 288 (23), 242 (8), 173 (100).

¹H-NMR (80 MHz, CDCl₃) ppm: 1.28 (6H, t), 2.0 (3H, s), 4.22 (2H, s), 4.28 (4H, q), 7.15 (1H, broad s), 7.5-7.9 (4H, m).

C₁₆H₂₀F₃NO₆ Calculated: C 53.59; H 5.00; N 3.47
Found: C 53.72; H 5.19; N 3.38.

Этил-4-(3'-трифторметилфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2- карбоэтоксибутират, полученный с 42%-ым выходом в виде желтоватых иголок с т.пл. 91-92^oC.

¹H-NMR (80 MHz, CDCl₃) ppm: 1.23 (6H, t), 1.98 (3H, s), 4.30 (2H, s), 4.25 (4H, q), 7.12 (1H, broad s), 7.5-8.3 (4H, m).

C₁₈H₂₀F₃NO₆ Calculated: C 53.59; H 5.00; N 3.47
Found: C 53.62; H 5.09; N 3.38.

Этил-4-(4'-трифторметилфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2- карбоэтоксибутират, полученный с 24%-ым выходом в виде желтого масла.

¹H-NMR (80 MHz, CDCl₃) ppm: 1.28 (6H, t), 1.98 (3H, s), 4.40 (2H, s), 4.28 (4H, q), 7.20 (1H, broad s), 8.05 (2H, d), 8.35 (2H, d).

Этил-4-(2'-метокси-5'-фторфенил)-4-oкco-2-aцeтaмидo-2- кapбoэтoкcибутират, полученный с 64%-ым выходом в виде бесцветных игл с т.пл. 123-124^oC.

MS (EI; 70 eV) m/z: 383 (M⁺⁰, 2.5), 310 (12.5), 268 (13), 153 (100).

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃) ppm: 1.24 (6H, t), 1.98 (3H, s), 3.93 (3H, s), 4.34 (2H, s), 4.25 (4H, q), 6.90 (1H, dd), 7.10 (1H, broad s), 7.20 (1H, m), 7.40 (1H, dd).

C₁₈H₂₂FNO₇ Calculated: C 56.45; H 5.79; N 3.65
Found: C 56.60; H 5.84; N 3.66.

Этил-4-(3',4'-дихлорфенил)-4-оксо-2-ацетамидо-2-карбоэтоксибутират, полученный с 42%-ым выходом в виде желтого масла.

¹H-NMR (80 MHz, CDCl₃) ppm: 1.20 (6H, t), 1.98 (3H, s), 4.20 (2H, s), 4.25 (4H, q), 7.10 (1H, broad s), 7.48 (1H, d), 7.75 (1H, dd), 7.88 (1H, d).

Пример 3
Получение (R,S)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляной кислоты • HCl
К 1 г (0,0028 моля) этил-4-(2'-метоксифенил)-4-оксо-2- формиламидо-2-карбоэтоксибутирата добавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 10 мл 37%-ой соляной кислоты и кипятят в течение 8 часов. Раствор выпаривают досуха, остаток обрабатывают три раза водой и раствор повторно подвергают испарению. Остаток, полученный после такой обработки, снова растворяют в воде и водный раствор обрабатывают дихлорметаном. Водную фазу выпаривают досуха, получая 0,67 г желаемого продукта в виде твердого белого вещества с т.пл. 130^oC.

Calculated: C 50.87, H 5.43, N 5.39, Cl 13.65
Found: C 50.74, H 5.68, N 5.43, Cl 13.35.

Следующие соединения могут быть получены по той же методике. (R,S)-2-амино-4-фенил-4-оксомасляная кислота • HCl, т.пл.170^oC.

(R,S)-2-амино-4-(3'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 73%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл. 115^oC.

MS (FAB⁺) m/z: 224 (MH⁺).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.70 (2H, d), 3.86 (3H, s), 4.33 (1H, m), 7.25 (1H, dd), 7.40-7.60 (3H, m), 8.50 (3H, broad s).

C₁₁H₁₃NO₄ • HCl • H₂O Calc.: C 47.56; H 5.81; N 5.04; Cl 12.79
Found: C 47.60; H 5.83; N 5.00; Cl 12.81.

(R,S)-2-амино-4-(4'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 69%-ым выходом в виде бесцветных иголок с т.пл. 160^oC.

MS (FAB^-) m/z: 224 (MH⁺).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.63 (2H, d), 3.84 (3H, s), 4.28 (1H, m), 7.03 (2H, d), 7.92 (2H, d), 8.43 (3H broad s).

C₁₁H₁₃NO₄ • HCl Calculated: C 50.87; H 5.43; N 5.39; Cl 13.65
Found: C 51.87; H 5.53; N 5.22; Cl 13.63.

(R, S)-2-амино-4-(2'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 78%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл. 213-214^oC.

MS (FAB⁺) m/z: 212 (MH⁺).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.65 (2H, m), 4.52 (1H, t), 7.38 (2H, m), 7.73 (1H, m), 7.85 (1H, m), 8.50 (3H, broad s).

