ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА ГУСЕЙ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА ГУСЕЙ Российский патент 1998 года по МПК A61K39/12 A61K39/00 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к производству вакцин для специфической профилактики вирусного энтерита гусей, а также к профилактике и лечению этого заболевания.

Вирусный энтерит - острая контагиозная болезнь молодняка гусей, характеризующаяся поражением желудочно-кишечного тракта, печени, сердца, поджелудочной железы и других паренхиматозных органов и сопровождается высокой смертностью (от 30 до 100%). Возбудителем болезни является парвовирус гусей. Болезнь широко распространена в европейских странах (ФРГ, Франция, Англия, Венгрия, Чехословакия, Нидерланды) и на других континентах. В РФ она зарегистрирована во многих хозяйствах различных зон. Экономический ущерб достигает от 25 до 100 тыс. руб. и более из расчета на одно хозяйство. Наиболее эффективным способом борьбы против вирусного энтерита гусей является вакцинопрофилактика.

Известна вакцина для иммунизации птиц против гусиного гепатита (1), однако она содержит патогенный вирус и вводят ее малочувствительной птице в возрасте старше 4 недель.

Известна вакцина против вирусного заболевания гусят, вызываемого парвовирусом, и способ ее получения (2), однако использование в ее составе инактивированного бета-пропиолактоном патогенного вируса не исключает возможности реактивации.

Известна вакцина против парвовирусного заболевания гусей, изготовленная из ослабленного живого вируса, полученного путем аттенуации в культуре клеток гусиных эмбрионов (3). Недостатками этой вакцины являются применение ее гусятам не моложе 20-суточного возраста и недостаточно высокий для создания надежного иммунитета титр в логарифмах ТЦД₅₀. Кроме того, используемый штамм недостаточно полно соответствует в антигенном отношении штаммам вирусного энтерита гусей, циркулирующим в птицехозяйствах нашей страны.

Целью изобретения является повышение эффективности профилактики, безвредности, антигенной активности, длительности хранения и технологичности вакцины и, в результате этого, - повышение выводимости и сохранности гусят.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве антигена используют живую культуру Goosa parvovirus клон 6 с биологической активностью 10^5,5 - 10^6,5 ТЦД₅₀ в культуральной жидкости из сыворотки крови крупного рогатого скота (5,0 - 10,0%) и среды N 199 (остальное) защитной среды высушивания при соотношении компонентов 1: 1-1: 1,5, в качестве стерилизующей добавки используют антибиотики в количестве на 1 мл вакцины:
пенициллин - 100 - 150 ед/мл
стрептомицин - 100 - 150 мкг/мл
При этом в качестве среды высушивания используют сухое обезжиренное молоко или композицию следующего состава, вес.ч.:
пептон - 1,5 - 4,5
желатина - 0,5 - 2,5
сахароза - 0,5 - 2,5
вода - остальное.

Применяют вакцину гусятам 1 - 2-суточного возраста в дозе 50 тыс. ТЦД₅₀ в 0,5-0,75 см³, взрослым гусятам - двукратно, за 50 и 30 суток до начала яйцекладки в дозе 75 - 100 тыс. ТЦД₅₀ в 0,75-1,0 см³.

Вакцинный клон 6 получен из эпизоотического штамма П-75 парвовируса гусей путем клонирования в культуре клеток гусиных эмбрионов под агаровым покрытием при температуре 37,0 - 37,5^oC. Клон 6 депонирован в коллекции ВГНКИ ветпрепаратов (рег. N авт. св. N 1499917.

Клон 6 относится по основным классификационным физико-химическим свойствам к семейству Parvoviridae, рода Parvovirus, т.е. обладает следующими маркерами:
Морфологические признаки: содержит в своем составе ДНК, имеет кубическую форму, его величина - 20±2 нм.

Физико-химические свойства: устойчив к хлороформу, эфиру, нагреванию при температуре 60^oC в течение 1 часа. Срок хранения составляет более 2 лет при температуре - 20 - +4^oC в виде лиофилизированной в ампулах вируссодержащей суспензии на среде N 199 со средой защиты.

