ИММУНОМОДУЛЯТОР С АНТИМИКОБАКТЕРИАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ "ИЗОФОН", СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 1999 года по МПК A61K31/505 C07D239/54 C07D213/44 

Настоящее изобретение относится к области медицины, точнее касается нового лекарственного средства - изофона, иммунокорректора с антимикобактериальной активностью, формулы 1:

способу его получения и применению.

Отечественный антилепрозный препарат диуцифон /1/ обладает иммуномодулирующими свойствами /2/ и оказывает иммуностимулирующее действие на гуморальный и клеточный иммунитет /3- 5/. Однако, он не обладает собственной митогенной активностью, а способен увеличивать пролиферацию Т-клеток только в ответ на ФГА. Токсичность диуцифона 2600 мг/кг.

Целью изобретения является получение нового иммуномодулятора с антимикобактериальной активностью, включая и ВИЧ- носительство, активного не только в отношении микобактерий лепры, но и туберкулеза, а также других заболеваний, протекающих на фоне иммунодефицита.

Полученный нами ранее N-/6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4- тетра-гидро-5-пиримидинсульфон/-N'-изоникотиноилгидразид /6/, хотя и оказывал антимикобактериальное действие, но иммунотропной активностью не обладал, более того, он не выдерживает длительных сроков хранения из-за содержащихся в нем примесей.

Поэтому необходимо было найти новый способ получения этого вещества, фармакологически чистые образцы которого лишены указанных выше недостатков.

Поставленная цель достигается соединением формулы 1 "изофоном".

Изофон получают кипячением эквимолекулярных количеств гидразида изоникотиновой кислоты и 6-метилурацил-5-сульфохлорида в безводном ацетонитриле. Образцы изофона сохраняют свои свойства в течение 3-х лет.

Клинические испытания, проведенные по решению фармкомитета (протокол N10 от 27.06.96 г) в 5-ти медицинских учреждениях России, показали, что изофон нормализует иммунный статус больных лепрой, туберкулезом, хроническим неспецифическим воспалением легких и хламидиозом, включая организм в борьбу с заболеванием, а также проникая внутрь клетки, стимулирует ее функцию и доносит действующее начало до возбудителя, уничтожает его. Не исключена возможность прямого воздействия препарата на возбудителей, передающихся половым путем, хламидии, трихомонады, уреаплазменная инфекция.

Необходимо подчеркнуть хорошую переносимость изофона, отсутствие побочного действия и совместимость с современными антимикобактериальными средствами /этионамид, рифамицин и другие/, что подтверждается при обследовании у больных лепрой и туберкулезом.

Токсичность изофона была определена на белых беспородных мышах весом 18-20 г в остром опыте по методу Литчфильда - Уилкоксона и составила более 7000 мг/кг.

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. N - 6- /Метил-2,4-диоксо-1,2,3,4 -тетрагидро- 5H-пиримидин-4-сульфон/ -N'- изоникотиноилгидразид /Ia/, гидрат.

Смесь 2,74 г /0,02 моль/ гидразида изоникотиновой кислоты и 4,49 г /0,02 моль/ 6-метилурацил-5-сульфохлорида в 50 мл абсолютного ацетонитрила перемешивают 10 часов при температуре 81^oC. Фильтруют, осадок на фильтре промывают ацетонитрилом, спиртом, сушат на воздухе. Получают 7,27 г желтоватого мелкого порошка. Полученный продукт растворяют в минимальном количестве горячей воды, фильтруют и к фильтрату добавляют NH₄OH до pH 7. Выпавший белый осадок отделяют, хорошо промывают на фильтре водой и спиртом и кристаллизуют из ДМФА с водой.

Получают 4,94 г /76%/ белых легких кристаллов с т.п. 255-6^oC.

Найдено,%: C 38,3, H 4,0, S 9,2, N 20,2,
C₁₁H₁₁N₅O₅S•H₂O
Вычислено,%: C 38,5, H 3,8, S 9,4, N 20,4.

