СПОСОБ КОМБИНИРОВАННОЙ ИММУНОТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА Российский патент 2003 года по МПК A61K38/20 A61P35/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно - к способам иммунотерапии с использованием аутологичных лимфоцитов и продуцируемых ими факторов при лечении больных со злокачественными опухолями головного мозга.

Существует два подхода к иммунотерапии злокачественных опухолей - антигенспецифическая и неспецифическая иммунотерапия.

В рамках первого подхода известен способ (PCT/US97/18718, WO 98/16238, А 61 К 35/14, 1997 г.), в соответствие с которым иммунотерапию рака проводят с помощью опухолевых клеток в комбинации с активированными in vitro аллогенными лимфоцитами.

Известен также способ антигенспецифической иммунотерапии злокачественных опухолей с использованием внутривенных инфузий аутологичных лимфоцитов, активированных в культуре in vitro опухолевыми клетками и смесью нативных цитокинов, полученных в результате предварительной стимуляции лимфоцитов (1, 2). По данному способу внутривенное введение аутологичных лимфоцитов проводится в режиме 1 раза в месяц на протяжении 6 месяцев. Однако в силу наличия гематоэнцефалического барьера внутривенное введение аутологичных лимфоцитов может быть неэффективным в отношении злокачественных опухолей "забарьерных тканей", в частности внутримозговой локализации.

Известен также способ антигенспецифической иммунотерапии злокачественных новообразований в послеоперационном периоде, основанный на использовании аутологичных иммуностимулирующих факторов, полученных при стимуляции лимфоцитов опухолевым антигеном. По данному способу курс иммуностимулирующей терапии заключался в дробном подкожном введении полученных аутологичных факторов (3, 4). Данный способ был апробирован в лечении больных с опухолями челюстно-лицевой области, желудочно-кишечного тракта и меланомами. Однако эффективность данного подхода в лечении злокачественных опухолей головного мозга не исследовалась.

Важно отметить, что достоверное увеличение продолжительности безрецидивного периода при проведении антигенспецифической иммунотерапии регистрируется, как правило, у больных с начальными стадиями развития рака при условии радикальной хирургической резекции опухоли. В то же время злокачественные опухоли головного мозга диагностируются, как правило, на поздних этапах (III-IV стадия). Кроме того, в силу отсутствия капсулы проблематичным является радикальное удаление опухолевого субстрата. Поэтому высокая эффективность изолированного использования антигенспецифической иммунотерапии в лечении данной категории больных представляется сомнительной.

В рамках второго подхода наиболее широко в настоящее время используются цитокины при лечении опухолей различной локализации (ЕР 832653 А1, 96250206, А 61 К 38/20, 1996 г.), включая опухоли головного мозга (PCT/US97/18455, WO 98/16246, А 61 К 39/00, 1997 г.). Известен также способ лечения, предусматривающий внутривенное введение аутологичных лимфоцитов, активированных интерлейкином-2 (ИЛ-2), - так называемых, лимфокин-активированных киллеров (ЛАК-терапия) (5, 6). Недостатком метода ЛАК-терапии является ограниченность сферы использования (эффективность в виде 25% клинического ответа регистрируется только при меланоме и раке почки), токсичность высоких доз ИЛ-2 и дороговизна метода.

С целью снижения токсичности и повышения эффективности ЛАК-терапии применительно к лечению злокачественных опухолей головного мозга предложен метод локорегионального введения ЛАК-клеток в комбинации с ИЛ-2 непосредственно в опухоль (7). Данный подход характеризуется хорошей клинической переносимостью и эффективностью в 33% случаев. Однако выживаемость в течение 18 мес. не отличалась от таковой, получаемой при традиционном лечении.

Задачей изобретения является повышение эффективности лечения злокачественных опухолей головного мозга.

Задача решается в изобретении тем, что в предложенном способе неспецифическая локорегиональная иммунотерапия аутологичными ИЛ-2-активированными лимфоцитами в сочетании с ИЛ-2 проводится только после оперативного удаления опухолевого субстрата и комбинируется с антигенспецифической иммунотерапией, а именно с введением лимфоцитов, стимулированных опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2, в ложе удаленной опухоли, после чего проводится иммунотерапия аутологичными иммуностимулирующими факторами, полученными при культивировании лимфоцитов больного с опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2.