C₁₀H₁₁FClNO₃ Calculated: C 48.52; H 4.48; N 5.65; Cl 14.34
Found: C 48.47; H 4.52; N 5.61; Cl 14.40.

(R, S)-2-амино-4-(3'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 75%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл. 194-195^oC.

MS (FAB^-) m/z: 246 (55), 210 [(M-H)^-, 100], 193 (57), (FAB⁺) m/z: 212 (M+H)⁺.

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.77 (2H, m), 4.32 (1H, dd), 7.50-7.70 (2H, m), 7.76 (1H, m), 7.85 (1H, m), 8.59 (3H, broad s), 13.80 (1H, broad s).

C₁₀H₁₁FClNO₃ Calc.: C 48.52; H 4.48; N 5.65; Cl 14.34
Found: C 48.50; H 4.55; N 5.55; Cl 14.09.

(R, S)-2-амино-4-(2'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 83%-ым выходом в виде бесцветных иголок с т.пл. 187-188^oC.

MS (FAB⁺) m/z: 228 (М+H)⁺.

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.68 (2H, dd), 4.30 (1H, t), 7.44-7.60 (3H, m), 7.78 (1H, dd), 8.74 (3H, broad s).

C₁₀H₁₁Cl₂NO₃ Calculated: C 45.49; H 4.20; N 5.30; Cl 26.89
Found: C 45.54; H 4.26; N 5.30; Cl 26.76.

(R, S)-2-амино-4-(3'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 51%-ым выходом в виде бесцветных пластинок с т.пл. 198-200^oC.

MS (FAB⁺) m/z: 455 (84), 228 (M+H⁺, 100).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.67 (2H, d). 4.23 (1H, t), 7.60 (1H, t), 7.72 (1H, dd), 7.91 (2H, m), 8.50 (3H, broad s).

C₁₀H₁₁Cl₂NO₃, Calculated: C 45.49; H 4.20; N 5.30; Cl 26.89
Found: C 45.54; H 4.28; N 5.35; Cl 26.70.

(R, S)-2-амино-4-(4'-хлорфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 79%-ым выходом в виде бесцветных пластинок с т.пл. 204-206^oC.

MS (FAB^-') m/z: 455 (53.8), 228 (M+H^-, 100).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.75 (2H, d), 4.30 (1H, t), 7.65 (2H, d), 7.98 (2H, d), 8.60 (3H, broad s).

C₁₀H₁₁Cl₂NO₃ Calculated: C 45.49; H 4.20; N 5.30; C1 26.89
Found: C 45.64; H 4.24; N 5.23; Cl 26.57.

(R,S)-2-амино-4-(2'-бромфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(3'-бромфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(4'-бромфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(4'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(2'-метилфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 96%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл. 192-193^oC.

MS (FAB^-) m/z: 415 (4), 316 (2), 208 (M+H⁺, 100).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 2.42 (3H, s), 3.63 (2H, d), 2.28 (1H, t), 7.35 (2H,t), 7.52 (1H, d), 7.81 (1H, d), 8.60 (1H, broad s).

C₁₁H₁₄ClNO₃ Calculated: C 54.26; H 5.79; N 5.75; Cl 14.56
Found: C 54.06; H 5.83; N 5.76; Cl 14.83.

(R,S)-2-амино-4-(4'-метилфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R, S)-2-амино-4-(2'-трифторметилфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 86%-ым выходом в виде бесцветных пластинок с т.пл. 170^oC.

MS (FAB⁺) m/z: 523 (6), 262 (M+H⁺, 100),
(FAB^-) m/z: 296 (63), 260 ([M-H]^-, 100), 243 (61).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.58 (1H, dd), 3.72 (1H, dd), 4.52 (1H, t), 7.70-7.90 (4H, m), 8.60 (3H, broad s).

C₁₁H₁₁F₃ClNO₃ Calculated: C 44.37; H 3.72; N 4.70; Cl 11.93
Found: C 44.29; H 3.77; N 4.69; Cl 12.08.

(R, S)-2-амино-4-(3'-трифторметилфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 93%-ым выходом в виде бесцветных пластинок с т.пл. 164-165^oC.

MS (FAB⁺) m/z: 262 (M+H⁺),
(FAB^-) m/z: 296 (42), 260 ([M-H]^-, 100), 243 (65).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.82 (2H, d), 4.37 (1H, t), 7.80 (1H, t), 8.08 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.28 (1H, d), 8.60 (3H, broad s).

C₁₁H₁₁F₃ClNO₃ Calculated: C 44.37; H 3.72; N 4.70; Cl 11.93
Found: C 44.59; H 3.94; N 4.56; Cl 11.86.

(R, S)-2-амино-4-(4'-трифторметилфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 56%-ым выходом в виде бесцветных пластинок с т.пл. 193-195^oC.

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.80 (2H; m), 4.35 (1H, d), 7.95 (2H, d), 8.19 (2H, d), 8.51 (3H, broad s), 13.80 (1H, broad s).

