ИММУНОКОРРЕГИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ИММУНОКОРРЕКЦИИ Российский патент 1999 года по МПК A61K33/04 A61K9/08 A61K35/78 A61K35/80 

Изобретение относится к области медицины, биологической химии, фармакологии и может быть использовано в клинической практике для лечения различных заболеваний, сопровождающихся расстройствами иммунной системы.

Известно, что помимо защиты от возбудителей инфекционных заболеваний иммунная система организма участвует в противоопухолевой защите, осуществляет нормальную дифференцировку клеток кроветворной системы, обеспечивает нормальное внутриутробное развитие плода, элиминацию и утилизацию отмирающих тканевых структур, а также играет определенную роль при таких физиологических состояниях, как старение /Беклемишев Н. Д. "Иммунопатология и иммунорегуляция", М., Медицина. 1986, стр. 9-18/.

В регуляции разнообразных процессов, происходящих в тканях органов тела человека, ведущая роль принадлежит тканевому и клеточному иммунитету. Благодаря опосредованному влиянию тканевых фагоцитов, гистиоцитов, плазмоцитов и лимфоцитов в системе комплемента и антител осуществляется надзор за регенерацией тканей, выведением продуктов распада, а также жизнедеятельностью клеток. При этом необходимо отметить, что со стороны иммунной системы происходит жесткий контроль за структурами и функциями всех тканей и органов человека и, главным образом, за нормализацией функций микроциркуляторной сети.

Проведенные в течение последних десятилетий теоретические и клинические исследования показали тесную связь иммунной и микроциркуляторной системы с жизнеобеспечением различных структур, тканей и функций тела человека. Все большее подтверждение получает концепция стимулирования иммунной системы и микроциркуляции для устранения различных патологических процессов.

В настоящее время в клинической практике для иммунокоррекции используют как синтетические, так и средства природного происхождения. Это, как правило, препараты из экстрактов зобной железы, лимфатических узлов, соединительной ткани и селезенки. К таким препаратам относятся хорошо известные в клинической практике средства, например, тимолин, Т-активин, тимоптин, миелопид, тимоген и т. д. /Машковский М. Д. "Препараты, стимулирующие процессы иммунитета" - в кн. : Лекарственные средства, М, "Медицина". 1993, том 2, стр. 193-204/. К этому же классу лекарственных веществ можно отнести препарат "пропес" для инъекций /утверждено фармокомитетом МЗ Украины 25. 12. 95, регистрационный номер 95/245/7./ содержащий стерильный раствор оптимального комплекса аминокислот, выделенный из эмбриональных органов низкомолекулярных пептидов, так и полученных в результате органического протеолиза высокомолекулярных предшественников. Этот препарат, по утверждению автора, стимулирует функциональную активность хелперов и мононуклеарных фагоцитов, обладает резко выраженным иммуномодулирующим действием и отчетливым антитоксическим эффектом.

Однако все известные препараты обладают в большей степени органотропным действием, нежели общим и поэтому не могут оказывать единого интегрального действия на иммунобиологическую систему организма. К недостаткам этих препаратов принципиального характера, ограничивающих их применение в клинической практике, можно отнести следующие: неспецифичность воздействия на структуры живого вещества, побочные последствия в виде токсических и мутагенных нарушений, относительно низкую активность воздействия на молекулярно-энергетические процессы.

Неспецифичность воздействия современных препаратов на иммунную систему обусловлено тем, что подобные лекарственные вещества не обладают синергическим действием на рецепторный аппарат мембран клеток и тканей, что не приводит к оптимальной и адекватной стимуляции лимфоцитарной и гистиоцитарной систем. В то же время принцип сенситизации, то есть адекватного синергичного воздействия вещества на рецепторы мембран и клеток с одновременным синтезом АТФ, является основным в стимуляции жизнедеятельности всех тканей тела человека, в том числе иммунной системы.

В последнее время всеобщее внимание исследователей и клиницистов привлек селен, обнаруженный в качестве жизненно важного микроэлемента. Согласно проведенным исследованиям селен является необходимым элементом для осуществления всех иммунологических процессов как гуморальных, так и тканевых. Синтез антител и формирование клонов иммуноактивных клеток может происходить только при участии селена. Как известно, селен является составной частью глютатионовой пероксидазы - энзима, играющего важную роль в клетке. Этот микроэлемент предотвращает образование в них химически активных агрессивных частиц кислорода - свободных радикалов - и обладает антиокислительным действием, аналогичным действию витамина Е. Именно с этой функцией защитника клеток может быть связан весь профилактический спектр действия селена и его соединений.

