ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО (ВАРИАНТЫ), ШТАММ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS NKJC, ШТАММ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS JCH, ШТАММ LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS KAA Российский патент 2010 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 C12P37/00 

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности и может быть использовано в производстве и использовании медицинских иммунобиологических препаратов и биологически активных добавок к пище.

Известно противоаллергическое действие молочнокислых бактерий, преимущественно лактобацилл (Weid Т., Ibnou-Zekri N., Pfeifer A. Novel probiotics for the management of allergic inflammation. // Digestive and liver disease: official journal of the Italian Society of Gastroenterology and the Italian Association for the Study of the Liver. - 2002. - Vol.34, № 2. - P. 25-28), которое обусловлено снижением уровня специфических IgE в сыворотке крови (Peng S., Lin J.Y., Lin M.Y. Antiallergic effect of milk fermented with lactic acid bacteria in a murine animal model. // Journal of agricultural and food chemistry. - 2007. - Vol.55, № 13. - P.5092-5096) при стимуляции лактобациллами синтеза регуляторных цитокинов: штаммы Lactobacillus plantarum CCRC 12944, Lactobacillus acidophilus CCRC 14079, Lactobacillus rhamnosus CCRC 10940, Lactobacillus paracasei subsp. paracasei CCRC 14023, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus CCRC 12297, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus CCRC 14007 и Lactobacillus deldrueckii subsp. bulgaricus CCRC 14069 стимулировали синтез лимфоцитами интерферона-γ (US патент, номер публикации 2004/0047849 Al, C12N 1/20); штамм Lactobacillus paracasei KW 3110 стимулировал синтез лимфоцитами интерлейкина-12 и интерлейкина-4 (ЕР патент № 1634600 A1, A61K 35/74, А61Р 11/02, 11/06, 17/00, 27/02, 37/08, A23L 1/30, C12N 1/20); синтез спленоцитами и мононуклеарами периферической крови интерферона-γ стимулировал штамм Lactobacillus paracasei GM-080 (US патент, номер публикации 2005/0214271 A1; патент US № 6994848 В2, A61K 45/00, C12N 1/20).

Однако штаммы разных видов лактобацилл, например: Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus delbrueckii, - способны продуцировать гистамин (Garai G., Dueñas M.T., Irastorza A., Moreno-Arribas M.V. Biogenic amine production by lactic acid bacteria isolated from cider. // Letters in applied microbiology. - 2007. - Vol.45, № 5. - P.473-478; Azcarate-Peril M.A., Altermann E., Hoover-Fitzula R.L., Cano R.J., Klaenhammer T.R. Identification and inactivation of genetic loci involved with Lactobacillus acidophilus acid tolerance. // Applied and environmental microbiology. - 2004. -Vol.70, № 9. - P.5315-5322; Leuschner R.G., Kurihara R., Hammes W.P. Effect of enhanced proteolysis on formation of biogenic amines by lactobacilli during Gouda cheese ripening. // International journal of food microbiology. - 1998. - Vol.20, № 44. - P.15-20). Этот недостаток ограничивает показания к применению средств, содержащих лактобациллы, и препятствует использованию лактобацилл в качестве ингредиентов композиций, перспективных для профилактики и лечения заболеваний, в развитии которых имеет значение уровень гистамина в организме.

Ранее не было известно, что производственные штаммы Lactobacillus acidophilus меньше других видов лактобацилл продуцируют гистамин. Кроме того, штаммы Lactobacillus acidophilus способны подвергать гистамин гидролитическому дезаминированию с помощью фермента диамино-оксидазы (гистаминазы). При этом соотношение уровня продукции гистамина и уровня его дезаминирования лактобациллами зависит от ряда факторов, в том числе от кислотности, ионного состава и других показателей среды культивирования.