C₁₁H₁₁F₃ClNO₃ Calculated: C 44.37; H 3.72; N 4.70; Cl 11.93
Found: C 43.42; H 3.75; N 4.57; Cl 11.54.

(R,S)-2-амино-4-(2',4'-дихлорфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(2',5'-дихлорфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(2',4'-диметоксифенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(2',5'-диметоксифенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(3',4'-диметоксифенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(3',5'-диметоксифенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R,S)-2-амино-4-(2'-метокси-5'-бромфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl
(R, S)-2-амино-4-(2'-метокси-5'-фторфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 83%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл. 123-124^oC.

MS (FAB^-) m/z: 483 (7), 242 (M+H⁺, 100),
(FAB^-) m/z: 276 (100), 240 ([M-H], 82), 223 (38).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.63 (2H, m), 3.90 (3H, s), 4.62 (2H, dd), 7.26 (1H, dd), 7.35-7.55 (2H, m), 8.50 (3H, broad s), 13.85 (1H, broad s).

C₁₁H₁₃FClNO₄ Calculated: C 47.61; H 4.72; N 5.04; Cl 12.79
Found: C 47.23; H 4.75; N 4.95; Cl 12.62.

(R, S)-2-амино-4-(3', 4'-дихлорфенил)-4-оксомасляная кислота • HCl, полученная с 74%-ым выходом в виде бесцветных призм с т.пл. 212-213^oC.

C₁₀H₁₀Cl₃NO₃ Calculated: C 40.23; H 3.37; N 4.69; Cl 35.68
Found: C 40.14; H 3.45; N 4.53; Cl 34.27.

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.80 (2H, d), 4.28 (1H, t), 7.83 (1H, d), 7.98 (1H, d), 8.20 (1H, s), 8.50 (3H, broad s).

MS (FAB⁺) m/z: 262 (M+H).

Пример 4
Получение 4-(S)-[2-(2'-метоксифенил)-2-оксоэтил] -5-оксо- 3-бензилоксикарбонил-оксазолидина
Смешивают (S)-3-(бензилоксикарбонил)-5-оксо-4- оксазолидина ацетилхлорид (10 г, 34 моля) и сухой толуол (150 мл) при комнатной температуре. Добавляют в сухой атмосфере (2'-метоксифенил)триметилолово (10 г, 37 ммолей) с последующим добавлением бис (трифенилфосфин) палладий (II)-дихлорида (50 мг, 0,07 ммоля). Смесь нагревают при перемешивании в течение 8 часов, охлаждают, обрабатывают органическую фазу насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (3х50 мл), сушат (Na₂SO₄) и растворитель испаряют в вакууме.

Очистка гель-флэш-хроматографией на силикагеле (8х24 см; 50% гексан/этиловый эфир) дает целевое соединение в виде бесцветного масла (4,9 г; 38%)
[α]25D

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.48 (1H, dd), 3.80 (3H, s), 3.91 (1H, dd), 4.58 (1H, t), 5.12 (2H, m), 5.28 (1H, d), 5.48 (1H, d), 7.02-7.60 (9H, m).

MS (EI; 70 eV) m/z: 369 (M⁺⁰, 13); 278 (46), 234 (23), 135 (100), 91 (81).

Аналогичным образом, взяв в качестве исходного (R)-3- (бензилоксикарбонил)-5-оксо-4-окcазолидина ацетил-хлорид, получают соответствующий 4-(R)-[2-(2'-метоксифенил)-2-оксоэтил]-5-оксо-3- бензилоксикарбонилоксазолидин, [α]25D

Пример 5
Получение (S)-2-(N-бензилоксикарбониламино)-4-окоо-4-(2'- метоксифенил) масляной кислоты
Растворяют 4-(S)-[2-(2'-метоксифенил)-2-окcо-этил] -5-оксо- 3-бензилоксикарбонилоксазолидина (4,6 г, 18 ммолей) в 95%-ом этаноле (60 мл), охлаждают до 0^oC и добавляют при перемешивании 1 н. раствор гидроокиси натрия (14 мл). Перемешивают смесь один час при 0^oC и пять часов при комнатной температуре.

Полученную суспензию выливают в 2 н. раствор соляной кислоты (60 мл) при 0^oC, добавляют воду (60 мл) и экстрагируют этилацетатом (3х80 мл), сушат (Na₂SO₄) и растворитель испаряют под вакуумом.

Продукт подвергают очистке с помощью гель-флэш-хроматографии на силикагеле (4х12 см, 2% CH₂Cl₂/этанол) с получением целевого соединения (2,8 г, 63%) в виде бесцветного масла.

= +15,36 (C=1,9, абсолютный этанол).

¹H-NMR (200 MHz; CDCl₃): 3.55 (1H, dd), 3.82 (1H, dd), 3.90 (3H, s), 4.78 (1H, m), 5.10 (2H, s), 5.90 (1H, d), 6.98-7.51 (8H, m), 7.83 (1H, dd).

MS (FAB⁺) m/z: 358 (M+H⁺, 61), 340 (30), 314 (58), 135 (100).