ПМР - спектр в ДМСО: /3H, урацил/, 2,36 м.д./ 4H, пиридин/, 7,7 м.д. 8,65 м.д., /2H NH урацил/ 8,98 м.д. 10,9 м.д. /2H NH цепи/ 11,42 м.д. 11,53 м.д./2H, H₂O/ 3,18 м.д.

Пример 2. Определение иммунотропной активности изофона. Иммунотропная активность изофона была определена на модели иммунодефицита, вызванного облучением.

Для создания иммунодефицитного состояния мышей F₁(CBA_xC₅₇BZ/6) облучали гамма-лучами на радиотерапевтическом аппарате ЛУЧ-1 в дозе 4 гр при мощности дозы 0,55 Гр/мл. Количество антителообразующих клеток в селезенках определяли по методу Ерне-Нордин.

Изофон и диуцифон вводили перорально в широком диапазоне доз. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, изофон во всех дозах эффективнее диуцифона в 1,5-2,5 раза.

Вывод: изофон обладает как собственной высокой митогенной активностью, так и способен усиливать пролиферацию Т-клеток на ФГА.

Оптимальная концентрация для изофона 1-0,03 мкг/мл.

Диуцифон обладает способностью увеличивать пролиферацию Т- клеток только в ответ ФГА, но не обладает собственной митогенной активностью, оптимальная концентрация для диуцифона 0,1 и 0,03 мкг/мл.

Таким образом, диапазон действия изофона на Т-лимфоциты шире, чем у диуцифона.

Пример 3. Результаты клинического применения изофона в клинике больных лепрой /отчет прилагается/.

Изофон был изучен в клинике на больных лепрой в сравнении с диуцифоном. Суточная доза препаратов 0,6 г.

Уже через 3-4 недели больные, получавшие изофон, отмечали улучшение общего состояния, снижение воспалительных инфильтратов на коже, размягчение лепром и узлов, изменение их цвета из ржаво-коричневого в бледно-розовый.

Через 3 месяца исчезал возбудитель лепры в соскобе со слизистой носа и бактериоскопический индекс резко снижался.

Черев 5-6 месяцев возбудитель лепры при бактериоскопическом и гистологическом исследовании не обнаруживался. Больные, получившие диуцифон, прошли те же этапы клинического выздоровления, но более медленно. Так, у этой группы больных только через 10-12 месяцев возбудитель лепры при бактериоскопическом и гистологическом исследовании не обнаруживался. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Результаты иммунологического обследования больных лепрой, получавших изофон и диуцифон, показали, что оба препарата нормализуют иммунный статус больного: увеличивается общее количество Т-лимфоцитов, количество Т-хелперов, нормализуется иммунорегуляторный индекс/, отношение Т_х/Т_с, который был снижен.

Необходимо отметить, что нормализация иммунологических параметров протекает более плавно при применении изофона, видимо за счет его воздействия на иные механизмы иммунитета, чем диуцифона.

Таким образом, изофон показал выраженный клинический антимикобактериальный и иммунотропный эффект, превосходящий диуцифон.

Применение изофона позволило сократить сроки стационарного лечения больных лепрой в 2 раза.

Пример 4. Результаты клинического применения изофона в клинике больных туберкулезом /предварительный отчет прилагается/.

Изофон был применен у больных с инфильтративным и диссеминированным туберкулезом. Доза 0,6г в сутки.

Больные, поступившие с симптомами интоксикации, в процессе лечения отметили улучшение самочувствия, нормализацию температуры, уменьшение кашля и количества отделяемой мокроты, улучшение аппетита.

При иммунологическом обследовании наблюдалось увеличение количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов, уменьшение повышенного количества Т-супрессоров (см. таблицу 3).

При контрольном рентгенографическом исследовании легких отмечена положительная динамика в виде уменьшения перифокальной иперикавитарной инфильтрации. Результаты представлены в таблице 3.

Таким образом, при применении у больных туберкулезом изофон проявил себя как эффективный иммуномодулятор с выраженной антимикобактериальной активностью.

Учитывая малую низкую токсичность изофона в настоящее время рассматривается вопрос о замене тубазида, как основного противолепрозного средства, имеющего токсичность 150 мг/кг, на новый изофон.

Пример 5. Результаты химического применения изофона в клинике больных хламидиозом.