Известны иммунобиологические средства и закваски ацидофильных культур на основе консорциума штаммов Lactobacillus acidophilus 100 аш, NK1 и К₃Ш₂₄, в том числе содержащие живые или убитые микробные клетки и продукты метаболизма в среде культивирования, которые являются наиболее близкими аналогами заявляемого иммунобиологического средства (авторское свидетельство SU 1004471, А23С 9/123, C12N 1/20; патент RU № 2123344, А61К 35/74; Ворошилина Н.Н. Микробы вида Lactobacillus acidophilus как основа фармакопейных форм бактерийных препаратов. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. - Москва, 1982. - 22 с.).

Недостатком указанного консорциума штаммов лактобацилл является то, что он не обладает достаточно стабильным наличием критериев противоаллергического действия, что соответствует его способности более чем в 1,5 раза повышать содержание гистамина в среде культивирования.

Задачей заявляемого изобретения является повышение эффективности противоаллергического действия иммунобиологических средств на основе лактобацилл.

Задача решена тем, что варианты иммунобиологического средства содержат консорциум микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus, в том числе включающий штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, коллекционный № 220, штамм Lactobacillus acidophilus JCH, коллекционный № 221, и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, коллекционный № 223. Микроорганизмы данных штаммов в консорциуме дополняют, особенно при культивировании, оригинальные сочетания свойств друг друга, обеспечивающие наличие критериев противоаллергического действия консорциума: уникальной биохимической активности с особенностями регуляции уровня гистамина, продукцией лектинов, биосурфактантов, антагонистической активности в отношении микроорганизмов, интенсивно продуцирующих гистамин, и устойчивости к антибиотикам. Поэтому заявляемые варианты иммунобиологического средства являются перспективной основой вариантов иммунобиологического средства, эффективных при аллергических заболеваниях, псевдоаллергических заболеваниях без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника.

Штамм Lactobacillus acidophilus NKJC получен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ имени Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора под № 220 и характеризуется следующими свойствами.

1. Морфологические свойства.

Прямые, неподвижные, бесспоровые, грамположительные палочки с закругленными краями, размером 5-10 мкм, располагающиеся в мазке единично или в виде цепочек по две-четыре клетки.

2. Культуральные свойства.

Микроаэрофил, оптимальные условия для культивирования - анаэробные. Температура культивирования - 38-40°С. На полужидких средах вырастает в течение 20-22 часов, на агаризованных - 48 часов.

В среды для культивирования для стабилизации свойств штамма можно дополнительно добавлять источники гистамина, ионов Сu¹⁺, Сu²⁺, Co²⁺, Ni²⁺, глюкозы, галактозы, фруктозы, лактозы, маннозы, фракций казеина или гидролизатов фракций казеина, жидкое масло, которое может быть выбрано из ряда: растительное масло, жир рыб, жир морских млекопитающих, минеральное масло, синтетическое масло или их сочетания.

Сквашивает молоко с образованием плотного сметанообразного сгустка.

При культивировании на полужидких средах происходит равномерное помутнение среды по всему ее объему. Единичные колонии при выращивании в течение 18-24 часов имеют вид шариков диаметром 2-3 мм или комет длиной 0,7 мм. При выращивании в течение 18-24 часов число КОЕ/мл лактобацилл составляет 10⁸-10⁹.

На агаре с гидролизованным молоком образуют темные локонообразные колонии на поверхности и в виде «паучков» в глубине. При выращивании на поверхности агаризованных сред образуют полупрозрачные морщинистые мелкие колонии с неровными краями. Диаметр колонии 1-2 мм. Время культивирования 48 часов.

3. Биохимическая активность.

Штамм гомоферментативен. Каталазу не продуцирует, нитрат не редуцирует. Желатину не разжижает. Штамм ферментирует без образования газа глюкозу, лактозу, галактозу, маннозу, декстрозу, фруктозу, трегалозу, N-ацетилглюкозамин, ликсозу, маннит, замедленно ферментирует раффинозу, арабинозу, ксилозу. Штамм не повышает содержание гистамина в среде культивирования. Продуцирует лектины, связывающие в гликоконъюгатах остатки N-ацетил-D-галактозамина с α-связью (GalNAc-α-), D-маннозы с α-связью (Man-α-) и D-маннозы-6-фосфата с α-связью (Man-6P-α-). Продуцирует биосурфактанты, в том числе липидосодержащие и пенообразующие вещества.

