СПОСОБ ОЦЕНКИ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОНДЕНСАТА ВЛАГИ ВЫДЫХАЕМОГО ВОЗДУХА У БОЛЬНЫХ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЕГКИХ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/52 G01N33/483 

Изобретение относится к области медицины, а именно касается внутренних болезней, и может быть использовано для диагностики завершенности воспалительного процесса, оценки полноты ремиссии у больных неспецифическими заболеваниями легких (НЗЛ).

Известен метод оценки интенсивности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме человека на основе анализа эндогенных углеводородов в выдыхаемом воздухе (О.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко "Ранняя диагностика и профилактика неспецифических заболеваний легких. - Л. - 1987. - С. 67-71). Однако в связи с техническими сложностями данный метод не нашел широкого применения в клинических условиях. Кроме того, он обладает низкой информативностью, поскольку при наличии в организме эффективных механизмов регуляции ПОЛ концентрация конечных продуктов окисления в средах может длительное время оставаться низкой и начинает возрастать только после истощения этих защитных сил.

Технический результат - повышение точности оценки антиокислительной активности конденсата влаги выдыхаемого воздуха, упрощение способа исследования состояния свободнорадикальных процессов в органах дыхания, контроль за эффективностью проводимого лечения у больных неспецифическими заболеваниями легких.

Способ оценки антиокислительной активности (АОА) конденсата влаги выдыхаемого воздуха (КВВВ) у больных НЗЛ осуществляется следующим образом. Забор конденсата у больных НЗЛ производят в утренние часы после тщательного полоскания полости рта теплой водой. Система для получения КВВВ состоит из конденсатора - U-образной трубки высотой 200 мм и диаметром 20 мм, помещенной в термос, заполненный водой со льдом, насадки с изгибом для исключения попадания слюны в систему и вмонтированного на выходе конденсатора волюметра, позволяющего регистрировать объем выдыхаемого воздуха (Г.И. Сидоренко, Э.И. Зборовский, О.И. Левина "Терапевтический архив". - 1980. - N 3. - С. 65-68). Количество получаемого у больного конденсата стандартизируют объемом воздуха, выдыхаемого им в процессе исследования. Этот объем воздуха составляет 100 л. Прибором "Хемилюминомер - 003" с компьютерным обеспечением регистрируют железоиндуцированную хемилюминесценцию (ЖИХЛ) модельной системы цитрат-фосфат-люминол, генерирующую активные формы кислорода (АФК). Модельная система имеет следующий состав: фосфатный буфер (KH₂PO₄ - 20 мМ, KCl - 105 мМ, pH - 7,45), Na лимоннокислый - 45 мМ, люминол - 10^-5. В камеру прибора, где поддерживается температура 37^oC, помещают 19 мл реакционной среды. При постоянном перемешивании в течение 10 с записывают спонтанное свечение, после чего вносят инициатор ХЛ -1 мл 50 мМ раствора сернокислого железа. Конечная концентрация FeSO₄ в среде инкубации составляет 2,5 мМ. В момент введения инициатора возникает быстрая вспышка, далее следует латентный период, переходящий в медленное свечение. За интенсивность светосуммы ХЛ (S) модельной системы принимают площадь под кривой записи излучения в течение 5 мин измерения.

Полученные результаты принимают за контрольные значения и выражают в относительных единицах (отн. ед.) по отношению к эталону свечения, суммарный световой поток которого составляет 5,1·10⁵ квант/с. Добавление в реакционную среду 0,5 мл дистиллированной воды не влияет на показатели ее ХЛ. Введение в указанную модельную систему 0,5 мл КВВВ больных НЗЛ приводит к изменению параметров кинетики ее ХЛ: продолжительности латентного периода и величины светосуммы ХЛ.