Аналогичным образом, принимая в качестве исходного соединения 4-(R)-[2-(2'-метоксифенил)-2-оксоэтил-5-оксо-3-бензилоксикарбонилоксазолидин, получают соответствующую (R)-2-(N-бензилоксикарбониламино)- 4-оксо-4-(2'-метоксифенил) масляную кислоту.

= -16,56^o (C = 1,1, абсолютный этанол).

Пример 6
Получение (S)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляной кислоты • HCl
Добавляют (S)-2-(N-карбобензилоксиамино)-4-оксо-4- (2'-метоксифенил)масляную кислоту (1,8 г, 5 ммолей), растворенную в ледяной уксусной кислоте (10 мл), к 6 н. соляной кислоте (60 мл) и полученный раствор нагревают при 70^oC в течение 12 часов. Смесь охлаждают и обрабатывают этиловым эфиром (2х20 мл) и водную фазу испаряют под вакуумом c получением бесцветного твердого вещества, которое перекристаллизовывают из смеси этанол/этилацетат с получением целевого соединения (0,8 г, 60%) в виде бесцветных призм с т.пл. 130^oC.

= +36.8^o (HCl 6N, C = 0.34).

MS (FAB^-) m/z: 224 (M+H^-; 100), 178 (11), 151 (38).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.60 (2H, d), 3.90 (3H, s), 4.26 (1H, m), 7.0-7.70 (4H, m), 8.40 (3H, broad s), 13.80 (1H, broad s).

C₁₁H₁₄ClNO₄ Calculated: C 50.87; H 5.43; N 5.39: Cl 13.65
Found: C 50.12; H 5.42; N 5.28; Cl 13.55.

Аналогичным образом, принимая в качестве исходного соединения (R)-2-(N-бензилоксикарбониламино)-4-оксо-4-(2'-метоксифенил) масляную кислоту, получают соответствующую (R)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляную кислоту • HCl с
= -39.86^o (HCl 6H, C = 0.34).

C₁₁H₁₄ClNO₄ Calculated: C 50.87; H 5.43; N 5.39; Cl 13.65
Found: C 49.03; H 5.70; N 5.12; Cl 13.75.

Пример 7
Получение (S)-2-(N-метоксикарбониламино)-4-оксо-4-фенил масляной кислоты
К суспензии водного хлорида алюминия (11,5 г, 87 ммолей) в сухом дихлорметане (70 мл), охлажденном при 0^oC, добавляют нитрометан (5 мл, 87 ммолей) при перемешивании в сухой атмосфере с последующим добавлением сухого бензола (30 мл) и нагревают до комнатной температуры при перемешивании в течение одного часа. К смеси при комнатной температуре с пробулькиванием сухого азота порциями добавляют S-(N-метокcикарбонил)аспаргиновый ангидрид (6 г, 35 ммолей).

Полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов, а затем нагревают до 40^oC в течение 10 часов. Реакционную смесь охлаждают и выливают в смесь 37% соляной кислоты и льда (100 мл/100 г), разбавляют дихлорметаном (100 мл) и органическую фазу промывают 2 н. соляной кислотой (3х50 мл). Растворитель испаряют в вакууме, остаток обрабатывают этиловым эфиром (80 мл), экстрагируют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (30 мл х 3), промывают этиловым эфиром (2х10 мл) и затем обрабатывают 37% соляной кислотой при 0^oС при перемешивании до достижения pH 3 и экстрагируют полученную суспензию этилацетатом (3х30 мл) с последующей сушкой о помощью Na₂SO₄. Растворитель испаряют в вакууме, получая целевое соединение (5,5 г, 63%) в виде бесцветного масла.

= +97.06^o (C = 1.35, chloroform).

MS (FAB⁺) m/z: 252 (M+H⁺; 100), 234 (45), 206 (50).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.66 (1H, dd), 3.68 (3H, s), 3.78 (1H, dd), 4.75 (1H, m), 5.84 (1H, d), 6.10 (1H, broad s), 7.4-7.68 (3H, m), 7.91 (2H, dd).

Аналогичным образом, исходя из (R)-N- метоксикарбониласпаргинового ангидрида, получают (R)-2-(N- метоксикарбониламино)-4-оксо-4-фенилмаcляную кислоту.

= -92,7^o (С = 1,38, хлороформ).

Пример 8
Получение (S)-2-амино-4-оксо-4-фенилмасляной кислоты • HCl
Растворяют (S)-2-(N-метоксикарбониламино)-4-оксо-4- фенилмасляную кислоту (1,5 г, 6 ммолей) в ледяной уксусной кислоте (10 мл) и полученный раствор прибавляют к 6 н. соляной кислоте. Раствор нагревают при 90^oC в течение 48 ч, а затем охлаждают и испаряют в вакууме. Продукт кристаллизуют из смеси абсолютный этанол/этилацетат, получая целевое соединение (0,93 г, 72%) в виде бесцветных призм с т.пл. 190^oС.

= +41.4^oC (C = 0.3; HCl 6N).

MS (FAB⁺) m/z: 194 (M+H⁺, 100).

