КОМБИНИРОВАННЫЙ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЙ ПРЕПАРАТ (РИЗОБУТОЛ) Российский патент 2003 года по МПК A61K31/7036 A61K31/133 A61K31/4409 A61K31/495 A61K9/20 A61P31/06 

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, конкретно к новому типу противотуберкулезных препаратов, содержащих набор лекарственных веществ в одной таблетке (капсуле), призванных в первую очередь преодолеть возможную резистентность возбудителя туберкулеза к лекарственным веществам у больного, упростить процедуру лечения и, таким образом, способствовать осуществлению курса лечения в полном объеме и, в конечном итоге, повысить эффективность лечения.

Обычный курс монотерапии туберкулеза состоит в назначении врачом рифампицина или изониазида. Предпочтительный курс сочетанной терапии состоит в назначении изониазида, рифампицина и пиразимида. В том случае, если возможна резистентность к изониазиду, обычно добавляют четвертое лекарство - этамбутол. Лекарства назначаются лечащим врачом, в дозах и соотношениях в зависимости от возраста, физиологических особенностей, характера течения болезни, а также, как ни парадоксально, наличия лекарственных препаратов в аптеках, что характерно даже для таких развитых стран, как США или Италия.

До последнего времени изыскания в области терапии туберкулеза шли по направлению поиска новых действующих начал и их комбинаций с известными лекарственными средствами (см., например, Евр.пат. 0650728, Пат. США 5399558, Евр. пат. 0398165, Пат. РСТ WO 95/13807), либо создания новых лекарственных форм для таких известных лекарственных средств, как изониазид, рифампицин, этамбутол (см. , например, WO 88/06038, Пат. США 5811088, Пат. России 93015116, 2143900, 94041109, 98100213).

Однако они в своем большинстве не касались комбинированных лекарственных препаратов, так как в них не предполагается обязательного присутствия всех действующих компонентов в одной таблетке или иной лекарственной форме. Таким образом они предназначены, как правило, для моно- или сочетанной терапии.

В настоящее время Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) рекомендует отказ от моно- и от сочетанной терапии и указывает на необходимость создания новых комбинированных противотуберкулезных препаратов, содержащих специально подобранный набор лекарственных веществ с фиксированными дозами в одной таблетке, обеспечивающих оптимальный терапевтический эффект (Consilium Medicum 1999, т.2, с.170-171. Ремедиум, 2000, 7,8)
Необходимость такой стратегии диктуется тем, что сочетанная терапия в настоящее время за счет увеличения процента больных с резистентными штаммами включает три и более лекарств, курс лечения составляет в среднем 6-12 месяцев. Диагноз клинически устанавливается в течение 3-6 недель, на выявление первичной резистентности (то есть неэффективности первоначально установленного курса лечения) требуется также 3-6 недель.

Как следствие вышеуказанного, для ВИЧ-больных, принимающих сочетанную терапию, часто не удается своевременно осуществить тесты по подбору эффективного курса лечения, так как они умирают от туберкулеза через 4-16 недель после клинических проявлений этого заболевания.

Как правило, больные туберкулезом из-за сложностей и длительности подбора эффективных лекарств, а также самого курса терапии, осуществляют его либо не регулярно, либо не доводят до конца, что служит причиной возврата заболевания, появления вторичной резистентности к лекарственным средствам.

Создание комбинированных лекарственных препаратов сопряжено с разрешением специфических проблем (кроме подбора эффективной композиции лекарственных средств, их соотношений), таких как сочетаемость различных лекарственных средств в процессе изготовления и хранения, разработка технологических режимов изготовления, приемлемых для всех активных начал, подбор общих носителей, осуществляющих, например, направленную доставку лекарств, способствующих преодолению резистентности к лекарствам, обеспечивающих пролонгацию действия, либо решающих другие задачи.

В случае создания комбинированных противотуберкулезных препаратов на основе рифампицина по рекомендации ВОЗ особое внимание следует обратить на обеспечение его адекватной биодоступности, которая может значительно снижаться при создании новых комбинированных лекарственных препаратов и даже в случае несоблюдения технологий изготовления для известных комбинированных лекарственных препаратов. (Там же).

Таким образом, известен комбинированный противотуберкулезный препарат, содержащий в качестве действующего начала смесь рифампицина, этамбутола и изониазида в соотношении 150:75:300 (мг) и 30-50 вес.% инертного наполнителя, в качестве которого используют мел, соду, стеарат магния (Справочник Видаль, 2001, с.Б-336), который наиболее близок к предлагаемому изобретению и принят за прототип.