4. Активность кислотообразования.

В процессе культивирования на производственных средах образует молочную кислоту, закисляя среду культивирования до рН 3,5-4,2, 250°Т.

1-3% закваски за 6-7 часов снижает рН молока до 3,8-4,2 за 10 часов. Протеолитическая активность 35,4 мг% по сумме трех аминокислот в пересчете на тирозин. Значение титруемой кислотности при этом составляет 200-220°Т.

5. Антагонистическая активность.

Штамм антагонистически активен в отношении тест-культур (Shigella flexneri-2 штамма, Shigella sonnei, энтеропатогенной Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis): зона угнетения роста тест-штаммов должна быть не менее 20 мм.

6. Устойчивость к антибиотикам.

Штамм высоко устойчив к полимиксину, пефлоксацину, налидиксовой кислоте, устойчив к рифампицину, гентамицину, амикацину, промежуточно устойчив к клиндамицину, неомицину, канамицину, линкомицину, ципрофлоксацину и ломефлоксацину.

7. Содержание гуанина и цитозина в ДНК составляет 36 мол.%.

8. Генотипирование.

ПЦР-анализ подтвердил принадлежность к виду Lactobacillus acidophilus.

Штамм Lactobacillus acidophilus JCH получен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ имени Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора под №221 и характеризуется следующими свойствами.

1. Морфологические свойства.

Прямые, крупные, длинные, неподвижные, бесспоровые, грамположительные палочки размером 5-10 мкм, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек по две-четыре клетки.

2. Культуральные свойства.

Микроаэрофил, оптимальные условия для культивирования - анаэробные. Температура культивирования - 38-40°С. На полужидких средах вырастает в течение 20-24 часов, на агаризованных - 48 часов.

В среды для культивирования для стабилизации свойств штамма можно дополнительно добавлять источники гистамина, ионов Сu¹⁺, Сu²⁺, Со²⁺, Ni²⁺, глюкозы, галактозы, фруктозы, лактозы, маннозы, фракций казеина или гидролизатов фракций казеина, жидкое масло, которое может быть выбрано из ряда: растительное масло, жир рыб, жир морских млекопитающих, минеральное масло, синтетическое масло или их сочетания.

Сквашивает молоко с образованием плотного ровного сгустка.

На полужидких средах растут равномерно по всему объему, без зоны аэробиоза. Единичные колонии имеют форму шариков диаметром 1-2 мм или комет-елочек длиной 0,7-1,2 см. При выращивании на полужидких средах и в течение 18-24 часов число КОЕ/мл лактобацилл достигает 10⁸-10⁹.

На поверхности агаризованной МРС в анаэробных условиях через 24 часа роста образуются полупрозрачные шероховатые колонии с неровными краями. Диаметр колонии 2-4 мм. На агаре с гидролизованным молоком образуют темные локонообразные колонии на поверхности и в виде «паучков» в глубине. Время культивирования 24-48 часов.

3. Биохимическая активность.

Штамм гомоферментативен. Каталазу не продуцирует. Желатину не разжижает. Ферментирует без образования газа глюкозу, галактозу, фруктозу, маннозу, N-ацетилглюкозамин, лактозу, трегалозу, замедленно ферментирует арабинозу, ксилозу. Штамм не повышает содержание гистамина в среде культивирования. Продуцирует лектины (преимущественно кислые лектины), связывающие в гликоконъюгатах остатки D-маннозы с α-связью (Man-α-), D-маннозы-6-фосфата с α-связью (Man-6Р-α-) и N-ацетил-D-галактозамина с α-связью (GalNAc-α-). Продуцирует биосурфактанты, в том числе липидосодержащие и пенообразующие вещества.

4. Активность кислотообразования.