C₁₀H₁₂ClNO₃ Calculated: C 52.33; H 5.23; N 6.10; Cl 15.47
Found: C 51.10; H 5.29; N 6.18; Cl 15.70.

Аналогичным образом из (R)-2-(N-метоксикарбониламино)-4-оксо-4- фенилмасляной кислоты получают (R)-2-амино-4-окcо-4-фенилмаcляную кислоту • HCl.

= +42.8^oC (C = 0.2: 6N HCl).

C₁₀H₁₂ClNO₃ Calculated: C 52.33; H 5.23; N 6.10; Cl 15.47
Found: C 51.15; H 5.29; N 6.31; Cl 15.70.

Пример 9
ВЭЖХ (R,S)-2-амино-4-оксо-4-фенилмасляной кислоты • HCl и (R,S)-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляной кислоты • HCl на хиральной фазе
Используя колонку CROWNPAK CR(+) (15 см х 4 мм) (Daicel) при температуре 30^oC (=1^oC) и водную HClO₄ (pH 2) в качестве элюента при скорости потока 0,8 мл/мин, были выделены и определены с помощью УФ-детектора (210 нм) вышеупомянутые энантиомеры (S)-2-амино-4-оксо-4-фенилмасляной кислоты • HCl и (R)-2-амино-4-оксо-4-фенилмасляной кислоты • HCl путем инжектирования их водных растворов при концентрации 230 мкг/мл; время удерживания: (R)-изомер - 11,82 мин; (S)-изомер - 20,24 мин.

Аналогичным образом на той же колонке были выделены и определены с помощью УФ-детектора (210 нм) энантиомеры 2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляной кислоты • HCl при температуре 25^oC (=1^oC) с использованием водной HClO₄ (pH 2,5) в качестве элюента при скорости потока 1,0 мл/мин путем инжектирования их водных растворов при концентрации 260 мкг/мл в HClO₄ (pH 2,0); время удерживания:
(R)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота - 15,49 мин;
(S)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота - 22,25 мин.

Пример 10
Получение (R,S)-метил-2-(N-трифторацетамидо)-4- оксо-4-(2'-метокси-5'-хлорфенилбутаноата
К суспензии водного хлорида алюминия (18 г, 135 ммолей) в сухом дихлорметане (250 мл), охлажденном при 0^oC, добавляют нитрометан (10 мл) при перемешивании с последующим добавлением 4-хлоранизола (11 мл, 90 ммолей), нагревают до комнатной температуры и перемешивают в сухой атмосфере азота в течение часа.

Добавляют порциями (R,S)-трифторацетил аспаргиновый ангидрид (20 г, 90 ммолей) при комнатной температуре в атмосфере сухого азота и при перемешивании в течение 2 часов, а затем нагревают реакционную смесь при 40^oC в течение 10 часов.

Смесь охлаждают при комнатной температуре и выливают в смесь из 37%-ой соляной кислоты и льда (200 мл/100 г), разбавляют дихлорметаном (200 мл) и органический слой промывают 2 н. соляной кислотой (3х50 мл).

Растворитель испаряют в вакууме, остаток обрабатывают этиловым эфиром (100 мл), экстрагируют насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3х50 мл), собранные водные слои промывают этиловым эфиром (2х50 мл) и затем обрабатывают 37%-ой соляной кислотой при энергичном перемешивании при 0^oC до достижения водной фазы величины pH 5. Полученную суспензию экстрагируют этилацетатом (4х40 мл) и сушат (Na₂SO₄), растворитель испаряют в вакууме, получая масло желтого цвета (14 г), которое растворяют в ацетоне (150 мл), добавляют при перемешивании при комнатной температуре безводный карбонат калия (28 г), а затем обрабатывают метилиодидом (12 мл, 0,2 мкл).

Реакционную смесь перемешивают в течение 6 часов при комнатной температуре, неорганические соли отфильтровывают и растворитель испаряют в вакууме. Полученное масло обрабатывают этилацетатом (100 мл), промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (2х20 мл), сушат органическую фазу с помощью Na₂SO₄, а затем растворитель испаряют в вакууме с получением очищенного целевого соединения в виде светло-желтого твердого вещества (12,8 г, 88%) с т. пл. 76-77^oC.

MS (EI; 70 eV) m/z: 367 (M⁺, 10), 335 (7), 308 (2), 254 (4), 169 (100).

¹H-NMR (200 MHz; CDCl₃) ppm: 3.56 (1H, dd), 3.85 (1H, dd), 3.76 (3H, s), 3.92 (3H, s), 4.90 (1H, m), 6.93 (1H, d), 7.48 (1H, dd), 7.50 (1H, d).

Пример 11
Получение (R, S)-2-aминo-4-oкco-4-(2'-метокси-5'-хлорфенил)-масляной кислоты
Растворяют (R,S)-метил-2-(N-трифторацетамид)-4-оксо-4-(2'- метокси-5'-хлорфенилбутират) (8 г, 23 ммоля) в 95% этаноле (180 мл), охлаждают полученный раствор при 0^oC, а затем обрабатывают 1 н. раствором гидроокиси натрия (70 мл).

