ВЫСОКОМЕЧЕННЫЕ ТРИТИЕМ ПРОИЗВОДНЫЕ СИАЛОВОЙ КИСЛОТЫ Российский патент 2002 года по МПК C07H7/02 C07H5/04 C07B59/00 C07M5/00 

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в биологии и в медицине.

При исследовании физиологически активных соединений необходимо иметь их меченые аналоги.

Известны производные сиаловой кислоты общей формулы I:

где R - CH₃ или

α-метилглюкозид N-ацетил-нейраминовой кислоты и α-дисахаридглюкозид N-ацетил-нейраминовой кислоты соответственно.

Данные соединения являются функциональными фрагментами ганглиозидов и гликопротеинов и используются для исследования высшей нервной деятельности. Кроме того, они являются компонентами всех типов мукопротеинов, мукополисахаридов и некоторых муколипидов. Эритроциты животных содержат сиаловые кислоты в виде N-гликолиловых групп (R.Schauer. Sialic Acids: Chemistry, Metabolism, Function. Ed. Springer-Verlag, New York, 1983, 346 pp).

Однако меченные тритием аналоги данных известных соединений не описаны.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является получение высокомеченных тритием соединений общей формулы I.

Ниже приведены примеры реализации изобретения.

Пример 1. В реакционную ампулу помещали 2 мг α-метилглюкозида N-ацетил-нейраминовой кислоты, нанесенного на 50 мг 5% Pd/СаСО₃, затем ампулу вакуумировали до давления 0,1 Па, заполняли газообразным тритием до давления 333 гПа и выдерживали при температуре 200^oС 5 мин. Избыточный тритий удаляли вакуумированием. После охлаждения продукты реакции растворяли в воде (6x1 мл), катализатор отфильтровывали, а фильтраты упаривали несколько раз для удаления лабильного трития. Остаток хроматографировали вначале методом ТСХ на силикагельных пластинках в системе метанол-ацетонитрил-вода (3:3:2). Зону, содержащую искомое вещество, вырезали и меченый препарат элюировали смесью воды с метанолом (9:1) (5x1 мл). Элюаты упаривали, растворяли в 1 мл смеси метанола с водой (9:1) и фильтровали. Окончательную очистку осуществляли методом ВЭЖХ. Выход меченого препарата 20-25%, а молярная радиоактивность 12,5 Ки/ммоль.

Анализ и очистку меченого препарата проводили тонкослойной (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной (ВЭЖХ) хроматографией.

Натриевая соль α-метилглюкозида N-ацетил-нейраминовой кислоты:
ТСХ (Sorbfil) - изопропанол-этилацетат-вода (4:3:2), Rf 0,45; метанол-ацетонитрил-вода (3:3:2), Rf 0,77;
ВЭЖХ - Separon NH₂, 7 мкм, 3•150 мм, v - 0,5 мм/мин, в системе ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота (70:30:0,05) время удерживания 13,00 мин; в системе ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота (70:30:0,1) время удерживания 6,96 мин.

α-Дисахаридглюкозид N-ацетил-нейраминовой кислоты:
TCX(Sorbfil) -изопропанол-этилацетат-вода (4:3:2), Rf 0,15; метанол-ацетонитрил-вода (3:3:2), Rf 0,65;
ВЭЖХ - Separon NH₂, 7 мкм, 3•150 мм, v - 0,5 мл/мин, в системе ацетонитрил-вода-трифторуксусная кислота (80:20:0,08) время удерживания 5,32 мин.

Для приема и обработки хроматографических данных использовался программно-аппаратный комплекс "МультиХром 1.5" (ООО "Амперсенд", Россия) на базе IBM PC/AT. Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике с эффективностью регистрации трития 30% в диоксановом сцинтилляторе.

Пример 2. В реакционную ампулу помещали 4 мг α-дисахаридглюкозида N-ацетил-нейраминовой кислоты, нанесенного на 100 мг 5% Pd/СаСО₃, затем его вакуумировали до давления 0,1 Па, заполняли газообразным тритием до давления 333 гПа и выдерживали при температуре 160^oС 20 мин. Избыточный тритий удаляли вакуумированием. После охлаждения продукты реакции растворяли в воде (6•1 мл), катализатор отфильтровывали, а фильтраты упаривали несколько раз для удаления лабильного трития. Остаток хроматографировали вначале методом ТСХ на силикагельных пластинках в системе метанол-ацетонитрил-вода (3:3:2). Зону, содержащую искомое вещество, вырезали и меченый препарат элюировали смесью воды с метанолом (9:1) (5•1 мл). Элюаты упаривали, растворяли в 1 мл смеси метанола с водой (9:1) и фильтровали. Окончательную очистку осуществляли методом ВЭЖХ. Выход меченого препарата 10-15%, а молярная радиоактивность 8,0-9,0 Ки/ммоль.

Таким образом, получены новые высокомеченные тритием производные сиаловой кислоты - α-метилглюкозид N-ацетил-нейраминовой кислоты и α-дисахаридглюкозид N-ацетил-нейраминовой кислоты.

Описываются высокомеченные тритием производные сиаловой кислоты общей формулы I

где R - CH₃ или

Техническим результатом является расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных соединений.

Высокомеченные тритием производные сиаловой кислоты общей формулы I

где R=CH₃ или
_