Лечению предшествует этап получения суспензии опухолевых клеток из фрагмента удаленной опухоли. Полученная клеточная взвесь, используемая в качестве источника опухолевых антигенов, инактивируется и консервируется до применения. Иммунотерапия начинается в послеоперационном периоде, начиная с 5-7 суток. В стерильный флакон вводят 10 тыс. ЕД гепарина, забирают 300 мл венозной крови больного, добавляют 60 мл раствора желатиноля и инкубируют 45 мин при 37^oС. Отмытую эритроцитарную массу возвращают больному в день гемоэксфузии. Собранную лейковзвесь собирают в отдельный флакон, центрифугируют при 1000 об/мин 20 мин и удаляют надосадок. Клетки лейковзвеси однократно отмывают фосфат-забуференным физиологическим раствором (ЗФР), наслаивают на градиент плотности фиколла-верографина (1,078) и центрифугируют в течение 20 мин при 3000 об/мин. Собранные из интерфазы мононуклеарные клетки (МНК) двукратно отмывают ЗФР и ресуспендируют в культуральной среде RPMI-1640, дополненной 5% сыворотки доноров АВ (IV) группы, 5 мМ HEPES-буфера и гентамицином в дозе 80 Ед/мл. Клетки доводят до концентрации 1,5•10⁶/мл и культивируют в течение 48 ч в двух режимах: 1) с рекомбинантным ИЛ-2 в дозе 100 Ед/мл и 2) с рекомбинантным ИЛ-2 в той же дозе и опухолевым антигеном в оптимальном соотношении. Курс лечения по предложенному способу включает три процедуры получения ИЛ-2-активированных клеток и три процедуры получения клеток, стимулированных опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2. Полученные клетки вводят посредством четырех стереотаксических пункций в ложе удаленной опухоли в сочетании с ИЛ-2 в оптимальной дозе. Завершающий этап комбинированной локорегиональной иммунотерапии предусматривает введение аутологичных иммуностимулирующих факторов, полученных при культивировании лимфоцитов больного с опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2, в виде курса 10-15 подкожных инъекций.

Пример 1.

Больной Н. , 43 лет, ИБ 2055, находился в клинике нейрохирургии с диагнозом: Внутримозговая злокачественная опухоль правой теменно-затылочной области (полиморфноклеточная глиобластома).

Поступил в клинику 22.09.98 с жалобами на головную боль преимущественно в лобной и затылочной областях, снижение зрения, неуверенность при ходьбе, подташнивание, икоту. Анамнез заболевания: течение заболевания прогредиентное. Считает себя больным с мая 1998 г., когда начали беспокоить головные боли, вскоре заметил ограничение полей зрения.

В неврологическом статусе: сухожильные рефлексы D>S, координаторные пробы выполняет с атаксией грубее справа, в позе Ромберга пошатывается в обе стороны. Непрерывная икота. Оценка по шкале Карновского - 60 баллов. Рентгенологически: на обзорных краниограммах в 2-х проекциях определяется умеренное усиление рисунка диплоических сосудов, выраженный остеопороз спинки турецкого седла. Осмотр окулиста: visus OD/OS=1,0/0,8. Трубчатое сужение полей зрения на оба глаза. Глазное дно: выраженные застойные диски зрительных нервов обоих глаз.

ЭЭГ: патологическая очаговая медленная активность в правом полушарии на фоне выраженных общемозговых изменений с вовлечением срединных структур. ЭхоЭС: смещение М-эха справа налево в задних и средних отделах на 13 мм, в передних отделах - на 7 мм. Признаки внутричерепной гипертензии. ЯМРТ с контрастным усилением "Омнисканом": внутримозговая опухоль с кистозными включениями в правой затылочной доле с выраженным масс-эффектом, вызывающая компрессию правого бокового желудочка и смещение срединных структур.