В процессе культивирования на производственных средах рН 3,0-3,5. Значение титруемой кислотности при выращивании в стерильном молоке через 24 часа составляет 195°Т, на МРС среде - до 200°Т.

5. Антагонистическая активность.

Штамм антагонистически активен в отношении тест-культур (Shigella flexneri-2 штамма, Shigella sonnei, энтеропатогенной Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis): зона угнетения роста тест-штаммов должна быть не менее 20 мм.

6. Устойчивость к антибиотикам.

Штамм высокоустойчив к канамицину, устойчив к амикацину, промежуточно устойчив к неомицину, линкомицину, клиндамицину, стрептомицину.

7. Содержание гуанина и цитозина в ДНК составляет 36 мол.%.

8. Генотипирование.

ПЦР-анализ подтвердил принадлежность к виду Lactobacillus acidophilus.

Штамм Lactobacillus acidophilus KAA получен из содержимого кишечника здорового взрослого человека, депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ имени Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора под №223 и характеризуется следующими свойствами.

1. Морфологические свойства.

Прямые, крупные, длинные, неподвижные, бесспоровые, грамположительные палочки размером 3-14×1,0-1,5 мкм, располагающиеся поодиночке или в виде цепочек по две-четыре клетки.

2. Культуральные свойства.

Микроаэрофил, оптимальные условия для культивирования - анаэробные. Температура культивирования - 38-40°С. На полужидких средах вырастает в течение 20-24 часов, на агаризованных - 48 часов.

В среды для культивирования для стабилизации свойств штамма можно дополнительно добавлять источники гистамина, ионов Сu¹⁺, Сu²⁺, Со²⁺ Ni²⁺, глюкозы, галактозы, фруктозы, лактозы, маннозы, фракций казеина или гидролизатов фракций казеина, жидкое масло, которое может быть выбрано из ряда: растительное масло, жир рыб, жир морских млекопитающих, минеральное масло, синтетическое масло или их сочетания.

Сквашивает молоко с образованием плотного ровного сгустка. На полужидких средах растут равномерно по всему объему, без зоны аэробиоза. Единичные колонии имеют форму шариков диаметром 1-2 мм или комет-елочек длиной 0,7-1,2 см. При выращивании в течение 18-24 часов число КОЕ/мл составляет 10⁸.

На поверхности агаризованной МРС в анаэробных условиях через 24 часа роста образуются плотные однородные белые, выпуклые, круглые колонии с ровными краями. Диаметр колонии 2-4 мм. На агаре с гидролизованным молоком образуют темные локонообразные колонии на поверхности и в виде «паучков» в глубине. Время культивирования 24-48 часов.

3. Биохимическая активность.

Штамм гомоферментативен. Каталазу не продуцирует. Желатину не разжижает. Ферментирует без образования газа глюкозу, арабинозу, рибозу, галактозу, фруктозу, маннозу, сорбозу, манит, сорбитол, эскулин, целлобиозу, сахарозу, трегалозу, мелецитозу, туранозу, тагатозу, L-арабит, замедленно ферментирует N-ацетилглюкозамин, амигдалин, арбутин, мальтозу, лактозу, мелибиозу, инулин, гентиобиозу, ликсозу, калия глюконат. Штамм повышает содержание гистамина в среде культивирования не более чем в 1,5 раза. Продуцирует пектины (преимущественно кислые лектины), связывающие в гликоконъюгатах остатки D-маннозы с α-связью (Man-α-), D-маннозы-6-фосфата с α-связью (Man-6Р-α-) и N-ацетил-D-галактозамина с α-связью (GalNAc-α-). Продуцирует биофлокулянты, биосурфактанты, в том числе пенообразующие вещества.

4. Активность кислотообразования.

В процессе культивирования на производственных средах рН 3,5-4,2. Значение титруемой кислотности при выращивании в стерильном молоке через 24 часа составляет 198°Т, на жидкой МРС - 200°Т.

5. Антагонистическая активность.