Биологические свойства: культивируется в первичной культуре клеток эмбрионов гусей, мускусных уток, требует освежения один раз в двенадцать месяцев, апатогенен для млекопитающих и птиц.

Антигенные свойства: на введение гусятам, цыплятам, кроликам и козам синтезируются вируснейтрализующие антитела в титрах 7,0 - 10,0 loga.

Иммуногенные свойства: иммунизирующая доза клона равна 10³-10⁵ ТЦД₅₀.

Реактогенные свойства: при введении гусятам 1 - 6-суточного возраста вируса клона 6 в дозах 10⁶-3•10⁶ ТЦД₅₀ клинических проявлений заболевания не отмечается.

Контаминация: лиофилизированная культуральная вируссодержащая жидкость не содержит бактерий, грибов, микоплазм и чужеродных вирусов.

Данные по обработке оптимальных технологических параметров вакцины приведены в таблицах 1 - 4.

Из приведенных в таблице 1 данных следует, что наиболее приемлемыми уровнями активности антигенной составляющей вакцины являются уровни от 10⁶ ТЦД₅₀ до 10^7,0 ТЦД₅. При этом расход эмбрионов сравнительно невелик, срок хранения вакцины - 1 - 2 года, количество доз в 1 см³ - от 10 до 100, однако уровень активности 10^7,0 трудно и редко достижим.

Активность антигена ниже 10^6,0 вызывает резкое, в 1,5 - 10,0 раз увеличение расхода эмбрионов при низкой активности конечного продукта (1 - 3 дозы в 1 мл).

Из данных таблицы 2 следует, что оптимальными пределами концентрации сыворотки крови крупного рогатого скота являются 5 - 10%, т.к. при меньшей концентрации не формируется качественный монослой клеточной культуры, а при большей концентрации наблюдается его дегенерация за счет токсического воздействия продуктов жизнедеятельности избыточного количества клеток.

Данные таблицы 3 свидетельствуют о том, что приемлемыми дозировками антибиотиков в вакцине являются дозы 100 - 150 ЕД/мл пенициллина и 100 - 150 мкг/мл стрептомицина, причем оптимальным является нижний предел, дающий надежную защиту от контаминации, а верхний - избыточен и влечет неоправданный перерасход антибиотиков.

Из данных таблицы 4 следует, что оптимальными соотношениями вируса и защитной среды в вакцине являются 1:1 - 1:1,5, т.к. при большем содержании защитной среды снижается активность вакцины и вырабатывается недостаточный для защиты от заболевания иммунитет. Изменение соотношения вируса и защитной среды в сторону увеличения количества вируса влечет за собой сокращение срока хранения вакцины, перерасход вируса и поствакцинальные осложнения у привитой птицы.

Содержание и количественное соотношение ингредиентов в защитной среде диктуется ее функциональными особенностями. Снижение значений ингредиентов ниже минимальных ухудшает защитные свойства среды - снижает срок хранения, а увеличение свыше максимальных - удлиняет срок сушки и тем самым снижает иммуногенность вакцины.

Повышение содержания в композиции свыше 2,5 вес.ч. вызывает повышение вязкости композиции и в результате - плохую растворимость.

Увеличение в композиции количества сахарозы и желатины свыше предельных значений влечет за собой неоднородность среды, расслоение и, как результат, снижение срока годности вакцины.

Применение вакцины в практике птицеводства.

Вакцину разводят стерильным физиологическим раствором с таким расчетом, чтобы одна вакцинальная доза равнялась 10⁵ ТЦД₅₀ в объеме 1,0 см³. Вакцинируют гусей родительского стада за 50 сут до начала яйцекладки двукратно с интервалом в 20 сут в объеме 1,0 см³, гусят 1-2-суточного возраста - в объеме 0,5 см³, а гусят 10-15-суточного возраста - в объеме 1,0 см³ внутримышечно.

