СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ HELICOBACTER PYLORI Российский патент 2003 года по МПК G01N33/48 

Данный косвенный способ определения Helicobacter pylori относится к медицине, в частности к диагностике гастродуоденита и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки.

Существует прямой инвазивный способ определения Helicobacter pylori - морфологический [1] . Принцип морфологического способа основан на том, что при фиброгастроскопии берут биоптат из слизистой оболочки желудка или 12-перстной кишки. С биоптата делают гистологический срез и окрашивают акридиновым оранжевым, толуидиновым синим, по Гимзе или по Граму. Препарат исследуют под микроскопом с целью диагностики бактерии Helicobacter pylori. Самыми существенными недостатками этого способа являются:
1. Повышенная вероятность ложноотрицательных результатов, связанная с локальностью отбора диагностического материала, уменьшением количества Helicobacter pylori после монотерапии висмутсодержащими препаратами, метронидазолом, терапии антибактериальными препаратами, блокаторами протонной помпы.

2. Возможность инструментального заражения пациента.

3. Дискомфортность для пациентов.

4. Ограниченность применения для детей и при ряде заболеваний и состояний.

5. Способ применяется для диагностики эрадикации Helicobacter pylori только в совокупности с бактериологическими или уреазными тестами.

6. Высокая стоимость исследования.

Цель данного изобретения - повышение эффективности диагностики хронического гастродуоденита и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки и контроля эффективности эрадикации Helicobacter pylori в динамике лечения.

Сущность способа заключается в следующем. На предметное стекло наносят каплю биологического субстрата (слюны) и каплю кристаллообразующего вещества. Препарат выдерживают 24 ч в строго горизонтальном положении при комнатной температуре и нормальной влажности вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов. После выдержки проводят микроскопию препарата на световом микроскопе. По характеру кристаллического рисунка определяют наличие Helicobacter pylori. Заселение слизистой верхнего этажа желудочно-кишечного тракта слабовирулентными сапрофитными формами Helicobacter pylori характеризуется наличием в кристаллограмме темных и светлых центров кристаллизации без радиально расходящихся лучей или с одним лучом (Фиг. 1). Наличие в слизистой верхнего этажа желудочно-кишечного тракта форм Helicobacter pylori, обладающих патогенными свойствами, выражается присутствием в препарате до трех центров кристаллизации (темных или светлых) с хорошо развитыми радиальными лучами, исходящими из всех углов кристаллов (Фиг. 2). О развитии хронического процесса в верхнем этаже желудочно-кишечного тракта вне обострения говорит наличие в препарате более 3-4 темных центров кристаллизации с развитой структурой радиальных лучей, отстоящих на некоторое расстояние от кристалла (Фиг. 3). Обострению инфекции Helicobacter pylori соответствует наличие в препарате более 3-4 разрушенных центров кристаллизации с радиальными лучами (Фиг. 4). Успешно проведенному лечению (эрадикации Helicobacter pylori) соответствует сохранение беспорядочно расположенных радиальных лучей различной конфигурации и отсутствие центров кристаллизации (Фиг. 5).

Осуществляется способ следующим образом. Обезжиривают предметное стекло. На него наносят одну каплю слюны и одну каплю изотонического раствора хлорида натрия (NaCl). Препарат выдерживают 24 ч в строго горизонтальном положении при комнатной температуре (20-25^oС), влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов. Проводят микроскопию препарата на световом микроскопе "Билам" при увеличении 7x8.

Предлагаемый способ прост в применении, неинвазивен, достаточно точен, характеризуется малой трудоемкостью и не требует больших материальных затрат, им можно диагностировать состояние организма несколько раз в день без причинения неудобств и вреда больному. Противопоказаний для применения способа нет, не нужна предварительная подготовка больного и очень проста техника взятия биологического субстрата (слюны).

Пример.

