СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/48 G01N33/92 

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, гепатологии.

Установить причину (этиологию) заболевания очень важно, так как существуют лекарственные средства, непосредственно действующие на причинный фактор развития заболевания (например, антибактериальные, антивирусные препараты).

Известен способ диагностики вирусной этиологии поражения печени путем путем полимеразной цепной реакци (ПЦР), которая позволяет документировать наличие в крови вирусных антигенов (Рахманова А.Г., Яковлев А.А., Виноградова Е. Н. и др. Хронические вирусные гепатиты (вопросы классификации и регистрации) // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1999. - 1. - С.39-42 (аналог)).

Недостатком известного способа является то, что даже при использовании конкурентных, в том числе и импортных, тест-систем и ПЦР примерно у 1/5 больных вирусная этиология поражения печени остается неверифицированной (Рахманова А. Г., Яковлев А.А., Виноградова Е.Н. и др. Хронические вирусные гепатиты (вопросы классификации и регистрации) // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1999. - 1. - С.39-42).

Кроме того, период нахождения в крови антигенов вирусных гепатитов (период вирусемии), определяемых с помощью ПЦР, обычно кратковременный (несколько дней) и заканчивается с внедрением вирусов в паренхиматозные клетки печени. Нарастание иммунитета ведет к освобождению организма от возбудителя, наступающему, как правило, с появлением желтухи. (Кошиль О.И. Руководство по инфекционным болезням. - С.-Петербург. - 1996. - c.246).

Отсюда понятно, что эффективность способа диагностики вирусной этиологии поражения печени с помощью метода ПЦР "слегка" преувеличена и на фоне уже развившейся желтушности кожных покровов результаты определения антигена вирусов гепатитов могут и должны быть достаточно часто отрицательными. При хронических вирусных гепатитах антиген вирусных гепатитов также находится в крови непостоянно. Наблюдается его выброс из места персистенции кратковременно, импульсами, содержание вирусного антигена в крови низкое. Поэтому бывает очень трудно подтвердить вирусную этиологию поражения печени только с помощью метода ПЦР без использования дополнительных биохимических и серологических методов диагностики.

Кроме того, подтверждение вирусной этиологии поражения печени с помощью ПЦР требует применения дорогостоящей, часто импортной аппаратуры и реактивов, то есть не доступно для широкого круга больных. В ряде случаев, например при дифференциальной диагностике механической, гемолитической и желтухи вирусного происхождения, достаточно иметь данные о том, что поражение печени у больного не связано с вирусной, то есть с инфекционной природой развития болезни, и таким образом необходимость в проведении дорогостоящих исследований по определению с помощью ПЦР каким возбудителем гепатита (А, В, С или D) вызвано данное заболевание отпадает.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ диагностики вирусной этиологии поражения печени с помощью серологических маркеров: anti-HAV IgM,, HB_sAg, HB_eAg, anti-HB_с IgM, anti-HCV IgM, anti-HDV IgM (Кошиль О. И. Руководство по инфекционным болезням. - С.-Петербург. - 1996. - с.248, 258, 262, 264 (прототип)). Дело в том, что период выработки и нахождения в крови антител значительно более длительный, чем период вирусемии, определяемой с помощью ПЦР.

Однако внедрение молекулярно-биологических методов диагностики позволило выделить множество генотипов и субтипов вируса гепатита "С", мутантные штаммы вируса гепатита "В", что снижает точность диагностики вирусной этиологии поражения печени.

При создании изобретения решалась задача расширения арсенала способов диагностики вирусной этиологии поражения печени.

Техническим результатом является расширение арсенала способов диагностики вирусной этиологии поражения печени.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики вирусной этиологии поражения печени путем исследования сыворотки крови, согласно изобретению, в сыворотке крови определяют относительное содержание фракций фосфолипидов, выделяют показатель относительного содержания лизофосфатидилхолина и при уровне его в пределах 5-7% диагностируют вирусную этиологию поражения печени.

Новыми, ранее неизвестными признаками заявленного способа диагностики вирусной этиологии поражения печени, являются:
1) использование объективного теста в качестве показателя для диагностики вирусной этиологии поражения печени, то есть показателя фракции лизофосфатидилхолина;
2) разработан и предложен уровень содержания фракции лизофосфатидилхолина, при котором и ниже диагностируют вирусную этиологию поражения печени.

Способ разработан на основе определения в сыворотке крови относительного содержания фракции лизофосфатидилхолина у носителей HB_SAg, больных острым и хроническим вирусным гепатитом и сравнения его с показателями аналогичных фракций у здоровых лиц. Данные по фосфолипидному спектру крови получены от 30 носителей HB_SAg, 40 больных острым вирусным гепатитом А, В, С и D и 50 больных хроническим вирусным гепатитом. Для больных с вирусной этиологией поражения печени характерен уровень лизофосфатидилхолина в пределах 5-7%.

