КОНЦЕНТРАТ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКОГО, ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА Российский патент 2002 года по МПК A61K35/74 

Изобретение относится к медицине, в частности к производству промежуточного продукта - концентрата для получения биологических препаратов микробного происхождения, обладающих противоаллергическими и противовоспалительными свойствами.

В патенте 2098109, 1961 г. описано противоаллергическое противовоспалительное средство и способ его получения. Как показали результаты проведенной дальнейшей работы в данной области, на определенной стадии изготовления указанного средства есть возможность получить промежуточный продукт - концентрат, который может изготовляться одним производителем, наиболее компетентным в этой области, тогда как конечный - другим производителем.

Кроме того, проведенные исследования дали возможность получить концентрат с теми характеристиками, которые при дальнейшей его обработке создали условия для получения более эффективного конечного продукта, при той же биологической активности и том же содержании белка.

Авторами не выявлен источник информации, в котором было бы описано средство того же назначения - концентрат для получения противоаллергического противовоспалительного средства.

Назначение заявляемого изобретения определяется его названием и при его осуществлении это назначение реализуется. При реализации изобретения, как уже отмечалось, получается конечный продукт, обладающий повышенной эффективностью, а также появляется возможность привлекать нескольких производителей для его поэтапного изготовления.

Существенные признаки, влияющие на реализацию предлагаемого изобретения и на достижение технического результата - это концентрат для получения противоаллергического противовоспалительного средства, полученный из штамма Staphylococcus aureus C2 ГИСК 222, предварительно прошедшего термофильную стадию развития, обладающий биологической активностью по индексу устранения воспалительной реакции не менее 19% и содержащий белок в количестве, 0,5-1,0 мг/мл и липиды в количестве от 1 до 7 мг/мл.

При этом указанными липидами могут быть как отдельные группы липидов, в частности триглицериды, составляющие 30-70% от всех липидов, полярные липиды в количестве от 5 до 30%, воска 0,5-5%, углеводороды 5-30%, так и жирные кислоты, например олеиновая кислота от 5 до 75%, стеариновая кислота от 1 до 10% и другие - всего 28 наименований жирных кислот.

В независимом пункте формулы изобретения один из признаков - липиды - дан в виде обобщенного понятия, в зависимом пункте дан в виде частного, и это объясняется следующим. Липиды - это группа органических жироподобных соединений и характерной особенностью их является многообразие, зависящее от количества, свойств и способов образования их молекул. Это, в свою очередь, определяется тем микроорганизмом, из которого получен продукт. В данном случае - это указанный выше штамм.

И при использовании указанного штамма и соблюдении всех операций в способе изготовления, качественный состав липидов будет одним и тем же, а количественный может колебаться только в определенных пределах. В данном случае в конечном продукте нами определено его количество - 0,38 мг/мл. Эта цифра была получена и в институте питания РАМН, что подтверждается результатами исследования липидов конечного продукта - "Рузам" (товарный знак). Указанные исследования даны в описании.

Все сказанное говорит о том, что включать в независимый пункт формулы такое количество липидов нецелесообразно. Приведенные данные исследования могут быть в некоторой степени недостоверны. Да и при известности штамма, из которого получен концентрат (и конечный продукт), есть возможность, по мнению авторов, осуществить изобретение, сущность которого характеризуется с использованием одного признака, выраженного общим понятием.

Количественное же содержание липидов так же, как и белка, существенно, так как они (как и остальные существенные признаки) позволяют изготовить конечный продукт - противоаллергическое противовоспалительное средство с необходимыми лечебными свойствами. Это подтверждается опытными данными.

Однако считаем целесообразным включить в зависимый пункт формулы некоторые липиды, которые в некоторых случаях могут быть предпочтительнее. Это наше мнение основано на длительной работе над указанной проблемой и на имеющихся опытных данных.

Так, в препарате "Рузам 1" содержание белка - 0,064 мг/мл, липидов в соответствии с патентом - 0,26 мг/мл, из них 14% полярных липидов и 38% триглицеридов, а в препарате "Рузам 2" содержание белка - 0,062 мг/мл, липидов - 0,48 мг/мл (полярных липидов 18%, триглицеридов 58%).

Лечение проведено препаратом 1 больному М. с круглогодичным ринитом и препаратом 2 - больному К. с тем же диагнозом. Пол, возраст, длительность заболевания приблизительно одинаковы (см. табл.1).

В обоих случаях больные получили 10 инъекций "Рузама" на курс лечения. У больного М. Улучшение наступило лишь по окончании курса лечения (исчезли отек, зуд в носу, но заложенность носа осталась). У больного К. через 3 недели (после 3-й инъекции) все симптомы ринита исчезли и не возобновлялись после окончания курса лечения.

Пример 2. Больная Н. с атопическим дерматитом лечилась препаратом "Рузам 1". Эффект исчезновения зуда и покраснения кожи наступил лишь к 5-1 инъекции препарата "Рузам 1". У больной Ч. с атопическим дерматитом на фоне лечения препаратом "Рузам 2" улучшение наступило сразу после первой инъекции, все симптомы дерматита исчезли уже после 3-й инъекции препарата "Рузам 2".