Изофон был применен у больных с хламидийной инфекцией в суточной дозе 0,4 г у больных с впервые выявленным хламидиозом, изофон был назначен в виде монотерапии. И у 9 из 11 больных этой группы отмечено улучшение состояния в виде отсутствия местных проявлений воспаления и отрицательных тестов на выявление возбудителя. И у всех 11 пациентов определено улучшение и нормализация гематологических иммунологических и биохимических параметров.

Больные с рецидивирующим хламидиозом получали изофон вместе с антибиотиками. Контрольная группа больных получала антибиотики без изофона.

Клинический эффект был достигнут в обеих этих группах, но у пациентов, получавших изофон, выздоровление наступило быстрее: уже на 7-8 день больные отмечали улучшение самочувствия, уменьшение воспаления, а на 15-17 день лечения возбудитель не обнаруживался.

В группе без изофона такой эффект достигался не менее чем через месяц лечения.

Таким образом, высокий клинический эффект изофона достигается за счет двоякого действия, иммуностимулирующего и антихламидийного.

В настоящее время завершается изучение прямого воздействия изофона на хламидии, трихомонады и уреаплазменные инфекции.

Учитывая широкий спектр иммунотропной активности изофона, а также его антимикобактериальную активность и чрезвычайно низкую токсичность можно рекомендовать данный препарат для применения в широкой медицинской практике: в терапии различных заболеваний, протекающих на фоне иммунодефицита, включая и ВИЧ-инфекцию, а также и при микобактериозах (туберкулез, проказа и др.).

Литература
1. Н.М.Голощапов, А.А.Ющенко, Ж.Г.Умеров, В.А.Евстратова, Т.С.Гненюк, Б. Е. Иванов, В. С. Резник, Н.Г.Пашкуров, С.С.Либерман, С.А.Шарова А.С. СССР N 606242.

2. Н. М.Голощапов, Л.Е.Костюк, В.П.Лесков, Л.А.Харламова, А.Н.Чередеев, В.А.Насонова, А.М.Поверенный, А.С.Саенко А.С. СССР N 938442.

3. В.П.Лесков, Бюллетень экспериментальной биологии, 1985, XXVII, N 12, с. 738.

4. В.С.Прозоровский, Диссертация д.м.н. 1991 г.

5. Л.Е.Костюк, Диссертация к.б.н., Москва 1986 г.

6. Н.М.Голощапов, Т.П.Филипских, В.Д.Смирнов, Г.Р.Унчур, М.А.Икрина А.С. СССР N 768186.

Изобретение относится к области медицины и касается нового лекарственного средства - иммуномодулятора с антимикобактериальной активностью "Изофон", способа его получения и применения. Сущность изобретения заключается во взаимодействии эквимолекулярных количеств 6 метилурацил-5-сульфохлорида и гидразида изоникотиновой кислоты в абсолютном ацетонитриле при 81°С, фильтрации, растворении осадка в горячей воде, фильтрации, осаждении осадка после добавления к фильтрату NH₄OH до рН 7 и кристаллизации из ДМФА. Полученное вещество представляет собой N(6-метил-2,4,диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-N'-изоникотиноилгидразид гидрат, который при применении внутрь и парентерально обладает антимикробактериальной активностью. Технический результат заключается в создании нового иммуномодулятора с антимикобактериальной активностью, применяемого также при вторичных иммунодефицитах и микобактериозах. 3 с.п. ф-лы, 3 табл.

1. Иммуномодулятор с антимикобактериальной активностью, представляющий собой N-(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-N'-изоникотиноилгидразид гидрат формулы

2. Способ получения иммуномодулятора по п. 1, отличающийся тем, что взаимодействие эквимолекулярных количеств 6-метилурацил-5-сульфохлорида и изониазида проводят в ацетонитриле при температуре 81^oC, растворяют в воде, к фильтрату добавляют NH₄OH, осадок отделяют и кристаллизуют из ДМФА с водой. 3. Иммуномодулятор с антимикобактериальной активностью по п.1 для применения внутрь и парентерально при вторичных иммунодефицитах и микобактериозах.