СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ОБСТРУКТИВНОГО БРОНХИТА И БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ СМЕШАННОГО ГЕНЕЗА Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики хронического обструктивного бронхита и бронхиальной астмы смешанной формы.

Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа.

Поставленная цель достигается применением способа, предложенного в заявке 93039022/14 (038236) с датой поступления 27.07.93 г. , по которому получено решение о выдаче патента на изобретение от 29.03.96 г.

Несмотря на значительные успехи в диагностике бронхиальной астмы и выделение различных этиологических и патогенетических ее вариантов, клиническая практика нередко свидетельствует о случаях гипердиагностики (2). Достаточно труден дифференциальный диагноз бронхиальной астмы и хронического обструктивного бронхита, особенно, при развитии вторичного хронического бронхита при бронхиальной астме или при присоединении бронхообструктивного синдрома при длительном течении хронического бронхита (3).

В последние годы бронхиальную астму, с морфологической точки зрения, рассматривают как эозинофильное воспалительное заболевание бронхиального дерева (4). Однако эозинофилия в крови у больных БА отмечается только в 34-60% случаев (1). А определение эозинофилов в бронхоальвеолярном смыве не всегда выполнимо вследствие противопоказаний к бронхоскопии.

В связи с этим целью предлагаемого изобретения является разработка способа дифференциальной диагностики хронического обструктивного бронхита и бронхиальной астмы смешанной формы.

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого берут кровь из вены (3 мл) в пробирку с гепарином, на 1 мл крови 25 единиц гепарина. Кровь разводят раствором Хенкса в соотношении 1: 1. На дно сухой пробирки наливают 3 мл градиента плотности p= 1,077 г/мл. Для контроля жизнеспособности клетки окрашивали трипановым синим. Процент окрашенных клеток не превышал 3-4. Наслаивают разбавленную кровь на градиент плотности, не допуская перемешивания сред. Центрифугируют 40 минут при 1500 оборотах в минуту. После центрифугирования убирают надосадочную жидкость пипеткой и собирают верхнее кольцо, состоявшее из лимфоцитов в сухую пробирку. Нижний слой плазмы, содержащий гранулоциты, собирают в другую пробирку. Добавляют раствор Хенкса до 5 мл, ресуспендируют и отмывают при 1500 оборотах в минуту 10 минут. Убирают надосадочную жидкость до 0,1 мл. Добавляют раствор Хенкса, чтобы получилась суспензия лимфоцитов в объеме 1 мл, гранулоцитов - 0,7 мл. Ресуспендируют. Подсчитывают клетки в камере Горяева и доводят до нужной концентрации (лимфоциты - 4,5•10⁹/л, гранулоциты -3,0•10⁹/л). Переносят лимфоциты в бакпечатку, гранулоциты на покровное стекло и инкубируют 1 час при температуре 37^oС в термостате. После инкубирования убирают надосадочную жидкость с гранулоцитов и добавляют к гранулоцитам лимфоциты. Инкубируют при температуре 37^oС 1 час в термостате. Затем добавляют 1 каплю глютарового альдегида 3% и выдерживают в течение 5 минут при комнатной температуре по Маю-Грюнвальду. Высушивают при комнатной температуре. С помощью светового микроскопа определяют количество свободнолежащих лимфоцитов и розеткообразующих. Для повышения точности результатов подсчет ведут на 300 клеток в 3-х полях зрения с дальнейшем построением цитограммы.

Полученные результаты, характеризующие характер заболевания, представлены в цитограмме гранулоцитосвязывающих лимфоцитов (ЛСГ), таблица. Как видно из таблицы, у больных БА в период обострения достоверно (p<0,001), в сравнении с контрольной группой доноров, увеличены показатели ЛСГ-1, свидетельствующие о воспалительном процессе и достоверно (p<0,001) снижены показатели ЛСГ-2, указывающие на наличие иммунодефицита.

При качественном анализе гранулоцитов, образующих розетки с лимфоцитами, нами было установлено, что у всех обследованных больных с БА смешанного варианта в 100% розеткообразование происходит преимущественно за счет эозинофилов.

При этом у 2 из 10 больных БА выявлена эозинофилия в крови и у 6 больных - в бронхиальном смыве.

Полученные нами данные указывают на повышенную активность эозинофилов в процессе розеткообразования с лимфоцитами при БА, в отличие от ХОБ, при котором в процессе розеткообразования с лимфоцитами участвуют преимущественно сегментоядерные нейтрофилы.

Разработанный способ диагностики позволяет получить более достоверные данные в течение 4-х часов, по сравнению с существующими: эозинофилия в общем анализе крови была выявлена у 2 из 10 обследованных больных, а в бронхиальном смыве - у 6 из 10 больных. Способ не требует особой стерильности, дефицитных реактивов, дорогостоящих приборов и прост в исполнении, экономичен.

Источники информации
1. Адо А. Д. , Маянский А. Н. Иммунология. - 1986. - 1. - М. , 1986, - с. 20-27.

2. Федосеев Г. Б. Механизмы обструкции бронхов. - Санкт-Петербург, 1995, - с. 118-119.

3. Федосеев Г. Б. , Услонцев Б. М. Бронхиальная астма и бронхообструктивные синдромы//Клин. мед. - 1992. - 5-6, - с. 5-9.

4. Чучалин А. Г. Современные подходы к лечению бронхиальной астмы//Клиническая фармакология и терапия. - М. , 1993, - с. 17-22.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии. Способ осуществляется путем исследования крови больных хроническим обструктивным бронхитом и бронхиальной астмой смешанной формы. Показатели крови оценивают по цитограмме гранулоцитосвязывающих лимфоцитов и при преимущественном выявлении в мазках эозинофильно-лимфоцитарных розеток диагностируют бронхиальную астму, а нейтрофильно-лимфоцитарных розеток - хронический обструктивный бронхит. Способ позволяет получить достоверные данные в течение 4 ч, не требует особой стерильности, дефицитных реактивов, дорогостоящих приборов и прост в исполнении, экономичен. 1 табл.

Способ дифференциальной диагностики хронического обструктивного бронхита и бронхиальной астмы смешанного генеза путем исследования крови, отличающийся тем, что показатели крови оценивают по цитограмме гранулоцитосвязывающих лимфоцитов и при преимущественном выявлении в мазках эозинофильно-лимфоцитарных розеток диагностируют бронхиальную астму, а нейтрофильно-лимфоцитарных розеток - хронический обструктивный бронхит.