28.09.98 выполнена операция: костно-пластическая трепанация черепа в правой теменно-затылочной области, тотальное удаление внутримозговой опухоли.

После получения результатов гистологического исследования больному проведен курс комбинированной иммунотерапии по предложенному способу. 02.10.98, 04.10.98, 09.10.98 и 11.10.98 путем стереотаксической пункции в асептических условиях в ложе удаленной опухоли введены аутологичные активированные лимфоциты в общей дозе 1,4•10⁹ в комбинации с интерлейкином-2. Затем проведено 15 подкожных инъекций аутологичных иммуностимулирующих факторов.

Послеоперационный период протекал без осложнений, заживление первичным натяжением. Больной выписан в удовлетворительном состоянии с оценкой по шкале Карновского 90 баллов.

Спустя 17 мес. после операции состояние пациента удовлетворительное. Головные боли не беспокоят. Острота и поля зрения восстановились. Больной приступил к труду (работает часовым мастером). Оценка по шкале Карновского - 100 баллов.

Изменения головного мозга по данным ЯМРТ в динамике лечения представлены на фиг. 1 и 2.

Пример 2.

Больной Д. , 32 лет, ИБ 96, находился в клинике нейрохирургии с диагнозом: Внутримозговая злокачественная опухоль правой теменно-затылочной области (полиморфноклеточная глиобластома). Эписиндром с редкими генерализованными припадками.

Поступил в клинику 14.01.99 с жалобами на постоянную диффузную головную боль, шаткость, неуверенность при ходьбе, кратковременные (несколько секунд) приступы потери сознания. Анамнез заболевания: В сентябре и декабре 1998 г. после переутомления и злоупотребления алкоголем отмечались кратковременные (до 30 секунд) приступы потери сознания. С начала января 1999 головные боли стали постоянными.

В неврологическом статусе очаговой патологии не выявлено. Оценка по шкале Карновского - 80 баллов. Рентгенологически: на обзорных краниограммах в 2-х проекциях определяется умеренное усиление рисунка диплоических сосудов. Форма и размеры турецкого седла обычные. Осмотр окулиста: visus OD/OS= 0,7/0,9. Глазное дно: диски зрительных нервов бледно-розовые, границы четкие. Артерии в норме, вены полнокровны, расширены. Отека нет.

ЭЭГ: диффузные ирритативные изменения с вовлечением срединных структур. ЭхоЭС: смещения М-эхо не определяется. ЯМРТ с контрастным усилением "Омнисканом": опухоль головного мозга в теменно-затылочной области справа, состоящая из незначительного солидного и, в основном, из кистозного компонентов.

26.01.99 выполнена операция: костно-пластическая декомпрессивная трепанация черепа в правой теменно-затылочной области, тотальное удаление внутримозговой опухоли.

После получения результатов гистологического исследования больному проведен курс комбинированной иммунотерапии по предложенному способу. 17.02.99, 19.02.99, 24.02.99 и 26.02.99 путем стереотаксической пункции в асептических условиях в ложе удаленной опухоли введены аутологичные активированные лимфоциты в общей дозе 3,43•10⁹ в комбинации с интерлейкином-2. Затем проведено 10 подкожных инъекций аутологичных иммуностимулирующих факторов.

Послеоперационный период протекал без осложнений, рана зажила первичным натяжением. Больной выписан в удовлетворительном состоянии с оценкой по шкале Карновского 90 баллов.

Спустя 13 мес. после операции состояние пациента удовлетворительное. Эпиприпадки не возобновились. Головные боли не беспокоят. В зоне костного дефекта выбухания нет, пульсация мозга хорошая. Оценка по шкале Карновского 90 баллов.

Изменения головного мозга по данным ЯМРТ в динамике лечения представлены на фиг. 3.

