СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА Российский патент 2001 года по МПК A61K38/00 

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может быть использовано для изготовления лекарственной формы альфа-фетопротеина (АФП) человеческого, используемого для лечения заболеваний с аутоиммунными нарушениями.

Известен способ получения альфа-фетопротеина путем осветления исходного сырья центрифугированием и хроматографической очисткой целевого продукта на аффинном сорбенте в две стадии: сначала на сорбенте, содержащем антитела к альфа-фетопротеину, а затем на сорбенте, содержащем комплекс антител против белков крови человека, причем в качестве аффинного сорбента используют Br-CN-сефарозу, активированную глутаровым альдегидом (Патент РФ N 2100031, опубл. 27.12.97, бюл. N 36).

Недостатки: способ сложен и предполагает использование дорогих реактивов.

Изобретение направлено на решение задачи: упрощение и удешевление способа при высокой чистоте и качестве целевого продукта.

Указанная задача достигается путем смешивания абортной сыворотки человека в соотношении 10:1 с продуктом, полученным путем смешивания сыворотки с антителами к АФП человеческому с нормальной человеческой сывороткой в соотношении 10:1, pH полученной смеси доводят до 11. Смесь центрифугируют, полученный осадок растворяют в физрастворе и доводят до pH 2, затем в раствор добавляют в соотношении 1:1 охлажденный до t -30^oC этиловый спирт, смесь центрифугируют, в оставшийся раствор добавляют в пропорции 2:1 охлажденный этиловый спирт, смесь центрифугируют и получают осадок АФП не ниже 90%.

Способ осуществляют следующим образом. Сыворотку крови с антителами к АФП человеческому, содержащую около 2 г указанных антител смешивают в соотношении 10:1 с нормальной человеческой сывороткой крови и в течение 30 минут выдерживают при t -37^oC, затем pH полученной смеси доводят до 11 и смесь центрифугируют при 2500 об/мин в течение 20 минут. Полученный осадок отбрасывают, а pH жидкости доводят до 7. Затем эту жидкость смешивают в соотношении 1:10 с абортной сывороткой человека, содержащей 100 мг/л АФП и полученную смесь выдерживают в течение 30 минут при t -37^oC. Далее рH полученной смеси доводят до 11 и смесь центрифугируют при 2500 об/мин в течение 20 минут. Полученный осадок растворяют в минимальном количестве физраствора и доводят до pH 2. Раствор выдерживают при t 37^oC в течение 30 минут. В полученный раствор добавляют в соотношении 1:1 этиловый спирт, охлажденный до t -30^oC. Смесь центрифугируют при охлаждении при 5000 об/мин в течение 30 минут. Осадок, содержащий антитела к АФП, хранят при t -6^oC. В оставшийся раствор добавляют в соотношении 2:1 этиловый спирт, охлажденный до t -30^oC. Смесь центрифугируют при охлаждении при 5000 об/мин в течение 30 минут. Полученный осадок представляет собой АФП-человеческий чистотой не ниже 90%. Далее в целевой продукт вводят полисахарид реополиглюкин или альбумин в количестве 3-10 мг на 75 мкг АФП. Раствор разводят физраствором до концентрации 75 мкг АФП в 1 мл, стерилизуют, расфасовывают в ампулы или флаконы по 1 мл и осуществляют лиофильное высушивание.

Способ позволяет упростить и удешевить получение препарата АФП, сохранив при этом высокое качество, чистоту и стабильность целевого продукта.

Абортную сыворотку человека смешивают в соотношении 10:1 с продуктом, полученным путем смешивания сыворотки с антителами к альфа-фетопротеину человеческому с нормальной человеческой сывороткой. Смесь центрифугируют, осадок растворяют в физрастворе рН 2, в раствор добавляют в соотношении 1:1 охлажденный этиловый спирт, центрифугируют, в оставшийся раствор снова добавляют охлажденный этиловый спирт в пропорции 2:1, после центрифугирования получают осадок, представляющий собой альфа-фетопротеин человеческий с чистотой не ниже 90%, в который затем вводят полисахарид и осуществляют фасовку и лиофильное высушивание. Технический результат: упрощение и удешевление способа при высокой чистоте и качестве целевого продукта. 1 з.п.ф-лы.

1. Способ получения альфа-фетопротеина из абортной сыворотки человека, включающий центрифугирование исходного продукта, отличающийся тем, что сыворотку крови, содержащую около 2 г антител к АФП-человеческому, смешивают в пропорции 10: 1 с нормальной человеческой сывороткой крови и выдерживают в течение 30 мин при t = 37^oC, рН смеси доводят до 11, смесь центрифугируют, осадок отбрасывают, рН жидкости доводят до 7, полученный продукт смешивают с абортной сывороткой человека, содержащей 100 мг/л АФП в соотношении 1:10, смесь выдерживают 30 мин при t = 37^oC, рН доводят до 11, смесь центрифугируют, полученный осадок растворяют в минимальном количестве физраствора, доводят рН до 2, раствор выдерживают 30 мин при t = 37^oC, в него добавляют в порции 1:1 охлажденный до t = -30^oC этиловый спирт, смесь центрифугируют при охлаждении, осадок убирают, в оставшийся раствор добавляют в пропорции 2:1 охлажденный до t = -30^oC этиловый спирт, смесь центрифугируют при охлаждении, получают осадок, представляющий собой АФП-человеческий, чистотой не ниже 90%, в который вводят полисахарид в количестве 3 - 10 мг на 75 мкг АФП, разводят до концентрации 75 мкг АФП в 1 мл и осуществляют фасовку в ампулы или флаконы и лиофильное высушивание. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полисахарида используют реополиглюкин или альбумин.