При помощи селена и его соединений в организме осуществляется биосинтез иммуноглобулинов, особенно типа G; происходит коррекция клеточных компонентов иммунитета, возрастает количество хелперов и уменьшается количество супрессоров, в связи с чем нормализуется коэффициент иммунорегуляции. Кроме того, активная роль селена и его органических соединений в осуществлении антиоксидантных процессов приводит к нормализации клеточного дыхания и восстановлению метаболических энергетических процессов.

В связи с этим селеносодержащие препараты получают все большее распространение. Так для поддержания функций иммунной системы в качестве микроэлемента селен вводят в комплексы витаминных препаратов, например центрум /centrum/. (Справочник ВИДАЛЬ Лекарственные препараты в России, М., АстраФармСервис, 1997, стр. Б-654). Известны также селеносодержащие препараты, полученные на основе биомассы водорослей /патент GB 2203043, 1988 или патент РФ 2096037, 1997/, обладающие общетонизирующим действием, реализация которого связана с активным воздействием на иммунную систему соединений селена.

Однако указанные препараты имеют недостаточно высокое содержание органического селена, а технология их получения сложна и требует длительного времени.

Задачей настоящего изобретения является расширение ассортимента иммунокоррегирующих средств; создание лечебного вещества, введение которого в организм не сопровождается побочными последствиями, а вызывает системный лечебный эффект, основанный на нормализации энергетических процессов иммунной системы.

Для решения поставленной задачи предлагается средство, обладающее иммуностимулирующим и иммунокоррегирующим действием. Оно включает органический низкомолекулярный компонент, полученный из протеинсодержащего сырья путем экстракции органическим растворителем с последующим высушиванием субстанции и растворением в 60% - 90% спирте и ионизированную органическую соль селена, и выдержанный в электромагнитном синусоидальном высокочастотном поле 20-30 МГц.

Полученное вещество мы назвали протеоселеновым комплексом (ПСК).

Получение ПСК.

В качестве исходных продуктов используют зеленую массу белковосодержащих растений, например злаковых и бобовых, а также богатые белками листья кукурузы. Зеленую массу предварительно высушивают и измельчают. С помощью экстракции из полученного сырья извлекают белковоорганические комплексы. Экстракцию осуществляют с помощью эфира, спирта или димексида. Полученный экстракт выпаривают и производят лиофильную сушку. Полученный порошок растворяют в 60% или 90% спирте. После этого к раствору добавляют селен в виде ионизированных ионов, получаемых при электролизе селеномочевины SeC(NH₂)₂ из расчета 3-6 мкг селена на 1 мл раствора. Полученный раствор помещают в электромагнитное (плотность потока мощности 5•10^-3Вт/см²) синусоидальное высокочастотное поле 20-30 МГц на 5 минут. Указанное поле может быть создано, например, в сквидмагнитометрах, которые применяются для магнитокардиографии или магнитоэнцефалографии.

Полученное таким образом вещество помещают во флаконы и герметизируют.

Конкретные примеры получения ПСК.

Пример 1.

Измельчили 15 г бобового высушенного растения (клевер розовый), поместили в колбу, добавили 50 г 5% димексида и оставили на 3 дня. По истечении этого времени наблюдали обесцвечивание частиц размельченного вещества. Слили жидкость в объеме 40 мл. Полученный раствор высушили и получили 400 мг порошка светло-зеленого цвета. Порошок высыпали в емкость в 50 мл и добавили 40 мл 60% спирта. В раствор добавили 120 мкг ионизированной соли селена (из расчета 3 мкг на 1 мл). Раствор с селеном поместили на 5 минут в высокочастотное электромагнитное поле сквидмагнитометра, в результате чего произошло соединение селена с аминокислотами растительного белка. Препарат разлили во флаконы емкостью 15 мл и осуществили герметизацию.

Пример 2.

Измельчили 30 г высушенного растения (листья кукурузы), добавили 50 г 90% спирта, оставили на 3 дня. Слили жидкость и добавили 120 мкг ионизированной соли селена. Полученный раствор поместили на 5 минут в высокочастотное электромагнитное поле сквидмагнитометра. Препарат разлили во флаконы емкостью 15 мл и осуществили герметизацию.