Благодаря подбору определенных доз (а следовательно, и соотношений между лекарственными веществами) рифампицина, этамбутола и изониазида, препарат проявляет высокую терапевтическую активность в суммарной дозе 140 мг/кг веса.

Однако при длительном применении наблюдается выраженное токсическое действие.

Изобретательской задачей является расширение арсенала комбинированных противотуберкулезных препаратов, увеличение их терапевтической эффективности, снижение токсических эффектов.

Цель достигается тем, что предлагается комбинированный противотуберкулезный препарат, содержащий в качестве действующего начала рифампицин, этамбутол, изониазид и дополнительно пиразимид и пиридоксин, а в качестве наполнителя 2-15 вес.% метацеля при следующем соотношении компонентов в лекарственной смеси, мг:
Рифампипин - 140 - 160
Этамбутол - 270 - 280
Изониазид - 70 - 80
Пиразимид - 400
Пиридоксин - 10 - 15
Заявителем выбран набор препаратов (рифампицин, этамбутол, изониазид, пиразимид), который используют в наиболее предпочтительном курсе сочетанной терапии. В этот набор включен также пиридоксин - предшественник образования пиридоксальфосфата - один из производных витамина В₆.

Метацель - это фирменное наименование метиловых эфиров целлюлозы, содержащих 14-30% метоксильных групп. Вещество представляет собой мелкокристаллический белый порошок, легко поддающийся формованию и таблетированию. Метиловые эфиры целлюлозы используют как загустители в ряде производств (в текстильной промышленности, типографском деле, косметологии, пищевой промышленности для загущения соков, паст и т.д.)
Заявителю неизвестно применение метацеля в качестве носителя для комбинированных противотуберкулезных препаратов. Предлагаемое сочетание действующих начал и носителя, их соотношения являются новыми для комбинированных противотуберкулезных препаратов, подобраны опытным путем и влияют на конечные выявленные свойства препарата.

Заявителем обнаружены неожиданные (с точки зрения уровня техники) следующие свойства предлагаемого препарата.

1. Данные по фармакинетике рифампицина в предлагаемом препарате показали, что максимальная концентрация достигается через 3-4 ч и составляет 7 мкг/мл, что является достаточным для проявления высокого бактериостатического эффекта. Кривая фармокинетики более плавная, что является преимуществом, так как высокое значение бактериостатического эффекта сохраняется дольше. Это доказывает, что в данном комбинированном препарате соблюдены требования ВОЗ, касающиеся требования биодоступности рифампицина в комбинированных противотуберкулезных препаратах.

2. Химиотерапия экспериментального туберкулеза мышей ризобутолом в дозе (70 мг/кг веса животного), в 2 раза меньшей установленной лечебной дозы (используемой в прототипе - 140 мг/кг веса животного), показала эффективность лечения (80,1%), практически такую же, как в прототипе (82,6%). Это говорит о наличие синергического эффекта у компонентов ризобутола, возможно, за счет взаимообратного влияния бактериостатического эффекта и общей токсичности препарата при длительном введении, других возможных взаимозависимых процессов в условиях in vivo (см., например, Киселев В.И. Канамицин сульфат - индуктор гесА гена Escherichia coli. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1989, 5, с.41-43). Интересно, что бактериостатический эффект в условиях in vitro, когда не может быть учтена общая токсичность препарата, достигается только при одинаковых концентрациях в питательной среде как ризобутола, так и питательной смеси по прототипу, а также изониазида, как наиболее активного и широко применяемого в клинике туберкулезного препарата.

3) Изучение гематологических и биохимических параметров как показателей токсичности при длительном приеме ризобутола свидетельствует, что он не обладает токсическими свойствами.

Действующие вещества при совместном присутствии устойчивы в процессе изготовления и хранения, условия таблетирования и капсулирования стандартны, процессы могут быть осуществлены на стандартном отечественном оборудовании.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами: в примере 1 дается описание композиций, используемых в примерах 2-5, в примере 2 описаны данные по фармокинетике рифампицина в составе ризобутола; пример 3 посвящен описанию химиотерапевтической эффективности ризобутола в условиях экспериментального туберкулеза мышей; в примере 4 приведены гематологические и биохимические показатели как показатели токсичности препарата; пример 5 посвящен клинической терапии ризобутолом ограниченной группы больных с диагнозом очаговый туберкулез.

Пример 1.

Получение композиций.

