СРЕДСТВО ДЛЯ НОРМАЛИЗАЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКОГО АППАРАТА КЛЕТОЧНЫХ СИСТЕМ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2000 года по МПК A61K35/78 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к препаратам и лекарственным средствам для лечения поражений генетического аппарата клеток и клеточных систем организма в результате онкологических, иммунных и иных заболеваний, воздействия негативных факторов внешней среды, а также к способам лечения заболеваний данного типа.

Известно использование для лечения онкологических и им подобных заболеваний большого числа фармацевтических препаратов, таких как эмбихин, циклофосфан, дегранол, дипин, имифос, фотрин; цитостатиков, антибиотиков, антиметаболитов, алкалоидов, гормонов и т.д. (Машковский М.Д. Лекарственные средства.- М.: Медицина, 1985, т. 1-2.- 585 с.).

Недостатками большинства препаратов являются высокая токсичность, многочисленные негативные побочные эффекты, относительно невысокая эффективность.

Более безопасным является применение цитокинов, например интерферонов (Малиновская В.В., Мурзабаева Р.Т., Манахова Л.С. и др. Функционирование системы интерферона при различных способах и дозах введения альфа-2-интерферона//Вопросы вирусологии. - 1989. - Т. 34. - N 2. - С. 180 - 183).

Однако эти препараты весьма дорогостоящи, имеют ограничения по применению, а также не нормализуют генетические нарушения организма.

Наиболее перспективной группой лекарственных средств в связи с их относительной дешевизной и безвредностью являются препараты из лекарственных растений.

В зависимости от заболевания используют настои березового дубняка, березовый щелок, морковный сок, настои чистотела, тысячелистника (Морозова О. Домашний лечебник. - Марафон, 1991, с. 82), сок чеснока, подорожника (Ахмедов P. В растениях - целебная сила. - Патриот, 1992, с. 16). При относительной безопасности средств растительного происхождения их эффективность, как правило, относительно невысока.

Наиболее близким к заявляемой группе изобретений является использование сока чеснока, применяемого в возрастающем градиенте от 10 капель (первые 5 дней) до столовой ложки с добавками сока подорожника и меда (Морозова O. Домашний лечебник. - Марафон, 1991, с. 82).

Предлагаемый способ лечения оказался эффективным, в частности при лечении рака желудка. Однако средство недостаточно исследовано и имеет ограниченное применение.

Вышеперечисленные средства, как правило, обладают цитоксическим действием, разрушая раковые клетки. Однако их применение наносит определенные повреждения и здоровой ткани, которые затем усиливаются деструктивным воздействием образующихся при разрушении раковых клеток продуктов их распада. Анализ возможных путей решения проблемы позволил сделать вывод, что более перспективным для нормализации клеточных систем представляется использование веществ, в присутствии которых прекращается или резко замедляется деление клеток с поврежденным геномом. В результате в ходе естественных процессов обновления клеток организма происходит их постепенное вытеснение или блокирование, исключающее их развитие. Разработка такого препарата и способа его применения является задачей, стоящей перед авторами изобретения.

В результате исследований было установлено, что задача решается применением в качестве данного средства полисахаридной фракции, выделенной из каллусной ткани растений рода Унгерния.

Выделенная фракция содержала в качестве активного начала полисахарид общей формулы (C₆H₁₂O₆)_3-20 и связанный, по-видимому, в составе комплекса калий в количестве 0,1-20,0% от веса полисахарида.

Полисахаридную фракцию заявляемого состава получают из каллусной ткани луковиц таких растений рода Унгерния, как Унгерния Виктора, Унгерния Северцева или Унгерния трехшаровая, произрастающих в районе Гилларской долины и являющихся эндемиками третичного периода. В настоящее время из корней и листьев растений получают алкалоиды, в частности галантамин, ликарин, тацеттин (ЖОХ 1956, XXVII, N 12 с. 3357).

Полисахаридную фракцию получали путем водно-спиртовой экстракции измельченного растительного материала с последующим ее выделением традиционными методами, включающими, в частности, освобождение от фенольных соединений, органических кислот и алкалоидов. Содержание активного начала в конечном препарате составляет около 0,02 мас. % (остальное в основном 30-50%-ный раствор этанола в воде, выполняющий одновременно функцию консерванта).

Полученный продукт, получивший наименование МК представлял собой прозрачную светло-желтую жидкость с pH 6,8-7,2, характерным запахом и содержанием полисахаридсодержащего сухого остатка не менее 0,2 мг/мл, обычно 0,2-0,5% в зависимости от исходного сырья и технологии концентрирования. Содержание алкалоидов составляло не более 0,002 мг/мл.