Смесь перемешивают в течение часа при 0^oC и дополнительно при комнатной температуре в течение 3 часов, охлаждают при 0^oC и добавляют 2 н. соляную кислоту до достижения pH 6, чистое целевое соединение осаждают при стоянии и охлаждении при 0^oC, получая бесцветные кристаллы (3 г, 51%) с т.пл. 147-148^oC.

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆ + CF₃COOD) ppm: 3.58 (2H, d), 3.94 (3H, s), 4.35 (1H, t), 7.28 (1H, d), 7.62 (1H, dd), 7.71 (1H, d).

C₁₁H₁₂ClNO₃ Calculated: C 51.31; H 4.70; N 5.44; Cl 13.77
Found: C 49.92; H 4.98; N 4.92; Cl 12.85.

Hydrochloride: m.p. 212-13^oC
¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.60 (2H, d), 3.98 (3H, s), 4.27 (1H, t), 7.25 (1H, d), 7.60-7.80 (m, 2H), 8.40 (3H, broad s).

MS (FAB⁺) m/z: 258 [M⁺ H^-].

Пример 12
Получение (R, S)-2-(трифторацетамидо)-4-oкco-4-(4'- фторфенил)-масляной кислоты
К суспензии безводного хлорида алюминия (23 г) в сухом дихлорметане (400 мл), охлажденной при 0^oC, добавляют нитрометан (20 мл) при перемешивании в атмосфере сухого азота с последующим добавлением 4-фторбензола (13 мл) и затем нагревают до комнатной температуры при перемешивании в течение 1 часа.

Добавляют порциями и при комнатной температуре (R,S)-N-трифторацетиласпаргиновый ангидрид (26,5 г), перемешивают полученный раствор при комнатной температуре в течение 2 часов, а затем нагревают реакционную смесь при 40^oC в течение 20 часов при перемешивании в атмосфере сухого азота.

Далее реакционную массу охлаждают и выливают в смесь из 37%-ой соляной кислоты и льда (200 мл/200 г), разбавляют дихлорметаном (200 мл) и органический слой промывают 2 н. соляной кислотой (2х50 мл).

Растворитель испаряют в вакууме и остаток обрабатывают этиловым эфиром (150 мл), органический слой экстрагируют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (3х50 мл), экстракт собирают и водные слои охлаждают при 0^oC, а затем обрабатывают этот водный раствор при охлаждении (0^oC) и при перемешивании с помощью 37%-ой соляной кислоты до получения осадка целевого соединения при pH 5.

Перекристаллизация из эфирно-гексановой смеси дает очищенное целевое соединение (19 г, 52%) в виде бесцветных призм с т.пл. 153-154^oC.

MS (FAB^-): 306 ([M-H]^-, 79), 193 (100).

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.58 (2H, d), 4.79 (1H, q), 7.35 (m, 2H), 8.03 (2H, m), 9.70 (1H, d).

Пример 13
Получение (R,S)-2-амино-4-оксо-4-(4'-фторфенил)-масляной кислоты
Растворяют 2-N-трифторацетамидо-4-оксо-(4'-фторфенил)-масляную кислоту (4 г, 13 ммолей) в 95% этаноле (100 мл), охлаждают полученный раствор при 0^oC, а затем обрабатывают 1 н. раствором гидроокиси натрия (29 мл).

Смесь перемешивают при 0^oC в течение 1 часа и при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают при 0^oC и добавляют 2 н. соляную кислоту до достижения pH 6, целевое соединение кристаллизуют при стоянии в виде призм кремового цвета (2,2 г, 81%) с т.пл. 200-201^oC.

¹H-NMR (80 MHz, DMSOd₆ + CF₃COOD) ppm: 3.65 (2H, d), 4.36 (1H, t), 7.30 (2H, t), 8.08 (2H, dd).

C₁₀H₁₀FNO₃ Calculated: C 56.92; H 4.78; N 6.64
Found: C 56.27; H 4.86; N 6.52.

Hydrochloride: m.p. 181-82^oC.

¹H-NMR (200 MHz, DMSOd₆) ppm: 3.78 (2H, d), 4.30 (1H, t), 7.40 (2H, t), 8.10 (2H, dd), 8.50 (3H, broad s).

MS (FAB⁺) m/z: 212 (100), 123 (45).

C₁₀H₁₁FClNO₃ Calculated: C 48.50; H 4.48; N 5.65; Cl 14.31
Found: C 48.07; H 4.47; N 5.53; Cl 14.62.

Пример 14
Разделение (R,S)-2-(N-бензилоксикарбонил)-4-оксо- 4-(2'-метоксифенил)-масляной кислоты на ее энантиомеры путем кристаллизации ее стереоизомерной соли эфедрина
Растворяют (R,S)-2-(N-бензилоксикарбониламино)-4-оксо-4- (2'-метоксифенил)-масляную кислоту (0,61 г, 1,7 ммоля) в сухом этиловом эфире (10 мл), нагревают полученный раствор при 30^oC и добавляют раствор, полученный растворением (-)-Эфедрина (0,300 г, 1,8 ммоля) в сухом этиловом эфире (25 мл), нагревают полученную суспензию в течение 5 мин, а затем охлаждают до комнатной температуры.