К 150 мг рифампицина, 275 мг этамбутола, 75 мг изониазида, 400 мг пиразимида, 10 мг пиридоксина добавляли 100 мг метацеля (соответствует 10% от общего веса композиции). Смесь тщательно перемешивают на смесителе в течение 15 мин, высушивают в сушилке полочного типа ("Мюнстерман"), пропускают через гранулятор RF-3056 и таблетируют на ротационном таблетном прессе РТМ-41.

В результате получают композицию следующего состава, которую используют в примерах 2-4, мг:
Изониазид - 75
Рифампицин - 150
Этамбутол - 275
Пиразиномид - 400
Пиридоксин - 15
Так же готовят композиции с иными значениями концентраций компонентов.

Пример 2.

Фармакокинетика рифампицина в составе ризобутола.

Определение рифампицина в плазме крови мышей проводили с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Для этого использовали насос Gilson M302 (США), инжектор Rheodyne 7125i (США) и фотометрический детектор Carlo Erba microUVIS20 (Италия). Анализ проводили с помощью колонки, упакованной обращенно-фазовым сорбентом XTerra RP₈ 150х4,6 мм (Waters, США) с использованием в качестве подвижной фазы 40% ацетонитрила в 0,1М аммоний-ацетатном буферном растворе, рН 4,6, при скорости потока 1,2 мл/мин. Детекцию проводили при 254 нм.

Образцы для анализа готовили по следующей методике: плазму крови животных получали после центрифугирования при 2500 об/мин в течение 20 мин, затем ее экстрагировали 5 объемами смеси СНСl₃:МеОН=4:1, экстрагент высушивали в токе аргона, сухой остаток растворяли в 0,2 мл подвижной фазы.

Количество рифампицина в образцах плазмы определяли по площади пика, соответствующего по времени выхода антибиотику. Для этого строили калибровочную кривую на основе результатов ВЭЖХ анализа аликвот раствора рифампицина, приготовленного по точной навеске субстанции. Данные анализа представлены в табл.1.

Пример 3.

Химиотерапевтическая эффективность ризобутола в условиях экспериментального туберкулеза мышей.

Для определения химиотерапевтической эффективности ризобутола экспериментальное воспроизведение гематогенно-диссеминированного туберкулеза было осуществлено на 85 мышах линии C57BL/6, лабораторные животные были получены из Центрального питомника животных РАМН. В опыт включались мыши, прошедшие карантинирование, стандартизацию по весу (20-25 г) и полу. Заражение проводили двухнедельной вирулентной культурой М. tuberculosis H37Rv путем внутривенного (в вену хвоста) введения суспензии микобактерий в дозе 2-10 КОЕ (колониеобразующих единиц) в 0,5 мл физиологического раствора. Все экспериментальные животные были разделены на 5 групп в зависимости от применяемого режима химиотерапии, по 17 особей в каждой терапевтической группе.

Лечение животных было начато через 14 дней после заражения, когда в легких макроскопически определялись множественные очаги туберкулезной инфекции.

Химиотерапия проводилась ежедневно (кроме воскресенья) в течение 2 месяцев. Препараты вводили перорально.

Макроскопическая оценка эффективности каждого режима химиотерапии выражалась индексом эффективности, исчисляющимся по специальной формуле, разработанной Торгуновой А. Н. (см. Методы экспериментальной химиотерапии (Практическое руководство). Изд. 2-е, под редакцией Г.Н.Першина. М.: Медицина, 1971).

Микробиологическое исследование включало бактериоскопию мазков-отпечатков и посев. Интенсивность роста культур учитывали по четырехбальной шкале, предложенной Першиным Г.Н. (см. Приказ 558 МЗ СССР от 08.06.1978 г. М., 1978, методическое указание, приложение 2).

1 месяц лечения.

При макроскопическом исследовании внутренних органов мышей, не получавших химиопрепараты (2 группа), были обнаружены выраженные признаки туберкулезного воспаления (крупные очаги туберкулезной инфекции в легких). Индекс поражения внутренних органов мышей этой группы составил 2,8 ЕД (см. табл. 2).

Макроскопическая картина внутренних органов животных, получавших лечение смесью препаратов по прототипу в изучаемой дозе (3 группа), соответствует индексу поражения 1,8 ЕД, т.е. в легких экспериментальных животных определялись единичные очаги туберкулезной инфекции (см. табл.2).

Макроскопическое исследование внутренних органов мышей, получавших в течение 1 месяца ризобутол (4 и 5 группы), также показало наличие туберкулезной инфекции. Индекс поражения составил 1,5 и 1,5 ЕД, соответственно.

