СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ, ОБЛАДАЮЩЕЙ РАДИОЗАЩИТНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2000 года по МПК A61K35/78 A61P39/06 

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения средства, обладающего радиозащитной активностью.

Для выделения флавоноидов из лекарственного сырья используют органические растворители (спирты этиловый и метиловый различной концентрации, эфир, бензол, гексан, хлороформ), а также воду очищенную. [В.Т. Георгиевский, М. Н. Комиссаренко, С. Е. Дмитрук. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, 1990 г].

Препарат "Фламин", содержащий сумму флавоноидов, получают из цветков бессмертника экстракцией 50%-ным этанолом методом противотока. Извлечение упаривают в вакуум-аппарате до 1/4 первоначального объема. Образующийся осадок растворяют в воде. Флавоноиды из водного раствора экстрагируют смесью этилацетата и этанола (9:1). Извлечение обезвоживают высушенным сульфатом натрия и упаривают под вакуумом до полного удаления растворителя. [Технология лекарственных форм под ред. Л.А. Ивановой, -М.: Медицина, 1991., т.2, с.439] .

Для приготовления настоя из травы зверобоя измельченное сырье заливают очищенной водой комнатной температуры в соотношении 1:10 и взятой с учетом коэффициента водопоглощения. Затем настаивают на кипящей водяной бане в течение 15 мин, охлаждают 45 мин, процеживают, отжимая сырье, и прибавляют воду до требуемого объема извлечения. [Государственная фармакопея СССР XI, вып.2, с. 147]. В настое, получаемом фармакопейным методом, содержание флавоноидов составляет 0,2%. Это примерно половина (56,58%) их количества, содержащегося в сырье. [Фармация, 1994., N 1, с. 30-34].

Настойку из травы зверобоя получают в заводских условиях методом перколяции, и в качестве экстрагента используют 40%-ный этанол.

Качество настойки зверобоя заводского производства регламентируется по содержанию дубильных веществ, по литературным данным сумма флавоноидов составляет от 0,12 до 0,18%. [Фармация, 1984., N 5, с. 38-40].

Наиболее близким к предлагаемому методу является способ получения флавоноидов из маклюры оранжевой (Maclura aurantica), обладающих радиозащитным действием, который и принят за прототип. Высушенные и измельченные плоды маклюры оранжевой экстрагируют диэтиловым эфиром при соотношении сырья и экстрагента (1: 20) - (1: 25) в течение 3-4 суток, затем густой эфирный экстракт смешивают с оксидом алюминия и элюируют смесью петролейный эфир - хлороформ с последующей отгонкой под вакуумом.

В литературе приводятся различные методы хроматографической очистки извлечений, содержащих флавоноиды: бумажная, колоночная, высокоэффективная хроматографии. [Выделение и анализ природных биологически активных веществ под ред. Е.Е. Сироткиной. Томск, 1987. Современные методы исследования лекарственных растений ВНИИ фармации, 1983. , т.20, с. 103-109]. Наиболее подходящим методом очистки для нашего способа мы посчитали колоночную хроматографию с полиамидным сорбентом.

Известно, что флавоноиды из растений рода зверобоя обладают противовоспалительным, капилляроукрепляющим, диуретическим, антидепрессивным, антимикробным, кардиотоническим, желчегонным и антигрибковым действием. [Химия природных соединений, 1987. - N2, с. 185-203. H. Wagner. Sandartisierung, Phagmorogie und rlinische studie. Notab. med. -1996. 26 N2- с.73- 74]. Сведений о радиозащитной активности зверобоя продырявленного в литературе не обнаружено.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение специфической активности.