Выбор показателей фосфолипидных фракций сыворотки крови был продиктован тем, что фосфолипиды входят в состав мембран клеток печени и соответственно всякое изменение содержания их на мембране приводит к изменению содержания их в сыворотке крови. Изменение их на уровне мембран происходят максимально рано по всей печени как органу, что и позволяет диагностировать вирусную этиологию поражения печени.

Фосфолипидный спектр имеет в своем составе лизофосфатидилхолин (ЛФХ), лизофосфатидилэтаноламин (ЛФЭА), сфингомиелин (СМ), фосфатидилхолин (ФХ), фосфатидилэтаноламин (ФЭА). Проведенные исследования показали, что при повреждении печени (гепатопатии) происходит понижение относительного содержания лизофосфатидилхолина.

Предлагаемый способ диагностики вирусной этиологии поражения печени существляют в следующей последовательности.

Кровь для исследования берут утром натощак из вены в количестве 5 мл, центрифугируют, отбирают 0,8 мл сыворотки и экстрагируют липиды добавлением смеси хлороформ-метанола (1:2), фильтруют, выпаривают и разгоняют в камерах в парах смеси хророформ-метанол-7Н аммиак (13,4: 4, 6: 1,0) на специальных пластинках с силикагелем и затем денситометрируют. Получают относительное содержание фракций фосфолипидов в сыворотке крови и при уровне ЛФХ в пределах 5-7% диагностируют вирусную этиологию поражения печени.

Пример 1. Больная Филиппова А.В., 26 лет, история болезни 396, поступила в клинику инфекционных болезней с подозрением на острый вирусный гепатит. Относительное содержание лизофосфатидилхолина в сыворотке крови составило 6,5%, что позволяет диагностировать вирусную этиологию поражения печени.

Полученный вывод подтвержден традиционным способом путем обнаружения маркеров вирусного гепатита "В" -anti-HBc IgM и HBsAg.

Пример 2. Больная Паукова М.А., 19 лет, история болезни 5506, проходила обследование по подозрению на острый вирусный гепатит. Относительное содержание лизофосфатидилхолина в сыворотке крови составило 5,7%, что позволяет диагностировать вирусную этиологию поражения печени.

Полученный вывод подтвержден традиционным способом путем обнаружения маркеров вирусного гепатита "В" -anti-HBc IgM и маркера вирусного гепатита "С" - anti-HCV IgM.

Пример 3. Больной Мжельский В.К., 37 лет, история болезни 5665, поступил в клинику инфекционных болезней с подозрением на острый вирусный гепатит. Относительное содержание лизофосфатидилхолина в сыворотке крови составило 7,0%, что позволяет диагностировать вирусную этиологию поражения печени.

Полученный вывод подтвержден традиционным способом путем обнаружения маркеров вирусного гепатита "В" -anti-HBc IgM и HBeAg и маркера вирусного гепатита "А" - anti-HAV IgM.

Пример 4. Больной Додобаев Р.С., 27 лет, история болезни 747, поступил в клинику инфекционных болезней с подозрением на острый вирусный гепатит. Относительное содержание лизофосфатидилхолина в сыворотке крови составило 7,0%, что позволяет диагностировать вирусную этиологию поражения печени.

Полученный вывод подтвержден традиционным способом путем обнаружения маркеров вирусного гепатита "В" - HBsAg и маркера вирусного гепатита "D" - anti-HDV IgM.

Использование вновь разработанного способа диагностики вирусной этиологии поражения печени приводит к повышению качества диагностики, позволяет врачу своевременно и в соответствии с учетом вирусной этиологии поражения печени или отсутствия таковой, произвести дальнейшие диагностические действия, определить диету, назначить лечение, добиться стабилизации процесса и продлить жизнь больного. При дифференциальной диагностике механической, гемолитической и желтухи вирусного происхождения достаточно иметь данные о том, что поражение печени у больного не связано с вирусной, то есть с инфекционной природой развития болезни, и необходимость проведения дорогостоящих исследований по определению маркеров вирусных гепатитов (А, В, С или D) отпадает.

Способ может быть использован в медицине, а именно в гепатологии. В сыворотке крови определяют относительное содержание фракции лизофосфатидилхолна и при ее значении в пределах 5-7% диагностируют вирусную этиологию поражения печени. Способ более точен.

Способ диагностики вирусной этиологии поражения печени путем исследования сыворотки крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют относительное содержание фракции лизофосфатидилхолина и при ее значении в пределах 5-7% диагностируют вирусную этиологию поражения печени.