Испытание иммуногенности культуральной вирусвакцины против вирусного энтерита гусей методом прямого заражения патогенным штаммом парвовируса в лабораторных условиях показало, что через 10 сут после вакцинации при заражении патогенным штаммом 10 вакцинированных в 2-суточном возрасте гусят не заболело, а из 10 невакцинированных гусят заболело 10/100%/ и пало 4/40%/. Все невакцинированные и незараженные гусята /чистый контроль/ оставались клинически здоровыми.

У вакцинированных гусей в стационарно неблагополучном хозяйстве значительно повышается уровень вируснейтрализующих антител, выводимость, сохранность и устойчивость гусят к заражению /таблица 5/.

Результаты испытания вирусвакцины в неблагополучном хозяйстве, при острой вспышке вирусного энтерита гусей, представлены в таблице 6.

Предложенная вакцина имеет следующие преимущества перед прототипом:
- основана на живом аттенуированном штамме вирусного энтерита гусей П-75, клон 6 и, в силу этого, безвредна для гусят любого возраста, обладает высокой 5,5 ТЦД₅₀ антигенной активностью и соответствует в антигенном отношении штаммам вирусного энтерита, циркулирующим в птицехозяйствах страны;
- вакцина создает напряженный иммунитет у гусят и гусей родительского стада, определяемый повышением уровня вируснейтрализующих антител до 10 log₂ и устойчивостью к прямому заражению вирулентным вирусом вакцинированных гусят и гусят, полученных от вакцинированных гусей родительского стада;
- выводимость гусят из яиц вакцинированных гусей выше на 6 - 8%, чем от невакцинированных птиц;
- сохранность вакцинированных гусят и гусят, полученных от иммунизированных гусей, значительно повышается и зависит от эпизоотической ситуации хозяйства.

Предложенная вакцина апробирована с положительным результатом в лабораторных условиях и в широком производственном опыте в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией на 25 тыс. птицах в период с 1990 по 1989 г.г.

Применение вакцины увеличивает сохранность гусят, полученных от вакцинированных гусей, на 14 - 46% и более.

Источники информации.

1. Патент Франции N 2143588.

2. Патент Франции N 7406981.

3. Патент Венгрии N 171519, кл. C 12 K 9/00, 1981.

4. Parvovirus diasease or Derzy's gosling and wild duck disease living virus vaccine, Hockstra's derivat.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к производству вакцин для специфической профилактики вирусного энтерита гусей, а также к способу профилактики этого заболевания. Вакцина содержит культуральную жидкость, штамм вируса Goosa parvovirus ВГНКИ N71 с биологической активностью 10^6,0-10^7,0 ТЦД₅₀ и защитную среду высушивания при соотношении культуральной жидкости и защитной среды 1:1 - 1,0:1,5. Способ профилактики заболевания предусматривает введение предлагаемой вакцины гусятам 1 - 2-суточного возраста в дозе 50 - 70 тыс. ТЦД₅₀ в 0,50 - 0,75 см³ или взрослым гусям двукратно, за 50 - 30 сут до начала яйцекладки в дозе 75 - 100 тыс. ТЦД₅₀ в 0,75 - 1,00 см³. 2 с. и 5 з.п. ф-лы, 6 табл.

Вакцина против вирусного энтерита гусей, содержащая культуральную жидкость с антигеном живой культуры Goosa parvovirus и защитную среду высушивания, отличающаяся тем, что в качестве антигена она содержит штамм вируса Goosa parvovirus ВГНКИ N 71 с биологической активностью 10^6,0 - 10^7,0 ТЦД₅₀, а в качестве культуральной жидкости - сыворотку крови крупного рогатого скота и среду N 199 при следующем соотношении компонентов, мас.%
Сыворотка крови крупного рогатого скота - 5,0 - 10,0
Среда N 199 - Остальное
причем соотношение культуральной жидкости и защитной среды составляет 1 : 1 - 1,0 : 1,5.