Штамм антагонистически активен в отношении тест-культур (Shigella flexneri-2 штамма, Shigella sonnei, энтеропатогенной Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis): зона угнетения роста тест-штаммов должна быть не менее 20 мм.

6. Устойчивость к антибиотикам.

Штамм устойчив к гентамицину, амикацину, промежуточно устойчив к бензилпенициллину, стрептомицину, неомицину, канамицину, тетрациклину.

7. Содержание гуанина и цитозина в ДНК составляет 36 мол.%.

8. Генотипирование.

ПЦР-анализ подтвердил принадлежность к виду Lactobacillus acidophilus.

Подобраны соотношение штаммов в консорциуме, ингредиенты сред для культивирования, целевые добавки, в сочетании стабилизирующие уникальную биохимическую активность микроорганизмов заявляемых штаммов лактобацилл и содержащих их консорциума.

Варианты иммунобиологического противоаллергического средства содержат консорциум микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus, включающий штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, в виде биомассы консорциума штаммов Lactobacillus acidophilus в среде культивирования при соотношении штаммов в КОЕ 2:1:2 в общем количестве l0⁴-10¹⁰ КОЕ/мл или в виде супернатанта, полученного при культивировании микроорганизмов штаммов консорциума. Среда культивирования может быть выбрана из ряда: казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл, сквашенное молоко, имеющее жирность 0,5-1,5% и рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное молоко, имеющее рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное, выпаренное на 10-20% молоко, имеющее рН 5,0-6,8, гидролизатно-молочная среда после культивирования лактобацилл или их смеси. Заявляемое средство может дополнительно содержать целевые добавки в количестве 0,01-95,0 мас.% и быть выполнено в форме суспензии или крема, или мази, или пасты, или маски. Заявляемое средство может содержать целевые добавки, выбранные из ряда: казеин, желатин, агар, глицерин, яичный желток, яичный белок, пектин, целлюлоза, производные целлюлозы, бентонит, каолин, аэросил, меди сульфат, меди глюконат, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, настой ромашки, воск эмульсионный, комбижир, ланолин, спермацет, вазелин, церезин, вазелиновое масло, искусственный вазелин, пальмитин, гидрированный жир, переэтирифицированный жир, кондитерский жир, пальмовый олеин, пальмовый стеарин, масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное, масло касторовое, полиэтиленоксид, нипагин, нипазол, микрокаре РМ5, микрокаре IT или их смеси. Заявляемое средство может быть использовано при профилактике и лечении дефектов кожи, дерматита, аллергического заболевания, псевдоаллергического заболевания без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника.

Заявляемые варианты иммунобиологического противоаллергического средства являются новыми и в литературе не описаны.

Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение эффективности противоаллергического действия иммунобиологических средств на основе лактобацилл. Повышение эффективности противоаллергического действия при использовании заявляемого изобретения показано при наличии у пациентов аллергического заболевания, псевдоаллергического заболевания без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих эффективность противоаллергического действия вариантов заявляемого средства на основе консорциума новых штаммов Lactobacillus acidophilus NKJC, JCH и КАА. При этом приведенные в примерах комбинации ингредиентов вариантов заявляемого средства показывают конкретную реализацию заявляемого изобретения, но не ограничивают объем притязаний формулы заявляемого изобретения.

Пример 1. В двух группах больных с аллергической крапивницей, в каждой из которых было по 15 пациентов, проводилось сравнение эффективности противоаллергического действия иммунобиологические средства на основе консорциума штаммов Lactobacillus acidophilus 100 аш, NK1 и К₃Ш₂₄ (в первой группе пациентов) и варианта заявляемого иммунобиологического средства (во второй группе пациентов), содержащего биомассу консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus, включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, в среде их культивирования (в сквашенном обезжиренном молоке, имеющем рН 5,5), в общем количестве 10⁸ КОЕ/мл при их соотношении в КОЕ 2:1:2 соответственно, и целевые добавки (меди сульфат и экстракт ромашки) в общем количестве 2,0 мас.%. При этом заявляемое иммунобиологическое средство было выполнено в форме суспензии. При проведении исследования критерии наличия противоаллергического средства чаще регистрировались во второй группе пациентов (у 14 больных, 93,3% случаев), чем в первой группе (у 10 больных, 66,7% случаев).