Рентгеноструктурный анализ полученного вещества показал, что ПСК представляет собой асимметричную белковую молекулу с альфа-спиралью и бета - структурой. Гидрофобный конец молекулы ПСК, представленный сульфгидридными связями, переходит в альфа-спираль. Бета структура молекулы ПСК извита соответствующим образом и на внешней стороне аминокислотной цепочки, как и на внутренней, имеются диселенидные связи, обеспечивающие пространственную устойчивость и в то же время гибкость данной молекулы.

В состав всей молекулы ПСК входит 15 основных аминокислот, из которых 11,5% принадлежит аланину, 24,0% лейцину, 10,5% пролину и 27% глютаминовой кислоте. Соответственно описанной технологии могут быть получены ПСК молекулы из 15-20 аминокислот с молекулярным весом 3-4 тыс.

Острую токсичность препарата исследовали при внутрибрюшинном введении ПСК в дозе 250 мг/кг мышам (возраст 6 недель, вес 28-30 г). Значение ЛД50 составило 700 мг/кг.

При исследовании общей токсичности мышам вводили ПСК в дозе 100 мг/кг/день внутрибрюшинно непрерывно в течение 10 дней. Снижение веса или каких-либо других нарушений при этом не наблюдали. В последующем, при наблюдении этих мышей в течение трех месяцев, отклонений от нормы не выявлено.

В результате проведенных исследований установлено, что ПСК является органическим низкомолекулярным соединением, обладает иммуностимулирующим и иммунокоррегирующим действиями, не токсичен, полностью растворим в воде, биологических жидкостях, крови, лимфе и ликворе. В 1 мл ПСК содержится в зависимости от количества аминокислот в лиганде от 10 до 12 мг субстанции и 3-6 мкг селена.

Доза вводимого препарата зависит от клинического состояния больного, его возраста, веса, а также способа введения. Эффективная терапевтическая суточная доза для больного составляет от 6 мг до 150 мг активного вещества, которое вводят одномоментно или дробно.

Способ стимуляции и коррекции иммунной системы осуществляют следующим образом.

Полученный препарат ПСК представляет собой раствор активного вещества в 60% - 90% спирте, 1 мл которого содержит 10-12 мг лекарственной субстанции. ПСК вводят перорально, внутримышечно, внутривенно, внутриартериально, а также наружно в виде суспензии в масляном растворе или в виде мази с масляно-спиртовым наполнителем.

При пероральном введении необходимую дозу рассчитывают следующим образом:
В 20 каплях раствора содержится 10-12 мг лекарственной субстанции;
В 10 каплях(1/2 мл) содержится 5-6 мг препарата;
В 5 каплях(1/4 мл) содержится 2,5-3 мг препарата;
В 3 каплях(1/7 мл) содержится 1,5-1,7 мг препарата.

При внутримышечном, внутривенном или внутриартериальном введении препарат растворяют в физиологическом растворе для лучшей диссоциации в соотношении 1:10 при использовании 60% спирта или 1:15 - при 90% спирте.

Например, детям до 6 лет при клинической патологии средней степени тяжести препарат вводят однократно в виде инъекции от 0,1 мл до 0,5 мл в день, при тяжелой степени патологии указанную дозу вводят два раза в день. При проведении интенсивной терапии препарат вводят внутримышечно или внутривенно(внутриартериально) по 1,0 -2,0 мл соответственно с добавлением 10 или 20 мл физиологического раствора. В случае перорального введения в зависимости от возраста, веса и степени поражения - от 0,5 мл до 3,0 мл, причем препарат растворяют в 1/3 стакана кипяченой слегка теплой воды(36-38^o C).

Длительность лечения может колебаться от 1 до 3 месяцев. В случае тяжело протекающей патологии курс лечения повторяют с интервалом 1-2 месяца до выраженного клинического эффекта. В период проведения лечения контролируют иммунологический статус больного по развернутой клинической формуле крови и иммунограмме.

Конкретный пример реализации способа.

Больной П.В.В. 32 лет поступил в Киевский медицинский институт (История болезни 11704 от 1994 года) с диагнозом: посттравматическая сегментарная миелопатия с синдромом нарушения функций нижне-шейного отдела спинного мозга.

Считает себя больным с 1989 года, кода после травмы верхнего шейного отдела позвоночника стал отмечать слабость в правой кисти. Слабость нарастала, и в 1992 г. он, будучи военнослужащим, проходил курсы реабилитации в различных медицинских учреждениях. 18/05/1992 г. был освидетельствован военно-врачебной комиссией; выставлен диагноз "сирингомиелии шейного утолщения с преимущественным поражением передних рогов спинного мозга и выраженным верхним вялом парапарезом, нарушением функции обеих кистей".

