ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ РОСТА БИФИДО- И ЛАКТОБАКТЕРИЙ Российский патент 2000 года по МПК C12N1/20 A23C9/12 A23C9/127 A61K35/74 

Предлагаемый состав относится к медицине, в частности к микробиологии и биотехнологии, и может быть использован при производстве лечебно-профилактических и лекарственных препаратов.

Известны составы питательных сред, которые используют для выращивания бифидо- и лактобактерий, например среда Блаурокка [1].

При этом одни из них недостаточно являются эффективными, технология других дорогостояща.

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к предлагаемому составу является известный состав питательной среды для роста бифидо- и лактобактерий, который авторами выбран в качестве прототипа.

Известный состав представляет собой гидролизат молока, в который введены в качестве добавок пептон, хлорид натрия, агар-агар, лактоза, цистеин солянокислый, при следующем соотношении компонентов, г/л:
Пептон - 2,0
Хлорид натрия - 5,00
Агар-агар - 0,75
Лактоза - 10,00
Цистеин солянокислый - 0,10
Гидролизат молока - Остальное [2]
Данный состав находит применение в практике для роста бифидо- и лактобактерий.

Однако наряду с дорогой основой - белковым препаратом - гидролизатом молока, он содержит и дорогие добавки, такие как пептон, цистеин солянокислый. Кроме того, данный состав является недостаточно эффективной питательной средой для выращивания бифидо- и лактобактерий, а технология его получения достаточно дорога.

Задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала питательных сред для роста бифидо- и лактобактерий, при ее высокой эффективности для выращивания данных бактерий и простоте технологии получения.

Поставленная задача решается питательной средой для роста бифидо- и лактобактерий, содержащей белковый гидролизат и агар-агар, которая дополнительно содержит аскорбиновую кислоту, а в качестве белкового гидролизата - белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови, при следующим соотношении компонентов, г/л:
Аскорбиновая кислота - 0,01 - 0,10
Агар-агар - 0,70 - 0,80
Белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови - Остальное
Анализ научно-технической и патентной документации показал, что предлагаемый состав является "новым" и соответствует критерию "изобретательский уровень".

Отличительными признаками является то, что в качестве белкового гидролизата предлагаемый состав содержит белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови, а в качестве добавок - агар-агар и аскорбиновую кислоту при следующем соотношении компонентов, г/л:
Аскорбиновая кислота - 0,01 - 0,10
Агар-агар - 0,70 - 0,80
Белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови - Остальное
Использование в качестве основы питательной среды для роста бифидо- и лактобактерий белкового гидролизата крови или белкового гидролизата заменителя крови, а в качестве добавок агар-агар и аскорбиновую кислоту позволяет выращивать данные бактерии с большой эффективностью, при том, что технология получения предлагаемой среды проста.

Это достигается тем, что белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови является содержателем основной массы аминокислот, необходимых для жизнедеятельности микробных клеток (за счет чего повышается эффект выращивания бактерий и дешевизна, простота способа), агар-агар является веществом, где содержатся отсутствующие в белковом гидролизате крови или белковом гидролизате заменителя крови аминокислоты, а аскорбиновая кислота, вводимая в качестве добавки в основу, позволяет стимулировать рост жизнеспособных микробных клеток бифидобактерий или лактобактерий в данной питательной среде.

Введение в основу агар-агара в количестве 0,70 - 0,80 г/л, а аскорбиновой кислоты в количестве 0,01 - 0,10 г/л обусловлено тем, что данное содержание добавок позволяет достигать хороших результатов. Введение их менее 0,7 г/л и 0,01 г/л, соответственно, снижает эффективность роста бактерий, а введение более 0,8 и 0,1 г/л, соответственно, не приводит к дальнейшему повышению эффективности выращивания бактерий.

Предлагаемый состав готовят следующим образом: полученный белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови разводят дистиллированной водой в соотношении 1:2, после чего в него вводят агар-агар в количестве 0,7 - 0,8 г/л и аскорбиновую кислоту в количестве 0,01 - 0,10 г/л. Полученный состав предварительно прогревают текучим паром 30 минут, а затем стерилизуют при давлении 0,5 атм в течение 30 минут.