У здоровых лиц соотношение продолжительности латентного периода (t) ХЛ модельной системы в присутствии 0,5 мл конденсата к ее продолжительности в контрольной системе (t₀) составляет t/t₀ = 1,16±0,03. При этом добавление КВВВ доноров в модельную систему снижает интенсивность светосуммы более чем на 10%. Таким образом, если АОА контрольной модельной системы по этому показателю принять за 100%, то в присутствии KBBB доноров она составит · 100% = 110,5 ± 0,81%. У больных НЗЛ эти показатели снижаются. При значениях t/t₀ менее 1,05 и Δ S% менее 105% у больных НЗЛ устанавливается снижение АОА KBBB вследствие нарушения механизмов регуляции свободнорадикальных процессов, характерное для неблагоприятного и хронического течения заболевания. Нормализация этих показателей в процессе лечения является признаком завершенности воспалительного процесса.

Существенным отличием предлагаемого изобретения является изучение АОА KBBB на модельных системах. Изменение продолжительности латентного периода - t ХЛ модельной системы в присутствии KBBB связано с антирадикальной активностью конденсата, изменение S ХЛ - обусловлено способностью конденсата взаимодействовать с АФК, образовавшимися в данной системе.

Пример 1. Больной М. 59 лет. Диагноз: Острая левосторонняя нижнедолевая крупозная пневмония, кровохарканье. Забор KBBB у больного осуществляли с помощью системы, состоящей из U-образного конденсатора помещенного в термос, заполненный водой со льдом, насадки с изгибом для исключения попадания слюны в систему и вмонтированного на выходе конденсатора волюметра. Объем воздуха, который больной выдохнул в процессе исследования, составил 100 л. Готовили модельную систему, состоящую из фосфатного буфера (KH₂PO₄ - 20 мМ, KCl - 105 мМ, pH - 7,45), Na лимоннокислого - 45 мМ, люминола - 10^-5.

Вначале в течение 5 мин регистрировали ЖИХЛ контрольной модельной системы. Далее для исследования АОА KBBB 0,5 мл конденсата больного добавили к реакционной среде и также осуществили запись ЖИХЛ в опытной модельной системе. В контрольной модельной системе продолжительность латентного периода ХЛ t₀ составила - 1,45 мин, a S₀ ХЛ - 63,88 отн.ед. В опытной модельной системе в присутствии конденсата больного продолжительность латентного периода ХЛ t - составила 1,4 мин, а S ХЛ - 66,63 отн.ед. Показатели АОА KBBB у данного больного при госпитализации составили t/t₀ = 1,4/1,45 = 0,96;
Проведено лечение, включавшее внутримышечные инъекции ампициллина 1,0·4 раза в сутки, гентамицина 0,08·3 раза в сутки, экстракта алоэ 1 мл внутримышечно, масляного раствора камфоры 2 мл подкожно, внутривенное вливание изотонического раствора с 2,4% раствором эуфиллина 10 мл и преднизолона 90 мг, физиотерапевтические процедуры. При выписке больной жалоб не предъявляет, клинически и рентгенологически инфильтрация легочной ткани разрешилась. Показатели ХЛ контрольной модельной системы составили t₀ - 1,6 мин, S₀ - 63,79 отн. ед. , а опытной системы - соответственно t-1,8 мин, S - 54,52 отн. ед. Показатели АОА КВВВ данного больного при выписке составили: t/t₀ - 1,12; ΔS% - 112,77%. У данного больного острой пневмонией с благоприятным течением и исходом воспалительного процесса наблюдалась нормализация показателей АОА КВВВ.