Осадок соли фильтруют и промывают его дважды сухим этиловым эфиром, получая соль эфедрина в виде бесцветного порошка (0,87 г, 98%),
= -16,25^o (C=0,5, абсолютный этанол).

Полученную соль растворяют в этилацетате (40 мл) при температуре кипения, добавляя изопропиловый спирт (2 мл), а затем охлаждают полученный раствор до комнатной температуры. После стояния при комнатной температуре в течение 72 часов получают 0,192 г (44%) бесцветных кристаллов, имеющих = -30,56^o (C= 0,5, абсолютный этанол), т.пл. 159-161^oC. Маточный раствор испаряют в вакууме с получением бесцветного аморфного твердого вещества (0,66 г), названного "твердым B".

Указанные выше кристаллы растворяют в теплом этилацетате (14 мл) и добавляют абсолютный этанол (5,5 мл), нагревают суспензию до кипения, выдерживают в течение 5 минут до полного растворения, а затем охлаждают до комнатной температуры.

После стояния при комнатной температуре в течение 16 часов получают 0,113 г бесцветных кристаллов с = -32,00^o (C=0,65, абсолютный этанол), т.пл. 163-165^oC.

Кристаллы (0,100 г) растворяют в теплом этаноле (2 мл), а затем охлаждают полученный раствор при комнатной температуре.

После стояния при комнатной температуре в течение 16 часов получают 0,085 г (20%) бесцветных игл с = -39,9^o (C=0,1, абсолютный этанол), т.пл. 166-167^oC.

¹H-NMR (80 MHz; DMSOd₆) ppm: 0.8 (3H, d), 2.5 (3H, s), 3.0-3.4 (3H, m), 3.85 (3H, s), 4.25 (1H, q), 5.0 (2H, s), 5.05 (1H, d), 6.9-7.6 (14H, m).

C₂₉H₃₄O₇ Calculated: C 66.70; H 6.56; N 5.36
Found: C 66.52; H 6.64; N 5.28.

Растворяют описанную выше соль (0,070 г, 0,13 ммоля) в 2 н. соляной кислоте (12 мл), экстрагируют этилацетатом (4х10 мл), промывают собранные органические слои 0,5 н. раствором соляной кислоты (2х3 мл) и сушат с помощью Na₂SO₄. Растворитель выпаривают в вакууме досуха, получая (S)-(+)-2-(N-карбобензилоксиамино)-4-(2'-метоксифенил)-4- оксомасляную кислоту (40 мг) в виде бесцветного масла с = +17,82^o (C=0,4, абсолютный этанол).

¹H-NMR (80 MHz: CDCl₃) ppm: 3.65 (2H, d), 3.90 (3H, s), 4.45 (1H, m), 5.20 (2H, s), 6.0 (1H, d), 7.0 (2H, m), 7.35 (5H, s), 7.50 (1H, m), 7.85 (1H, dd), 9.50 (1H, broad s).

Растворяют описанное выше твердое вещество "В" (0,600 г, 1,1 ммоля) в 2 н. соляной кислоте (20 мл), экстрагируют этилацетатом (4х10 мл), промывают собранные органические слои 0,5 н. раствором соляной кислоты (2х5 мл) и сушат с помощью Na₂SO₄. Растворитель выпаривают в вакууме досуха, получая обогащенную (R)-(-)-2- (N-карбобензилоксиамино)-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляную кислоту (0,350 г, 0,98 ммоля).

Растворяют вышеописанную кислоту в теплом этилацетате (25 мл), добавляют при перемешивании (+)-Эфедрин (165 мг, 1 ммоль), нагревают при 60^oC в течение 10 мин, а затем охлаждают до комнатной температуры.

После стояния при комнатной температуре в течение 16 часов получают 0,274 г бесцветных игл c = +33,6 (C=0,5, абсолютный этанол), т.пл. 165-166^oC.

Описанные кристаллы растворяют в абсолютном этаноле (3 мл) при температуре кипения, а затем охлаждают при +5^oC; при стоянии получают бесцветные иглы (0.103 г) с = +37,2^o (C=0,1, абсолютный этанол) и т.пл. 165-166^oC.

Пример 15
Капсулы, каждая из которых весит 0,230 г и содержит 50 мг активного вещества, готовят следующим образом.

Состав на 500 капсул:
(R,S)-2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляная кислота - 25 г
Лактоза - 80 г
Кукурузный крахмал - 5 г
Стеарат магния - 5 г
Полученная композиция может быть закапсулирована в двойную твердую желатиновую капсулу, состоящую из двух частей, каждая из которых представляет собой капсулу весом 0,230 г.