Аналогичный продукт, получивший наименование "Влаирин", был получен экстракцией клеток каллусной ткани при поверхностном культивировании каллусной ткани Унгернии на примере растительных клеток Унгернии Виктора. В продукте не содержится алкалоидов. Концентрация сухого остатка доводится до 0,2 мг/мл.

Биологически свойства обоих препаратов в основном идентичны, хотя имеются некоторое различие в активности по отношению к ряду патологий.

Препараты были исследованы на токсичность в отношении белых мышей и крыс-самцов. При определении острой токсичности смертельную дозу получить не удалось. Mаксимально введенная доза составила 15 г/кг, что составило 700% от максимально используемой. Интоксикация не отмечалась. Кроме того, установлено, что препарат не накапливается в организме, не оказывает негативного влияния на состояние ЦНС, кровь и функции печени, почек, состояние внутренних органов.

В основе заявляемого изобретения лежит установленное авторами свойство полисахаридов данного типа создавать отрицательный потенциал в клетках с поврежденным геномом, который исключал бы возможность их последующей бласттрансформации. Указанное свойство может быть проиллюстрировано на примере воздействия препарата МК на способность эритроцитарных мембран связывать липофильный синтетический анион ФКБ в соответствии с методикой (Логинов В.А. Биофизика, 1991, т. 36, в. 4, с. 614-620). При обработке мембран различными дозами препарата МК количество связанного ФКБ - в нмоль/мг белка мембран уменьшается с величины 2,97 до 2,1±0,15 при концентрации 2•10^-1 мг/мл, до 2,5±0,15 при дозе 2•10^-2 мг/мл, 2,42±0,15 при дозе 2•10^-4 мг/мл и 2,64±0,6 при дозе 2•10^-5 мг/мл.

То есть воздействие полисахарида обнаруживается в дозах ≈10^-8%. Практически роль препарата при блокировке бласттрансформации была продемонстрирована в модельной системе лимфоцитов крови человека, культивируемых in vitro.

Клетки культивировали по стандартной методике. Стимуляцию бласттрансформации лимфоцитов проводили посредством фитогемагглютинина. Обработку клеток препаратом "Влаирин" в концентрации 1•10^-6 мг/мл проводили через 4 ч после начала культивирования. Было выяснено, что в случае культивирования лимфоцитов больных с тяжелыми повреждениями мутагенеза 1-й степени, вызванными такими заболеваниями, как синдром Тернера, осложненный лучевой болезнью 2-й степени, бласттрансформации клеток, обработанных препаратом, не происходит.

Указанная способность препарата на уровне организма позволяет осуществить глубокое оздоровление организма посредством нивелирования клеток, не компетентных к адекватным межклеточным взаимодействиям и правильной передаче информации.

Наиболее перспективным направлением использования препарата являлось лечение онкологических заболеваний.

Предлагаемый способ лечения онкологических заболеваний характеризовался тем, что больному вводили вышеописанную полисахаридную фракцию экстракта каллусной ткани Унгернии в суточной дозе 10^-6-10^-3 г активного начала на 10 кг веса в течениe 20-30 дней в возрастающем градиенте дозы от 3 капель в день на 10 кг веса до физиологически принимаемой организмом.

Практика показала, что лечение необходимо проводить курсами по 20-30 дней с интервалом 10-14 дней между ними.

Предложенная схема лечения может подвергаться незначительным изменениям исходя из активности препарата и характера заболевания.

Сущность изобретения иллюстрируется примерами.

Пример 1. Антимутагенное действие препарата МК.

Культуру клеток китайского хомячка У-73 облучали дозой 150 рад. Мутагенные эффекты оценивали по числу индуцированных микроядер. Через 2 мин после облучения в культуру на 1 ч вводили препарат МК в виде раствора, содержащего 0,02% активного начала до его концентрации 10^-3-10^-6 г/мл раствора.

Число микроядер в культуре без облучения - 5,8±0,3; без введения препарата - 15,6±0,6, при введении препарата в дозе (мг/мл): 10^-3-7,2±1,0; 10^-4-7,4±1,0; 10^-5-10,1±0,6; 10^-6-12,1±0,6.

Пример 2. Лечебное воздействие препаратов МК на последствия радиоактивного облучения.

Беспородные мыши получали дозу облучения 750 рад. После облучения животным вводили препараты МК из различных видов Унгернии из расчета 10^-4 г/кг веса. Смертность в контроле - 75% (n=50), при использовании препарата МК из У. Виктора - 44% (n=50), из У.Северцева - 50% (n=10), из У.трехшаровой - 60% (n=10).