Пример 2. Больной 3. 65 лет. Диагноз: Хронический катаральный обструктивный бронхит, обострение. Эмфизема легких. Пневмосклероз. Дыхательная недостаточность 11 степени. Забор КВВВ у больного осуществляли с помощью системы, состоящей из U-образного конденсатора, помещенного в термос, заполненный водой со льдом, насадки с изгибом для исключения попадания слюны в систему и вмонтированного на выходе конденсатора волюметра. Объем воздуха, который больной выдохнул в процессе исследования, составил 100 л. Готовили модельную систему, состоящую из фосфатного буфера (KH₂PO₄ -20 мМ, KCl - 105 мМ, pH - 7,45), Na лимоннокислого - 45 мМ, люминола - 10^-5. Вначале в течение 5 мин регистрировали ЖИХЛ контрольной модельной системы. Далее, для исследования АОА КВВВ 0,5 мл конденсата больного добавили к реакционной среде и также осуществили запись ЖИХЛ в опытной модельной системе. В контрольной модельной системе продолжительность латентного периода ХЛ t₀ составила - 2,15 мин, а S₀ ХЛ - 55,79 отн.ед. В опытной модельной системе в присутствии конденсата больного продолжительность латентного периода ХЛ t - составила 1,45 мин, a S ХЛ - 64,26 отн.ед. Показатели АОА КВВВ у данного больного при госпитализации составили t/t₀ = 1,45/2,15= 0,67; Проводилось лечение: внутримышечное введение ампициллина 1,0·4 раза в сутки, гентамицина 0,08 · 3 раза в сутки, 10% раствора сульфокамфокаина 2 мл, внутривенные вливания изотонического раствора с раствором эуфиллина 2,4% - 10 мл и преднизолоном 90 мг, эуфиллином по 1 таблетке 3 раза в день, кордипином по 1 таблетке 3 раза в день, мукалтином по 1 таблетке 3 раза в день. При выписке у больного сохранялись кашель с мокротой и одышка. Показатели ХЛ контрольной модельной системы составили t₀ - 2,0 мин, S₀ - 53,09 отн.ед., а опытной системы соответственно t - 1,9 мин, S - 55,25 отн.ед. Показатели АОА КВВВ данного больного при выписке составили: t/t₀ - 0,95; Δ S% - 95,94%. У больного с хронической формой НЗЛ, несмотря на проведенное лечение, показатели АОА КВВВ остались на низком уровне, что свидетельствовало о сохраняющемся у него нарушении процессов свободнорадикального окисления.

Таким образом, у больных НЗЛ состояние АОА КВВВ коррелирует с особенностями течения воспалительного процесса и динамикой заболевания в результате проводимых лечебных мероприятий. Угнетение показателей АОА КВВВ является характерным для неблагоприятного течения заболевания, тогда как их нормализация является прогностически благоприятным признаком. С применением предложенного метода обследовано 100 больных с различными формами НЗЛ. Применение предложенного метода у больных НЗЛ позволяет оценить тяжесть воспалительного процесса, полноту ремиссии, прогнозировать его исход, дифференцированно подойти к лечению больных. Предложенный метод обследования может быть использован в стационарах и поликлиниках.

Изобретение относится к медицине, в частности, касается внутренних болезней. Способ позволяет повысить точность оценки антиокислительной активности конденсата влаги выдыхаемого воздуха. Регистрируют железоиндуцированную хемилюминесценцию контрольной модельной системы, содержащей фосфатный буфер (КН2 PO4 - 20 мМ, KCl - 105 мМ, рН 7,45), Na лимоннокислый - 45 мМ и люминол - 10^-5 и опытной модельной системы после добавления в нее 0,5 мл конденсата больного, определяют соотношение продолжительности латентного периода и светосуммы свечения опытной модельной системы к аналогичным показателям контрольной модельной системы и при их значениях соответственно менее 1,05 и меньше 105% при норме 1,16+0,03 и 110,5+0,81% оценивают антиокислительную активность конденсата как низкую, характерную для неблагоприятного и хронического течения заболевания, а повышение этих показателей в процессе лечения оценивают как признак завершенности воспалительного процесса. 2

Способ оценки антиокислительной активности конденсата влаги выдыхаемого воздуха у больных неспецифическими заболеваниями легких, отличающийся тем, что регистрируют железоиндуцированную хемилюминесценцию контрольной модельной системы, содержащей фосфатный буфер (КН2 Р04 - 20 мМ, КС1 - 105 мМ, рН 7,45), Na лимонно-кислый - 45мМ и люминол - 10^-5 и опытной модельной системы после добавления в нее 0,5 мл конденсата больного, определяют соотношение продолжительности латентного периода и светосуммы свечения опытной модельной системы к аналогичным показателям контрольной модельной системы и при их значениях соответственно менее 1,05 и меньше 105% при норме 1,16 ± 0,03 и 110,5 ± 0,81% оценивают антиокислительную активность конденсата как низкую, характерную для неблагоприятного и хронического течения заболевания, а повышение этих показателей в процессе лечения оценивают как признак завершенности воспалительного процесса.