Объективно в неврологическом статусе: карпорадиальные рефлексы снижены с обеих сторон, больше справа, снижены рефлексы с двуглавых мышц, больше справа. Гипотрофия мышц правого предплечья и межкостных мышц кистей с двух сторон. Снижена мышечная сила в дистальных отделах верхних конечностях: справа 1,0-1,5 балла, слева 2,5-3,0 балла. Сухожильные рефлексы с рук D > S. Чувствительных расстройств не выявлено. Гипестезия в зоне нейродерматомов Д1-Д2, фибриллярные подергивания в области мышц плечевого пояса с обеих сторон.

Кожные покровы в области обеих кистей сухие, холодные на ощупь. При осциллографии выявлена умеренная дистония сосудов рук с гипертонусом с обеих сторон, при ортопробе резкое повышение тонуса с затруднением венозного оттока. Была проведена комплексная лечебная терапия - витамины группы Е, В, прозерин, фосфаден, пантоган, АТФ, актовегин, лидаза. Проведенное лечение ожидаемого эффекта не дало. Больной был комиссован и признан МСЭК (акт - 154469) инвалидом 2-й группы.

В институте больному проведена ядерная магнитная резонансная томография шейного отдела позвоночника и спинного мозга. Было обнаружено снижение высоты межпозвоночных дисков С6-Т1, уменьшение диаметра нижней части шейного утолщения спинного мозга, сужение суборахоидального пространства спинного мозга на уровне позвонков С5-Д1. К этому времени четко развилась симптоматика поражения мышц предплечья правой кисти (область иннервации сегментов С7-Т1) и выраженная гипертрофия мышц предплечья и левой кисти (сегментов С8-Т1). Сила мышц в дистальных отделах правой руки 3 балла, левой 1 балл. При этом иммунограмма показала до лечения: Т-лимфоциты CD3 - 52, Т - хелперы CD4-33, Т-супрессоры CD8-30. Анализ крови: лейкоцитов - 7370, эритроциты - 4790000, гемоглобин - 145, эозинофилы - 4, палочкоядерные - 8, моноциты - 8, лимфоциты - 16, сегментоядерные - 64, СОЭ-17 мм/ч, цветной показатель - 0,9.

С согласия больного и его родственников проходит периодически курсы лечения с применением протеоселенового препарата внутримышечно по определенной схеме из расчета 1,0 мл препарата на 10 мл физраствора 1 раз в день в течение 80 дней. За 3 года проведено 6 курсов лечения по вышеуказанной схеме.

После проведенного лечения: сила мышц предплечья левой руки 5 баллов, кисти левой руки 4,5 балла. В левой кисти отмечается незначительная гипотрофия мышц возвышения мизинца и некоторая гипотрофия первой межкостной мышцы. В правой руке сила мышц предплечья 3,5-4,0 балла, кисти 1,5-2,0 балла. Улучшилось кровообращение обеих рук и кистей, осциллографически отмечается нормальная амплитуда кровенаполнения, фибриллярных подергиваний в мышцах обеих рук нет.

В связи с выраженным клиническим эффектом больной был переведен на 3-ю группу инвалидности. МСЭК, акт N032903 от 24/11/98 г.

Иммунограмма в конце лечения: Т-лимфоциты CD3-72, Т-хелперы CD4-44, Т-супрессоры CD8-28. Анализ крови: лейкоцитов - 9000, эритроциты - 3280000, гемоглобин - 109, эозинофилы - 2, палочкоядерные - 2, моноциты - 16, лимфоциты - 17, сегментоядерные - 63, СОЭ-5 мм/ч, цветной показатель - 0,9.

Т. О. можно заключить, что активная стимуляция клеточного иммунитета у данного больного привела к восстановлению микроциркуляторного русла в шейном отделе спинного мозга.

С помощью предложенного способа проведено лечение 24 больных, у которых иммунологическая недостаточность была обусловлена преимущественно инфекционной и опухолевой патологией. Из них 8 больных после тяжелой инфекции и у 5 больных несостоятельность иммунной системы развилась на фоне хронических заболеваний различного генеза.

При исследовании показателей иммунограмм этих больных до и через 1 месяц после лечения были получены следующие значения (см. таблицу 1).