Использование предлагаемого состава осуществляют следующим образом: в предлагаемую питательную среду на основе белкового гидролизата крови или белкового гидролизата заменителя крови, содержащего 0,7 - 0,8 г/л агар-агара и 0,1 г/л аскорбиновой кислоты, вносят предлагаемую питательную среду с бифидо- или лактобактериями и выдерживают в термостате при 37^oC в течение 24 часов. После чего делают разведение выращенных бактерий до 10^-10, которые затем термостатируют при t = 37^oC в течение 3-х суток.

Для оценки роста бактерий по окончанию термостатирования осуществляют количественный контроль и морфологический контроль в мазках, окрашенных по Грамму.

Примеры конкретного использования предлагаемого состава
Пример 1
В стерильные пробирки с 10,0 мл гидролизата, представляющего собой белковый гидролизина крови и содержащий 0,7 г/л агар-агара и 0,01 г/л аскорбиновой кислоты, внесли 0,5 мл полученного состава бифидобактерий B.longum 379 M или B.bifidum 791 и выдержали в термостате при 37^oC в течение 24 часов. Затем выращенные бактерии развели в данной питательной среде до 10^-10, которые термостатировали при температуре 37^oC в течение 3-х суток. Для оценки роста бифидобактерий был осуществлен количественный контроль в 1,0 мл раствора и морфологический контроль в мазках, окрашенных по Грамму. Полученные данные приведены в таблице 1.

Пример 2 осуществляли как пример 1, только добавка агар-агара составляла 0,8 г/л, аскорбиновой кислоты составляла 0,1 г/л. Полученные данные приведены в таблице 1.

Пример 3 осуществляли как пример 1, при этом используя в качестве основы белковый гидролизат заменителя крови, а именно полиамин. Полученные данные приведены в таблице 1.

Пример 4 осуществляли как пример 3, только добавка агар-агара составляла 0,8 г/л, аскорбиновой кислоты составляла 0,1 г/л. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Пример 5 осуществляли как пример 1, при этом в предлагаемую питательную среду вносили лактобактерии acidophylus 912. Полученные данные приведены в таблице 2.

Пример 6 осуществляли как пример 5, при этом добавка агар-агара составляла 0,8 г/л, а аскорбиновой кислоты составляла 0,1 г/л.

Пример 7 осуществляли как пример 5, используя при этом в качестве основы питательной среды белковый гидролизат заменителя крови, а именно полиамин. Полученные данные приведены в таблице 2.

Пример 8 осуществляли как пример 7, используя при этом добавку агар-агара 0,8 г/л и аскорбиновой кислоты 0,1 г/л.

Полученные данные приведены в таблице 2.

Как видно из полученных данных, предлагаемый состав питательной среды обладает высокой эффективностью для роста бифидо- и лактобактерий, при простой технологии получения предлагаемого состава, что расширяет арсенал питательных сред для роста бифидо- и лактобактерий.

Источники информации:
1. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями, диагностика и лечение дисбактериоза кишечника (Методические рекомендации). -М.: МЗ СССР, 1986, -23 с.

2. Инструкция по приготовлению кисломолочного бифидумбактерина на молочных кухнях.- М.: МЗ РСФСР, 1987, -11 с.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологии и медицине, и может быть использовано при производстве лечебно-профилактических и лекарственных препаратов. Среда содержит белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови, в качестве добавки аскорбиновую кислоту и агар-агар при следующем соотношении, г/л: аскорбиновая кислота 0,01 - 0,10, агар-агар 0,70 - 0,80, белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови - остальное. Среда расширяет арсенал питательных сред для роста бифидо- и лактобактерий, повышает эффективность выращивания при простой технологии его получения. 2 табл.

Питательная среда для роста бифидо- и лактобактерий, содержащая белковый гидролизат и агар-агар, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит аскорбиновую кислоту, а в качестве белкового гидролизата - белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя кровли при следующем соотношении компонентов, г/л:
Аскорбиновая кислота - 0,01 - 0,10
Агар-агар - 0,70 - 0,80
Белковый гидролизат крови или белковый гидролизат заменителя крови - Остальное