Пример 16
Внутримышечная инъекция с концентрацией 50 мг/мл
Фармацевтическую композицию для инъекций готовят растворением 50 мг (R, S)-2-aминo-4-(2'-мeтoкcифeнил)-4-oкcoмacлянoй кислоты • HCl в стерильном пропиленгликоле (1000 мл) и последующим запаиванием в ампулы объемом 1-5 мл.

Описываются новые производные 2-амино-4-фенил-4-оксомасляной кислоты общей формулы IА, где каждая из групп Х и Y независимо представляет собой водород, галоген, трифторметил, гидрокси, С₁-C₆-алкил, бензил, фенил, нафтил, -OR', -SR', SOR или SO₂R, где R' представляет собой С₁-C₆-алкил или бензил; R представляет собой гидрокси, амино, гидроксиламино, OR', -NHR', -NR'₂ или -NHOR', где R' имеет значения, определенные выше, при условии, что R не является гидрокси, когда: 1) Х и Y одновременно представляют собой водород или 2) Х и Y находятся в положении 3 и 4 фенильного кольца и одновременно представляют собой гидрокси или -ОR'-группу, где R' - метил; или 3) одна из групп Х и Y представляет собой водород, а другая находится в положении 4 фенильного кольца и представляет собой гидрокси, хлор, фтор, метил, н-пропил или метокси; либо в виде индивидуальных изомеров, или их смесей, или их фармацевтически приемлемых солей. Производные 2-амино-4-фенил-4-оксомасляной кислоты действуют как ингибиторы кинурениназы и/или кинуренин-3-гидроксилазы и применимы для предупреждения и/или лечения заболеваний, связанных с нейроперерождением тканей. Описывается также фармацевтическая композиция на основе соединений формулы I. 2 с. и 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Производные 2-амино-4-фенил-4-оксомасляной кислоты общей формулы IA

где каждая из групп Х и Y независимо представляет собой водород, галоген, трифторметил, гидрокси, С₁-С₆-алкил, бензил, фенил, нафтил, -OR', -SR', SOR или SO₂R, где R' представляет собой С₁-С₆-алкил или бензил;
R представляет собой гидрокси, амино, гидроксиламино, OR', -NHR', -NR'₂ или -NHOR', где R' имеет значения, определенные выше, при условии, что R не является гидрокси, когда: 1) X и Y одновременно представляют собой водород или 2) X и Y находятся в положении 3 и 4 фенильного кольца и одновременно представляют собой гидрокси или -OR'-группу, где R' - метил; или 3) одна из групп Х и У представляет собой водород, а другая находится в положении 4 фенильного кольца и представляет собой гидрокси, хлор, фтор, метил, н-пропил или метокси; либо в виде индивидуальных изомеров или их смесей, или их фармацевтически приемлемых солей. 2. Соединение формулы IA по п.1, где R представляет собой гидрокси и где а) одна из групп X и Y представляет собой водород, а другая представляет собой C₁-C₆-алкил или трифторметил в положении 2, 3 или 4 фенильного кольца, при условии, что когда C₁-C₆-алкил находится в положении 4 фенильного кольца, он не является ни метилом, ни н-пропилом; или б) одна из групп X и Y представляет собой водород, а другая представляет собой атом галогена в положении 2, 3 или 4 фенильного кольца, при условии, что когда галоген находится в положении 4 фенильного кольца, он не является ни хлором, ни фтором; или в) одна из групп Х и Y представляет собой водород, а другая представляет собой -OR', где R' представляет собой C₁-C₆-алкил, в положении 2, 3 или 4 фенильного кольца, при условии, что когда -OR' находится в положении 4 фенильного кольца, C₁-C₆-алкил не является метилом; или с) одна из групп X и Y представляет собой -OR', где R' представляет собой C₁-C₆-алкил, а другая представляет собой галоген, либо в виде индивидуального изомера или смесей изомеров, или его фармацевтически приемлемых солей. 3. Соединение по п.1 в виде индивидуального изомера или смесей изомеров, выбираемое из группы, включающей 2-амино-4-(2'-метоксифенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(3'-метоксифенил)-4-оксомаcляную кислоту; 2-амино-4-(2'-фторфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(3'-фторфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(3'-хлорфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(2'-хлорфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(3', 4'-дихлорфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(2'-метилфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(2'-трифторметилфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(3'-трифторметилфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(4'-трифторметилфенил)-4-окcомасляную кислоту; 2-амино-4-(2'-метокси-5'-фторфенил)-4-оксомасляную кислоту; 2-амино-4-(2'-метокси-5'-хлорфенил)-4-оксомасляную кислоту и 2-амино-4-(2'-метокси-5'-бромфенил)-4-оксомасляную кислоту, и его фармацевтически приемлемые соли. 4. Фармацевтическая композиция, проявляющая активность в области ингибирования кинурениназы и/или кинуренин-3-гидроксилазы, включающая носитель и/или фармацевтически приемлемый разбавитель, отличающаяся тем, что она в качестве активного ингредиента содержит производное 2-амино-4-фенил-4-оксомасляной кислоты общей формулы IA по п.1 в виде индивидуального изомера, или в виде смеси изомеров, или в виде его фармацевтически приемлемой соли в эффективном количестве.