Как видно из представленной таблицы, в процессе лечения значительно(достоверно) увеличивается количество Т-хелперов и Т киллеров и уменьшается количество супрессоров.

На основании проведенных исследований четко установлены следующие факторы действия ПСК:
Специфическая регуляция иммунобиологической активности с активацией всех компонентов клеточного иммунитета и тканевого метаболизма;
Антиокислительное тканевое воздействие;
Улучшение адаптационно-трофических процессов и микроциркуляции.

Таким образом, ПСК является эффективным препаратом для коррекции нарушений иммунной системы при различных патологических процессах; обеспечивает энергетическую стимуляцию клеток, нормализацию функции микроциркуляторного русла, что приводит к восстановлению нормальной структуры ткани человека и адекватных метаболических энергетических процессов.

Изобретение относится к области медицины и касается иммунокоррегирующего средства и способа иммунокоррекции при лечении различных заболеваний, сопровождающихся расстройствами функций иммунной системы. Изобретение состоит в том, что иммунокоррегирующее средство представляет собой протеоселеновый комплекс (ПСК), включающий органический низкомолекулярный компонент, полученный из протеинсодержащего растительного сырья путем экстракции спиртом, или эфиром, или димексидом с последующим высушиванием экстракта и растворением в 60-90% спирте, и ионизированную органическую соль селена из расчета 3-6 мкг на 1 мл раствора, смесь выдерживают в электромагнитном синусоидальном высокочастотном поле с частотой 20-30 МГц. Способ иммунокоррекции заключается в ведении ПСК в суточной дозе 6-150 мг. Изобретение эффективно для коррекции нарушений иммунной системы при различных патологических процессах, обеспечивает энергетическую стимуляцию клеток, осуществляет нормализацию функции микроциркуляторного русла, что приводит к восстановлению естественной структуры тканей тела человека и адекватных метаболических энергетических процессов. 2 с. и 13 з.п.ф-лы, 1 табл.

1. Иммунокоррегирующее средство на основе селена, отличающееся тем, что оно представляет собой протеоселеновый комплекс, включающий органический низкомолекулярный компонент, полученный из протеинсодержащего растительного сырья путем экстракции органическими растворителями с последующим высушиванием субстанции и растворением в 60 и 90% спирте, и органическую соль селена, выдержанный в электромагнитном синусоидальном высокочастотном поле 20 - 30 МГц. 2. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве протеинсодержащего сырья используют массу злаковых, и/или бобовых растений, и/или листья кукурузы. 3. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит 15 основных аминокислот, из которых 11,5% аланин, 24,0% лейцин, 10,5% пролин и 27,0% глютаминовая кислота. 4. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит органическую соль селена в виде ионизированных ионов, получаемых при электролизе селеномочевины из расчета 3 - 6 мкг на 1 мл органического компонента. 5. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что 1 мл раствора протеоселенового комплекса содержит 10 - 12 мг субстанции и 3 - 6 мкг селена. 6. Иммунокоррегирующее средство по любому из пп.1 - 5, отличающееся тем, что оно предназначено для перорального введения. 7. Иммунокоррегирующее средство по любому из пп.1 и 3 - 5, отличающееся тем, что оно предназначено для парэнтерального введения. 8. Иммунокоррегирующее средство по любому из пп.1 и 3 - 5, отличающееся тем, что оно предназначено для наружного использования в виде суспензии или мази. 9. Способ иммунокоррекции путем введения лекарственного средства, содержащего селен, отличающийся тем, что вводят лекарственное средство по пп.1 - 5 в эффективном количестве. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что суточная доза протеоселенового комплекса составляет 6 - 150 мг. 11. Способ по пп.9 и 10, отличающийся тем, что суточную дозу вводят одномоментно или дробно. 12. Способ по пп.9 - 11, отличающийся тем, что протеоселеновый комплекс вводят перорально, парэнтерально или наружно. 13. Способ по п.12, отличающийся тем, что при парэнтеральном введении протеоселеновый комплекс растворяют в физиологическом растворе в соотношении 1 : 10 - 1 : 15. 14. Способ по пп.9 и 10, отличающийся тем, что продолжительность курса лечения составляет 1 - 3 месяца. 15. Способ по пп.9 - 13, отличающийся тем, что при тяжелом протекании патологического процесса курс лечения повторяют с интервалом 1 - 2 месяца до выраженного клинического эффекта.