Пример 3. Онкологическое действие препарата.

Воздействие исследовалось на 70 мышах-самках Г1СВА(С57В1)6 весом 18-20 г. Животным прививали диплоидный вариант асцитной опухоли Эрлиха внутрибрюшинно по 10⁶ клеток в 0,2 мл асцита. Спиртовой раствор препарата (15% спирта) вводили перорально по 10 мкл на один прием в течение 15 дней после инокуляции опухоли ежедневно начиная с даты прививки опухоли. В качестве контроля использовали 15%-ный раствор спирта. Так как продолжительность жизни мышей с асцитной формой опухоли в среднем 14-16 дней, то забор животных осуществляли на 5 и 10-й день после прививки.

Оценка эффективности препарата осуществлялась исходя из количества опухолевых клеток в 1 мл асцита (ОКА) и количества опухолевых клеток на 1 г веса животного (СКВ). Количество опухолевых клеток в 1 мл асцита определяли с помощью камеры Горяева по общепринятой методике. Одновременно оценивалось состояние иммунокомпетентных органов - тимуса и селезенки по изменению его относительного веса на 5 и 10-й день после инокуляции опухоли. Полученные результаты приведены в таблице.

Полученные результаты свидетельствуют об эффективности препарата, т.к. для используемых химер они достигаются при концентрациях, составляющих 20-50% от ЛД₅₀, а для растительных препаратов этот показатель не превышает 40%.

Известно, что опухолевый процесс вызывает повышение на 5-й день относительного веса селезенки на 85%, что соответствует данным контроля. Компенсация этого явления при введении препарата свидетельствует о защитном действии препарата на селезенку (при отсутствии воздействия на тимус).

Пример 4. Больной М., 42 лет, в 1993 г. поступил в клинику с жалобами на острую боль в области живота, рвоту.

В ходе операции выявлена злокачественная неоперабельная опухоль, охватывающая желчный пузырь с метастазами в печень и желудок. Больному были прописаны обезболивающие препараты.

Через две недели после операции больной в течение двух недель принимал препарат "Влаирин" в повышающемся градиенте от 8 до 30 капель за прием 3 раза в день, а затем продолжал курс лечения в максимальной дозе 80 капель в течение трех месяцев. Через месяц больной отказался от обезболивающих, через 2 месяца восстановилось пищеварение, т. е. перешел от протертой пищи к цельной, к концу курса больной вышел на работу. Далее 1 раз в год он проходит повторные курсы лечения по этой методике из расчета 0,5 л препарата на курс.

В 1995 году больной проходил УЗИ, показавшее отсутствие отклонений в области печени и желудка, а также наличие оконтуренной опухоли на желчном пузыре, уменьшившейся на 10-15%.

Изобретение относится к медицине, а именно к препаратам и лекарственным средствам для лечения поражений генетического аппарата клеток и клеточных систем организма в результате онкологических, иммунных и иных заболеваний и негативных внешних воздействий, а также к способам лечения заболеваний данного типа. Сущность изобретения: в качестве средства для нормализации генетического аппарата применяют фракцию полисахаридов из каллусной ткани растений вида Унгерния общей формулы (C₆H₁₂O₆)_3-20, содержащую 0,1-20,0% калия от веса полисахарида. Лечение онкологических заболеваний осуществляют тем, что больному вводят указанную полисахаридную фракцию перорально в суточной дозе 10^-6 - 10^-3 г активного начала на 10 кг веса в течение 20-30 дней в возрастающем градиенте дозы от 3 капель в день на 10 кг веса до физиологически принимаемой организмом. Использование нового средства показало его высокую эффективность и безопасность, возможность сочетания с другими лекарственными препаратами. 2 с. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Средство для нормализации генетического аппарата клеточных систем на основе растворов активных компонентов растительного сырья, отличающееся тем, что в качестве активного компонента оно содержит фракцию полисахаридов из каллусной ткани растений вида Унгерния общей формулы (С₆Н₁₂О₆)_3-20, содержащую 0,1 - 20,0% калия от веса полисахарида. 2. Способ лечения онкологических заболеваний с помощью препаратов растительного происхождения, отличающийся тем, что больному вводят перорально полисахаридную фракцию экстракта каллусной ткани Унгернии в суточной дозе 10^-6 - 10^-3 г активного начала на 10 кг веса в течение 20 - 30 дней в возрастающем градиенте дозы от 3 капель в день на 10 кг веса до физиологически принимаемой организмом. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что лечение проводят курсами по 20 - 30 дней с интервалом 10 - 14 дней между ними.