Реализация поставленной задачи решается тем, что готовится отвар из травы зверобоя в соотношении 1: 6,6. Воздушно-сухое сырье травы зверобоя, измельченное до размеров частиц 2-3 мм, заливали очищенной водой комнатной температуры, взятой с учетом коэффициента водопоглощения (1,6) и настаивали на кипящей водяной бане. Полученное извлечение отфильтровывали через ватный фильтр. В целях максимальной очистки от сопутствующих веществ извлечение помещали на колонку с полиамидным сорбентом (ТУ 6-09-10-822-73). Диаметр колонки 5 см, количество сорбента 6 г с размером частиц 0,1-0,25 мм. После прохождения через колонку всей жидкости сорбент обрабатывали 150 мл очищенной воды в три приема. Полноту очистки извлечения контролировали визуально в видимом и УФ-свете, а также качественной реакцией с 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида (III). Для элюирования полифенолов использовали 70%-ный этанол в количестве 50 мл, время прохождения через колонку 7-8 мин, скорость прохождения 70-80 капель в 1 мин. Количество элюирующей смеси, необходимой для полной десорбции флавоноидов, устанавливали экспериментально. Этанол из собранного элюата отгоняли при температуре выше 70^oC, экстракт высушивали до постоянной массы.

Пример 1. 100 г воздушно-сухого и измельченного сырья зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) заливали 660 мл очищенной воды комнатной температуры и настаивали на кипящей водяной бане в течение 2 ч, затем охлаждали при комнатной температуре 10 мин и процеживали через ватный фильтр. 500 мл полученного отвара помещали на хроматографическую колонку с полиамидным сорбентом. Колонку промывали 450 мл очищенной воды и флавоноиды элюировали 50 мл 70%-ного этанола. Элюат собирали, этанол из него отгоняли и полученное извлечение высушивали при 100-105^oC до постоянной массы. Выход суммы флавоноидов составил 0,9 г (0,9%).

Пример 2. 100 г воздушно-сухого и измельченного сырья зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) заливали 410 мл очищенной воды комнатной температуры и настаивали на кипящей водяной бане в течение 2 ч, затем охлаждали при комнатной температуре 10 мин, процеживали через ватный фильтр. 250 мл полученного отвара помещали на хроматографическую колонку с полиамидным сорбентом. Колонку промывали 450 мл очищенной воды и флавоноиды элюировали 50 мл 70%-ного этанола. Элюат собирали, этанол из него отгоняли и полученное извлечение высушивали при 100-105^oC до постоянной массы. Выход суммы флавоноидов составил 0,4 г (0,4%).

Выбор оптимальных параметров экстракции суммы флавоноидов из травы зверобоя продырявленного показан в табл. 1.

Как видно из табл. 1, оптимальным временем экстракции является двухчасовое настаивание сырья на кипящей водяной бане, при соотношении травы зверобоя и воды очищенной 1: 6,6.

Радиозащитную активность суммы флавоноидов (см. табл. 2) определяли на лабораторных животных - беспородных крысах. Крысы были облучены дозой 7 Грей. Их вскармливали препаратом в дозе 4 мг/кг веса. Через 30 дней определили смертность крыс, и она составила 45% при контроле 100% гибели облученных крыс, которые не получали препарата. Гибель крыс, вскармливаемых эпигаллокатехином (препаратом из листьев чая), составила 73%. Использование предлагаемого способа получения суммы флавоноидов из травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L. ) обеспечивает увеличение специфической активности в 1,6 раза по сравнению c эпигаллокатехином (препарат сравнения).

Изобретение относится к медицине. В качестве лекарственного растительного сырья используют траву зверобоя продырявленного. Экстракцию проводят очищенной водой при соотношении сырья и экстрагента 1:6,6 при нагревании на водяной бане в течение 2 ч, после чего отвар очищают на хромотографической колонне с полиамидным сорбентом. Сумму флавоноидов элюируют 70%-ным этанолом. Затем его отгоняют и остаток высушивают при 100 - 105^oC до постоянной массы. Изобретение позволяет повысить специфическую активность. 2 табл.

Способ получения суммы флавоноидов, обладающей радиозащитным действием, путем экстракции растительного сырья, хроматографической очистки извлечения, отгонки и сушки, отличающийся тем, что в качестве лекарственного растительного сырья используют траву зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L. ) и экстракцию проводят очищенной водой при соотношении сырья и экстрагента 1 : 6,6 при нагревании на водяной бане в течение 2 ч, после чего отвар очищают от сопутствующих веществ на хроматографической колонке с полиамидным сорбентом, а сумму флавоноидов элюируют 70%-ным этанолом, который отгоняют, и остаток высушивают при температуре 100 - 105^oС до постоянной массы.