СУХАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ РЕОВИРУСНОГО ТЕНОСИНОВИТА КУР Российский патент 2001 года по МПК A61K39/12 C12N7/00 C12N7/00 C12R1/93 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, а именно к вакцине против реовирусного теносиновита кур.

В настоящее время меры борьбы с реовирусным теносиновитом кур в основном направлены на предотвращение реовирусной инфекции у суточных цыплят. Это осуществляется путем иммунизации племенного стада с передачей пассивного иммунитета потомству [1] . Однако наиболее эффективным способом является вакцинация самих цыплят живыми вакцинами.

Известна вакцина TAD REO BACI [2] против реовирусного теносиновита цыплят, полученная на основе штамма S 1133 и предназначенная для подкожного или внутримышечного введения. Вакцина содержит 80% вирусной суспензии и 20% защитной среды (стабилизатор), защитная среда представляет собой 5%-ный раствор lactose-phosphate. Вакцина эффективна в дозе не менее чем 10⁴ ТЦД₅₀.

Основным недостатком этой вакцины является ее остаточная реактогенность и то, что необходимый уровень иммуногенности достигается лишь при ее индивидуальном введении.

В качестве прототипа выбрана вакцина V.A. CHICK VAC [3] против реовирусного теносиновита кур (производство фирмы SOLVAY DUPHAR) из штамма TSV 1133. Вакцина получена лиофилизацией вируссодержащей культуральной жидкости и предназначена для подкожного или внутримышечного введения.

Вакцина содержит на 1000 доз вирус теносиновита - 10^6,2 ЭИД₅₀ и защитную среду, которая включает, мг:
Пептон - 225
Сахароза - 150
Глутамат натрия - 15
Основными недостатками вакцины-прототипа являются те же недостатки, что и у приведенного выше аналога: остаточная реактогенность и то, что необходимый уровень иммуногенности достигается лишь при ее индивидуальном введении.

В основу изобретения поставлена комплексная задача создания универсальной иммуногенной вакцины против реовирусного теносиновита кур для подкожной и пероральной иммунизации, не обладающей остаточной реактогенностью и хорошо (быстро и без расслоений) растворимой в воде.

Поставленная задача решается тем, что в сухой вакцине против реовирусного теносиновита кур, содержащей вирусную суспензию и пептонную защитную среду, согласно изобретению в качестве вирусной суспензии используют вирусную суспензию штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТДЦ₅₀ при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Вирусная суспензия штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТДЦ₅₀ - 45-70
Пептонная защитная среда - Остальное
Наилучший результат достигается в случае, если пептонная защитная среда содержит пептон, желатин, сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пептон - 15-35
Желатин - 3-10
Сахароза - Остальное
Заявляемые свойства вакцины определяются в первую очередь наличием в ее составе вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀, а также соотношением ее ингредиентов. Штамм депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов под номером "ВНИВИП-ДЕП".

Количественное соотношение вирусной суспензии и пептонной защитной среды определяется максимумом биологической активности вакцины. При большем содержании пептонной защитной среды снижается активность вакцины и вырабатывается недостаточный для защиты от заболевания иммунитет. Увеличение количества вирусной суспензии свыше заявляемого значения приводит к ее необоснованному перерасходу и возникновению поствакцинальных осложнений у привитой птицы (остаточной реактогенности), а также к сокращению срока хранения вакцины.

Количественное соотношение ингредиентов пептонной защитной среды диктуется ее функциональными особенностями и технологическими свойствами компонентов. Повышение содержания желатина свыше заявляемого влечет за собой расслоение компонентов вакцины при ее растворении перед применением. Повышение количества сахарозы и пептона свыше заявляемого предела приводит к снижению растворимости вакцины. Снижение количества каждого из вышеуказанных компонентов ниже заявляемых пределов также приводит к снижению срока годности вакцины.

Заявляемую вакцину получают с соблюдением мер асептики смешением суспензии клеток куриных эмбрионов, инфицированной аттенуированным штаммом ВНИВИП-ДЕП реовируса теносиновита и пептонной защитной среды. Указанную защитную среду получают смешением растворов ее ингредиентов. Полученную смесь лиофильно высушивают.

В качестве примера получения вакцины можно привести следующий. К вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ объемом 50 см³ добавляют такое же количество защитной среды. Последнюю получают смешением 1% раствора желатина с 4% раствором пептона и 10% раствором сахарозы. Общую полученную смесь перемешивают на магнитной мешалке в течение 5-10 мин, причем температура смеси не должна превышать 2-6 град.C, расфасовывают во флаконы, замораживают и лиофильно высушивают.

Влияние соотношения компонентов на биологическую активность вакцины представлено в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, максимальная биологическая активность вакцины (6,0 и более lg ТЦД₅₀) достигается при содержании в вакцине вирусной суспензии от 45 до 70%.