Результаты бактериоскопии и изучения посевного материала, полученного от мышей, участвовавших в эксперименте в течение 1 месяца, показали наличие микобактерий во всех изученных паренхиматозных органах (см. табл.3).

2 месяца лечения.

При макроскопическом исследовании внутренних органов мышей контрольной, не получавшей химиопрепараты группы, к окончанию эксперимента были обнаружены выраженные признаки туберкулезного воспаления (крупные некротические очаги туберкулезной инфекции в легких). Индекс поражения внутренних органов мышей этой группы составил 3,5 ЕД (см. табл.3).

Картина поражения паренхиматозных органов мышей 3 группы близка к таковой в 4 и 5 группах, индекс поражения в этих случаях 0,6, 0,5 и 0,7 ЕД соответственно, т.е. выраженных очагов инфекции не обнаружено. Эффективность химиотерапии в этих группах - 82,6, 85,7 и 80,1%, соответственно (см. табл.2).

Уменьшение лечебной дозы ризобутола в 2 раза от максимальной привело к понижению эффективности лишь на 5,6%.

Исследование мазков-отпечатков и посевного материала в группах, получавших лекарственную смесь и ризобутол в течение 2 месяцев, выявило значительный положительный эффект химиотерапии при применении дозы 140,0 мг/кг. Результаты микробиологических исследований паренхиматозных органов показали стерилизацию исследуемого материала от микобактерий туберкулеза.

При дозе ризобутола 70 мг/кг данные бактериоскопии не выявили наличие микобактерий в мазках из патологического материала, а рост микобактерий в посевах был незначителен.

Данные о высеваемости микобактерий из селезенки зараженных животных отражают картину течения химиотерапии в целом. Результаты см. в табл.4.

К окончанию эксперимента (2 месяца лечения) из селезенок мышей 4 группы не было получено ни одной колонии микобактерий. В группах 3 и 5 мышей, получавших ризобутол в дозе 70,0 мг/кг, показатель высеваемости микобактерий составил до нескольких десятков колоний на орган зараженной мыши, что является показателем эффективности терапии. В контрольной группе мышей (2 группа) числовой показатель высеваемости составил 10,6•10⁷ колоний на зараженный орган мыши, что свидетельствует об обширном процессе инфекционного поражения всех органов нескольких выживших к завершению эксперимента особей.

Таким образом, в результате экспериментального исследования установлена высокая химиотерапевтическая эффективность (85,7%) нового противотуберкулезного препарата ризобутол. Применение тестируемого препарата в половинной дозе также дало очень высокий результат терапевтической эффективности - 80,1%, что позволит использовать ризобутол для терапии в половинной дозе и таким образом еще больше снизит токсичные эффекты при лечении.

Пример 4.

Токсические эффекты, наблюдаемые при длительном приеме противотуберкулезных препаратов.

Условия эксперимента описаны в примере 3.

Данные приведены в табл.5 и 6.

Сравнительное изучение гематологических и биохимических параметров как показателя токсичности при длительном приеме ризобутола и лекарственной смеси по прототипу свидетельствует, что ризобутол, в отличие от прототипа, не обладает токсическими свойствами (см. табл.5 и 6), даже в дозе 140 мг/кг.

Пример 5.

Клиническая терапия ризобутолом ограниченного контингента больных.

Использовалась композиция по примеру 1, содержащая 20 мг пиридоксина.

Группа состояла из 5 пациентов, назначалось лечение ризобутолом в дозе 140 мг/кг в день, через 3 недели проводились рентгенологические, биохимические и гематологические исследования. Во всех случаях наблюдалась положительная динамика, жалоб, в том числе на неврологическую симптоматику, не было.

Изобретение относится к области фармакологии и медицины и касается комбинированного противотуберкулезного препарата. Изобретение заключается в том, что комбинированный противотуберкулезный препарат содержит рифампицин, этамбутол, изониазид, пиразиномид и пиридоксин при определенном соотношении компонентов. Изобретение обеспечивает увеличение эффективности терапии за счет упрощения лечебного процесса, преодоления резистентности у широкого круга пациентов, улучшения свойств препарата. 6 табл.

Комбинированный противотуберкулезный препарат, содержащий в качестве действующего начала смесь рифампицина, этамбутола и изониазида и инертный наполнитель, отличающийся тем, что он дополнительно содержит пиразиномид и пиридоксин, а в качестве наполнителя 2-15 вес. % метацеля при следующем соотношении компонентов, мг:
Рифампицин - 140-160
Этамбутол - 270-280
Изониазид - 70-80
Пиразиномид - 400
Пиридоксин - 10-15