По данным литературы около 90% больных со злокачественными глиобластомами головного мозга погибают в течение 10-11 мес. после хирургического лечения, комбинированного с радиотерапией (8). Включение в комплексное лечение больных со злокачественными опухолями головного мозга метода комбинированной иммунотерапии по предложенному способу позволило снизить показатель летальности в течение первого года после операции до 28%. Из 7 больных умерло 2 человека. Остальные 5 больных в настоящее время живы и находятся под наблюдением. При этом у 2 выживших пациентов продолжительность безрецидивного периода превысила 12 мес. (13 и 17 мес.). Следует отметить, что в группе больных, при лечении которых использовался метод комбинированной иммунотерапии, уровень качества жизни в послеоперационном периоде был выше - оценка по шкале Карновского составила 77 баллов, тогда как у больных, леченых по традиционным схемам, - только 61 балл. Спустя 6 мес. с момента операции уровень качества жизни у больных, получавших комбинированную иммунотерапию, составил 75,5 баллов, тогда как у больных, леченых по традиционным схемам, оценка по шкале Карновского снизилась до 45 баллов.

Таким образом, использование предложенного способа позволяет повысить эффективность лечения больных со злокачественными опухолями головного мозга.

Литература
1. Krane R.J., Carpinito G.A., Ross S.D., Lavin P.Т., Osband M.E. Treatment of metastatic renal cell carcinoma with autolymphocyte therapy. Low toxicity outpatient approach to adoptive immunotherapy without use of in vivo interleukin-2.//Urology. - 1990. - Vol. 35. - 5. - P.417-422.

2. Osband M. E. , Ross S.D. Problems in the investigational study and clinical use of cancer immunotherapy.//Immunol. Today. - 1990. - Vol. 11. - 6. - Р.193-195.

3. Власов А. А., Новиков В.И., Карандашов В.И., Сидорович И.Г. Послеоперационная иммунотерапия больных со злокачественными новообразованиями. //Российский мед. журнал. - 1996. - 6. - С.17-19.

4. Новиков В.И., Власов А.А., Карандашов В.И., Рязанов Н.К. Иммунотерапия злокачественных новообразований челюстно-лицевой области человека аутологичными препаратами в послеоперационном периоде.//Иммунология. - 1995. - 2. - С.54-56.

5. Rosenberg S.A., Lotze M.T., Muul L.M. et al. A progress report on the treatment of 157 patients with advanced cancer using lymphokine activated killer cells and interleukin-2 or high dose interleukin-2 alone.//N. Engl. J. Med. - 1987. - Vol. 316. - 5. - P.889-897.

6. Rosenberg S.A. Immunotherapy of cancer using interleukin-2: current status and future prospects.//Immunol. Today. - 1988. - Vol. 9. - 1. - P. 58-62.

7. Boiardi A., Silvani A., Ruffini P.A., et al. Loco-regional immunotherapy with recombinant interleukin-2 and adherent lymphokine-activated killer-cells (A-LAK) in recurrent glioblastoma patients.//Cancer Immunology Immunotherapy. - 1994. - Vol. 39. - 3. - Р.193-197.

8. Коршунов А.Г., Голанов А.В., Сычева Р.В., Прошин И.Н. Прогностическое значение онкоассоциированных белков и апоптоза в глиобластомах больших полушарий головного мозга.//Вопросы нейрохирургии. - 1999. - 1. - С.3-7.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения злокачественных опухолей головного мозга. Предложено вводить ЛАК-клетки в ложе опухоли только после оперативного удаления опухолевого субстрата, комбинировать с введением лимфоцитов, стимулированных опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2, после чего проводить курс подкожных инъекций аутологичных иммуностимулирующих факторов, полученных при культивировании лимфоцитов больного с опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2. Способ позволяет повысить эффективность лечения больных со злокачественными опухолями головного мозга. 3 ил.

Способ комбинированной иммунотерапии злокачественных опухолей головного мозга, заключающийся в получении из крови пациентов мононуклеарных клеток, культивировании их с интерлейкином-2 и последующем их локорегиональном введении в сочетании с ИЛ-2, отличающийся тем, что введение ЛАК-клеток в ложе опухоли проводят только после оперативного удаления опухолевого субстрата, комбинируют с введением лимфоцитов, стимулированных опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2, после чего проводят курс подкожных инъекций аутологичных иммуностимулирующих факторов, полученных при культивировании лимфоцитов больного с опухолевым антигеном в присутствии ИЛ-2.