Пример 2. Пациент Н., 24 года. Диагноз: аллергическая крапивница. При лечении пациента использовалось иммунобиологическое противоаллергическое средство - консорциум микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus, включающий штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, которое назначалось перорально 2 раза в сутки, в течение 5 дней по 5 доз (5×10⁷ КОЕ Lactobacillus acidophilus). После двух дней лечения было выявлено наличие критериев противоаллергического действия средства: полного разрешения уртикарий и отсутствия свежих высыпаний на коже.

Пример 3. Пациент О., 36 лет. Диагноз: аллергический дерматит, вызванный съеденной пищей, и дисбактериоз кишечника с высевом Staphylococcus aureus. При лечении пациента использовалось иммунобиологическое противоаллергическое средство, содержащее биомассу консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде их культивирования (казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл), включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, в общем количестве 10⁴ КОЕ/мл при соотношении штаммов в КОЕ 2:1:2, которое назначалось перорально 3 раза в сутки, в течение 14 дней по 5×10⁷ КОЕ Lactobacillus acidophilus. В результате лечения было выявлено наличие критериев противоаллергического и противоинфекционного действия средства: исчезновения зуда, разрешения высыпаний на коже, элиминации Staphylococcus aureus и коррекции микробиоценоза кишечника.

Пример 4. Пациент Ю., 28 лет. Диагноз: аллергический дерматит, вызванный съеденной пищей, и дисбактериоз кишечника с высевом Staphylococcus aureus. При лечении пациента использовалось иммунобиологическое противоаллергическое средство, содержащее биомассу консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде их культивирования (сквашенное обезжиренное молоко, имеющее рН 5,0), включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, в общем количестве 10⁸ КОЕ/мл при соотношении штаммов в КОЕ 2:1:2, которое назначалось перорально 3 раза в сутки, в течение 14 дней по 5×10⁷ КОЕ Lactobacillus acidophilus. В результате лечения было выявлено наличие критериев противоаллергического и противоинфекционного действия средства: исчезновения зуда, разрешения высыпаний на коже, элиминации Staphylococcus aureus и коррекции микробиоценоза кишечника.

Пример 5. Пациент Ф., 41 год. Диагноз: аллергический дерматит, вызванный съеденной пищей, и пиодермия с высевом Staphylococcus aureus. При лечении пациента использовалось иммунобиологическое противоаллергическое средство, содержащее биомассу консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде культивирования (казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл), включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, в общем количестве 10¹⁰ КОЕ/мл при соотношении штаммов в КОЕ 2:1:2 и целевые добавки (меди сульфат) в количестве 0,01 мас.% и выполненное в форме суспензии, которое назначалось перорально 2 раза в сутки, в течение 14 дней по 5×10⁷ КОЕ Lactobacillus acidophilus, а также иммунобиологическое противоаллергическое средство, содержащее супернатант, полученный при культивировании консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде их культивирования (казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл), включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus КАА, при соотношении штаммов в КОЕ 2:1:2, и целевые добавки (вода, глицерин, хитозан, воск эмульсионный, ланолин, масло оливковое, нипагин и нипазол) в количестве 60,0 мас.% и выполненное в форме крема, которое назначалось наружно на поверхность высыпаний 2 раза в сутки в течение 6 дней. В результате лечения было выявлено наличие критериев противоаллергического и противоинфекционного действия средства: исчезновения зуда, разрешения высыпаний на коже и элиминации Staphylococcus aureus.