Способ получения концентрата заключается в следующем. Мезофильную культуру золотистого стафилококка Staphylococcus aureus штамм С2 222 (депонирован в музее НИИ Стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов имени Н.А. Тарасовича), прошедшую термофильную стадию развития, культивируют на питательной среде, жидкой или содержащей агар, при 35-50^o в течение времени, обеспечивающего достаточный рост микроорганизма, обычно 18-24 ч, полученный микроорганизм отделяют от питательной среды, помещают в 0,5% раствор карболовой кислоты и обрабатывают при 90-100^o, в течение времени, обеспечивающего деструкцию микроорганизма, охлаждают полученную субстанцию до 20-22^oС и отфильтровывают от деструктурированного микроорганизма в течение времени 12-14 ч, обеспечивающего получение концентрата с количеством белка 0,5-1,0 мг/мл и липидов в количестве 1-7 мг/мл.

Для получения конечного продукта - средства противоаллергического и противовоспалительного действия указанный концентрат стандартизируют физиологическим раствором до получения необходимого количества белка и липидов (в конечном продукте), определяют биологическую активность путем нахождения индекса устранения воспалительной реакции и стерильно разливают в ампулы вместимостью 0,5 мл, используемые в медицинской практике для инъекций, или во флаконы вместимостью 10 мл для капель в нос, или во флаконы 50 мл для наружного применения.

Биологическую активность конечного продукта определяли следующим образом. Пяти белым беспородным мышам (19-21 г) однократно внутривенно вводят 0,5 мл средства, разведенного в 100 раз 0,9% раствором хлорида натрия для инъекций. Через 60 мин в подушечку задней лапки каждого животного субпланарно вводят 0,02 мл водного раствора конканвалина А, содержащего 5 мг/мл. В контрлатеральную конечность вводят 0,02 мл 0,9% раствора хлорида натрия для инъекций. Через 90 мин животных забивают декапитацией, конечности отделяют по коленному суставу и взвешивают на аналитических весах.

Для каждого животного вычисляют индекс реакции по формуле
ИР=(Р-Р_к)х100%/Р_к,
где Р - масса конечности животных в мг с введенным конканвалином А;
Рк - масса контрлатеральной конечности, мг, с введенным раствором натрия хлорида.

Описанный эксперимент повторяют три раза, вычисляют среднюю величину индекса реакции для опытной и контрольной групп животных.

Проведенные исследования показали, что при содержании в концентрате белка в количестве 0,648 мг/мл и липидов в количестве 4,5 мг/мл дальнейшие операции позволяют получить конечный продукт с заданными характеристиками, обладающий более эффективными свойствами.

Полученный продукт с заданными характеристиками позволил получить более высокий эффект от лечения в опытной группе пациентов по сравнению с контрольной (см. табл.2).

В двух сравниваемых группах было по 10 больных:
5 - с сезонным ринитом;
5 - с атопическим дерматитом в каждой.

В известном противоаллергическом противовоспалительном средстве также содержатся липиды, но авторами в то время не была выявлена их существенность и, следовательно, влияние на процесс лечения. Да и количественное их содержание не определялось и не регламентировалось так же, как не определялось и не регулировалось количественное содержание белка на стадии фильтрации от деструктурированных остатков биомассы, т.е. не была выявлена необходимость в получении промежуточного продукта, который позволил бы получить более эффективный конечный продукт.

Изобретение относится к медицине и касается концентрата для получения противоаллергического, противовоспалительного средства. Предложен концентрат для получения противоаллергического противовоспалительного средства, полученного из Staphylococcus aurens C2 штамма ГИСК 222, прошедшего термофильную стадию развития и обработку карболовой кислотой, обеспечивающей деструкцию микроорганизмов, и представляющего собой продукт с количеством белка 0,5-1,0 мг/мл и липидов 1-7 мг/мл. Преимущество изобретения: получен полуфабрикат, устойчивый при хранении, из которого в любой момент может быть получен целевой продукт. 1 з.п.ф-лы, 2 табл.

1. Концентрат для получения противоаллергического противовоспалительного средства, обладающего биологической активностью, определенной по индексу устранения воспалительной реакции не менее 19%, характеризующийся тем, что он получен от Staphylococcus aureus С2, штамм ГИСК 222, прошедшего термофильную стадию развития и обработку карболовой кислотой, обеспечивающей деструкцию микроорганизмов, и представляет собой продукт с количеством белка 0,5-1,0 мг/мл и липидов в количестве 1-7 мг/мл. 2. Концентрат по п. 1, отличающийся тем, что липиды представлены короткоцепочечными липидами - лауриновой кислотой, средне-цепочечными - меристиновой и изомеристиновой кислотами и длинно-цепочечными - олеиновой и стеариновой кислотами.