Влияние активности вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП на иммуногенность вакцины представлено в таблице 2.

Данные таблицы 2 показывают, что активность вируса ниже 6,0 lg ТЦД₅₀ не создает напряженного поствакцинального иммунитета и вызывает увеличение расхода компонентов вакцины в 5-10 раз.

Пример 1. Для подкожного введения берут вакцину, например, следующего состава: 50% вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ и 50% защитной среды, содержащей 6,6% желатина, 26,7% пептона и 66,7% сахарозы. Вакцину разводят стерильным физиологическим раствором из расчета 1 доза вакцины в 0,2 см³ и вводят в нижнюю треть шеи. Цыплят различной породы вакцинируют двукратно в 7-10- и 35-40-суточном возрасте.

Вакцина быстро и без расслоения растворяется. Она вызывает формирование активного поствакцинального иммунитета против реовирусного теносиновита кур через 21 сут после вакцинации продолжительностью 2-3 мес.

Пример 2. Для перорального введения берут вакцину, например, следующего состава: 45% вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ и 55% защитной среды, содержащей 8,3% желатина, 26,4% пептона и 65,3% сахарозы. Вакцину разводят питьевой водой из расчета цыплятам 7-10-суточного возраста -1 дозу вакцины на голову в 5 см³, а цыплятам 35-40-суточного возраста -1 дозу вакцины в 10 см³.

Вакцина быстро и без расслоения растворяется. Она вызывает формирование активного поствакцинального иммунитета против реовирусного теносиновита кур через 21 сут после вакцинации продолжительностью 2-3 мес.

В таблице 3 приведены иммуногенные свойства заявляемой вакцины при пероральном введении.

Уровень антител в сыворотке крови привитых цыплят определяют иммуноферментным анализом.

Данные таблицы 3 показывают, что у однократно вакцинированных цыплят на 21 сутки титр антител составляет 1:100 -1:200, а у двукратно вакцинированных цыплят - 1:200 -1:400. При заражения цыплят на 22 сут после вакцинации вирулентным вирусом теносиновита (штаммы СП -73 и М-4) в дозе 10³ ИД₅₀ все вакцинированные цыплята оставались клинически здоровыми в течение 30 суток (срок наблюдения) в отличие от невакцинированных (контрольной группы), 50-60% которых заболели на 9-12 сутки после заражения с клиническими признаками теносиновита.

В таблице 4 приведены результаты изучения остаточной реактогенности вакцины заявляемого состава.

Из данных таблицы 4 видно, что цыплята, иммунизированные в дозах, в 5 и 10 раз превышающих вакцинальную (1 x 10³), оставались клинически здоровыми в течение 30 суток (срок наблюдения).

Таким образом, вакцина против реовирусного теносиновита кур, состоящая на 45 -70% из сухой вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП, остальное - защитная пептонная среда, создает у 95-100% цыплят иммунитет против реовирусного теносиновита кур при пероральной или подкожной вакцинации и не обладает реактогенностью.

Вакцина найдет широкое применение для профилактики реовирусной инфекции кур в промышленном птицеводстве.

Источники информации
1. Трефилов Б.Б., Никитина Н.В. Реовирусная инфекция птиц. - СПб. Информационный листок N 2-96, ВНИВИП, 1996.

2. L. van der Heide, J Geissler, E.S. Bryant. Infektious tenosynovitis: Serologic and Histopathologic response after experimental infection uith a connecticut isolate.- Avian Dis., 1974, vol. 18, n.3, p. 289-296.

3. Проспект фирмы SOLVAY DUPHAR "V.A.CHICK VAC.," 1993.

Изобретение предназначено для профилактики реовирусного теносиновита кур. Вакцина содержит 45 - 70 мас.% вирусной суспензии штамма ВНИВИП-ДЕП с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ и остальное пептонная защитная среда. Пептонная защитная среда содержит, мас.%: пептон 15 - 35, желатин 3 - 10, сахароза остальное. Вакцина для подкожной и пероральной иммунизации не обладает остаточной реактогенностью и хорошо (быстро и без расслоений) растворима в воде, создает у 95-100% цыплят иммунитет против реовирусной инфекции кур в промышленном птицеводстве. 1 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Сухая вакцина против реовирусного теносиновита кур, содержащая вирусную суспензию и пептонную защитную среду, отличающаяся тем, что в качестве вирусной суспензии используют вирусную суспензию штамма "ВНИВИП-ДЕП" реовирусного теносиновита кур с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Вирусная суспензия штамма "ВНИВИП-ДЕП" реовирусного теносиновита кур с активностью не менее 6,0 lg ТЦД₅₀ - 45 - 70
Пептонная защитная среда - Остальное
2. Сухая вакцина по п.1, отличающаяся тем, что пептонная защитная среда содержит пептон, желатин, сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Пептон - 15 - 35
Желатин - 3 - 10
Сахароза - Остальное