Пример 6. Пациент С., 30 лет. Диагноз: острая крапивница (псевдоаллергическая), хронический тонзиллит в стадии обострения, носительство Staphylococcus aureus. При лечении пациента использовалось иммунобиологическое противоаллергическое средство, содержащее биомассу консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде их культивирования (казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл) в общем количестве 10¹⁰ КОЕ/мл, включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, штамм Lactobacillus acidophilus JCH и штамм Lactobacillus acidophilus KAA, при соотношении штаммов в КОЕ 2:1:2 и целевые добавки (меди сульфат, экстракт корня солодки, экстракт шиповника и настой ромашки) в количестве 95,0 мас.% и выполненное в форме суспензии, которое назначалось перорально 3 раза в сутки, в течение 10 дней по 5×10⁷ КОЕ Lactobacillus acidophilus. В результате лечения было выявлено наличие критериев противоаллергического и противоинфекционного действия средства: полного разрешения уртикарий, отсутствия свежих высыпаний на коже, элиминации Staphylococcus aureus, купирования обострения хронического тонзиллита в течение 3 дней (предыдущие обострения хронического тонзиллита у пациента продолжались в течение 7-10 дней).

Изобретение относится к биотехнологии и фармацевтической промышленности и может быть использовано в производстве и использовании медицинских иммунобиологических препаратов и биологически активных добавок к пище. Иммунобиологическое противоаллергическое средство содержит консорциум микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus, включающий штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, коллекционный №220, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, штамм Lactobacillus acidophilus JCH, коллекционный №221, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, и штамм Lactobacillus acidophilus KAA, коллекционный №223, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора. Средство содержит биомассу данного консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде культивирования или супернатант, полученный при культивировании консорциума микроорганизмов данных штаммов, а также целевые добавки. Средство выполнено в форме суспензии или крема, или мази, или пасты, или маски. Средство предназначено для использования при профилактике и лечении дефектов кожи, дерматита, аллергического заболевания, псевдоаллергического заболевания без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника. Изобретение обеспечивает повышение эффективности противоаллергического действия иммунобиологических средств на основе лактобацилл. 7 н. и 9 з.п. ф-лы.

1. Иммунобиологическое противоаллергическое средство, характеризующееся тем, что оно содержит консорциум микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus, включающий штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, коллекционный № 220, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, штамм Lactobacillus acidophilus JCH, коллекционный № 221, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, и штамм Lactobacillus acidophilus KAA, коллекционный № 223, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора.

2. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.1, отличающееся тем, что предназначено для использования при профилактике и лечении дефектов кожи, дерматита, аллергического заболевания, псевдоаллергического заболевания без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника.

3. Иммунобиологическое противоаллергическое средство, характеризующееся тем, что оно содержит биомассу консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде их культивирования, включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, коллекционный № 220, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, штамм Lactobacillus acidophilus JCH, коллекционный № 221, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, и штамм Lactobacillus acidophilus KAA, коллекционный № 223, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, в общем количестве 10⁴-10¹⁰ КОЕ/мл при их соотношении в КОЕ 2:1:2 соответственно.

4. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.3, отличающееся тем, что оно содержит среду культивирования, выбранную из ряда: казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл, сквашенное молоко, имеющее жирность 0,5-1,5% и рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное молоко, имеющее рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное, выпаренное на 10-20% молоко, имеющее рН 5,0-6,8, гидролизатно-молочная среда после культивирования лактобацилл или их смеси.

5. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.3, отличающееся тем, что оно предназначено для использования при профилактике и лечении дефектов кожи, дерматита, аллергического заболевания, псевдоаллергического заболевания без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника.

6. Иммунобиологическое противоаллергическое средство, характеризующееся тем, что оно содержит биомассу консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде их культивирования, включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, коллекционный № 220, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, штамм Lactobacillus acidophilus JCH, коллекционный № 221, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, и штамм Lactobacillus acidophilus KAA, коллекционный № 223 хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, в общем количестве 10⁴-10¹⁰ КОЕ/мл при их соотношении в КОЕ 2:1:2 соответственно и целевые добавки в количестве 0,01-95,0 мас.%, при этом оно выполнено в форме суспензии, или крема, или мази, или пасты, или маски.

7. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.6, отличающееся тем, что оно содержит среду культивирования, выбранную из ряда: казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл, сквашенное молоко, имеющее жирность 0,5-1,5% и рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное молоко, имеющее рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное, выпаренное на 10-20% молоко, имеющее рН 5,0-6,8, гидролизатно-молочная среда после культивирования лактобацилл или их смеси.

8. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.6, отличающееся тем, что оно содержит целевые добавки, выбранные из ряда: казеин, желатин, агар, глицерин, яичный желток, яичный белок, пектин, целлюлоза, производные целлюлозы, бентонит, каолин, аэросил, меди сульфат, меди глюконат, хинозол, хитозан, вода, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, настой ромашки, воск эмульсионный, комбижир, ланолин, спермацет, вазелин, церезин, вазелиновое масло, искусственный вазелин, пальмитин, гидрированный жир, переэтирифицированный жир, кондитерский жир, пальмовый олеин, пальмовый стеарин, масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное, масло касторовое, полиэтиленоксид, нипагин, нипазол, микрокаре РМ5, микрокаре IT или их смеси.

9. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.6, отличающееся тем, что оно предназначено для использования при профилактике и лечении дефектов кожи, дерматита, аллергического заболевания, псевдоаллергического заболевания без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника.

10. Иммунобиологическое противоаллергическое средство, характеризующееся тем, что оно содержит супернатант, полученный при культивировании консорциума микроорганизмов штаммов Lactobacillus acidophilus в среде их культивирования, включающего штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, коллекционный № 220, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, штамм Lactobacillus acidophilus JCH, коллекционный № 221, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, и штамм Lactobacillus acidophilus KAA, коллекционный № 223, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, при их соотношении в КОЕ 2:1:2 и целевые добавки в количестве 0,01-95,0 мас.%, при этом оно выполнено в форме суспензии, или крема, или мази, или пасты, или маски.

11. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.10, отличающееся тем, что оно содержит среду культивирования, выбранную из ряда: казеиново-дрожжевая среда после культивирования лактобацилл, сквашенное молоко, имеющее жирность 0,5-1,5% и рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное молоко, имеющее рН 5,0-6,8, сквашенное обезжиренное, выпаренное на 10-20% молоко, имеющее рН 5,0-6,8, гидролизатно-молочная среда после культивирования лактобацилл или их смеси.

12. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.10, отличающееся тем, что оно содержит целевые добавки, выбранные из ряда: казеин, желатин, агар, глицерин, яичный желток, яичный белок, пектин, целлюлоза, производные целлюлозы, бентонит, каолин, аэросил, меди сульфат, меди глюконат, хинозол, хитозан, вода, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, настой ромашки, воск эмульсионный, комбижир, ланолин, спермацет, вазелин, церезин, вазелиновое масло, искусственный вазелин, пальмитин, гидрированный жир, переэтерифицированный жир, кондитерский жир, пальмовый олеин, пальмовый стеарин, масло оливковое, масло персиковое, масло подсолнечное, масло касторовое, полиэтиленоксид, нипагин, нипазол, микрокаре РМ5, микрокаре IT или их смеси.

13. Иммунобиологическое противоаллергическое средство по п.10, отличающееся тем, что оно предназначено для использования при профилактике и лечении дефектов кожи, дерматита, аллергического заболевания, псевдоаллергического заболевания без сопутствующей патологии или в сочетании с заболеванием инфекционной этиологии, дисбактериозом кишечника.

14. Штамм Lactobacillus acidophilus NKJC, коллекционный номер № 220, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, используемый при приготовлении иммунобиологического противоаллергического средства.

15. Штамм Lactobacillus acidophilus JCH, коллекционный номер № 221, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, используемый при приготовлении иммунобиологического противоаллергического средства.

16. Штамм Lactobacillus acidophilus KAA, коллекционный номер № 223, хранится в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора, используемый при приготовлении иммунобиологического противоаллергического средства.