Больная А. , 42 года, поступила 31.01.2000 г. (05.04.00 г.) в отделенческую больницу ст. Горький-Сортировочный с диагнозом: впервые выявленная язвенная болезнь 12-перстной кишки, стадия обострения, история болезни 265 ( 999). Жалобы при поступлении: интенсивные боли ноющего и приступообразного характера в верхней половине живота, тощаковые и ночные, снимающиеся приемом пищи или антацидов. Снижение аппетита, тошнота, сухость, горечь во рту, изжога, вздутие живота, запоры, боли в области сердца, слабость. Объективно: общее состояние удовлетворительное. Телосложение правильное, астеническое, пониженное питание. Кожные покровы и видимые слизистые обычной окраски, чистые. Язык густо обложен белым налетом. Над легкими перкуторно ясный легочный звук. Дыхание в легких везикулярное. Тоны сердца ясные, ритмичные. Пульс - 72 в 1 минуту, АД 120/80 мм ртутного столба. Живот несколько вздут, при пальпации болезненный в эпигастрии, пилородуоденальной зоне. Печень 10, 9, 7 см по краю реберной дуги, край эластичный. Селезенка 7x5 см. Стул со склонностью к запорам. Дизурии нет.

Общий анализ крови от 01.02.00 г. (15.05): Нb - 137 (140) г/л, СОЭ - 5 (3) мм/ч, L - 4,0 (5,8)•10⁹/_л, Э - 4,0 (4,5)•10¹²/_л.

01.02.00 г. (15.05) Общий белок - 71 (67) г/л, фибриноген 2,0 (2,5) г/л, мочевина 3,0 (3,0) ммоль/л, АсАТ - 0,09 (0,09) мкмоль/млч, АлАТ - 0,1 (0,67) мкмоль/млч, билирубин общий - 12,2 (14,4) мкмоль/л, прямой - 1,1 (3,3) мкмоль/л, непрямой - 11,1 (11,1) мкмоль/л, амилаза - 10,8 (7,6).

Общий анализ мочи от 01.02.00 г. (15.05): удельный вес - 1007 (1010), сахар - отр. , белок - нет, эпителий - 0-1 (7-10) в п/зр, L - 0-1 (1-2) в п/зр.

Диастаза - 34 (60,0) мг/сл.

Сахар крови - 4,1 (3,6) ммоль/л.

ЭФГДС от 02.02.00 г. : Слизистая 12-перстной кишки гиперемирована, отечна. В луковице 12-перстной кишки на задней стенке язва 0,5х0,5 см в диаметре с воспалительным валом.

ЭФГДС от 15.02.00 г. : В луковице 12-перстной кишки на задней стенке красный рубец.

ЭФГДС от 07.04.00 г. : Слизистая 12-перстной кишки гиперемирована, отечна. В луковице на задней стенке язва 0,6х0,6 см в диаметре с воспалительным валом.

ЭФГДС от 21.04.00 г.: В луковице 12-перстной кишки на задней стенке красный рубец.

Гистология от 15.02.00 г.: диффузный антрум-гастрит, диффузный дуоденит. H.pylori ++.

Гистология от 07.04.00 г.: диффузный антрум-гастрит, диффузный дуоденит. H.pylori ++.

Де-нол-тест от 02.02.00 г.: H.pylori +++.

Де-нол-тест от 07.04.00 г.: H.pylori +++.

УЗИ печени, желчных путей, поджелудочной железы от 11.02.00 г. - фиброзные изменения поджелудочной железы.

Лечение: омепразол 20 мг 2 раза в день, де-нол 120 мг 4 раза в день, тетрациклин 500 мг 4 раза в день, метронидазол 250 мг 4 раза в день. Курс лечения - 7 дней.

Кристаллография слюны от 02.02.00 г. (NaCl): Множественные разрушенные центры кристаллизации с радиально расходящимися лучами.

Кристаллография слюны от 15.02.00 г. (NaCl): Множественные темные и светлые центры кристаллизации с радиально расходящимися лучами.

Кристаллография от 07.04.00 г. (NaCl): Множественные разрушенные центры кристаллизации с радиально расходящимися лучами.

Кристаллография от 21.04.00 г. (NaCl): Множественные темные и светлые центры кристаллизации с радиально расходящимися лучами.

Динамика лечения положительная.

Больная выздоровела и была выписана из стационара 21.02.00 г. (29.04.00 г.).

Гистология от 28.05.00 г.: поверхностный антральный гастрит, дуоденит 1 степени. H.pylori -.

Де-нол-тест от 28.05.00 г.: H.pylori -.

Кристаллография от 28.05.00 г. (NaCl): Беспорядочные радиально расходящиеся лучи.

Источник информации
1. В.Т. Ивашкин, Ф. Мегро, Т.Л. Лапина "Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии". Москва. Издательство "Триада-X". 1999 год.

Способ может быть использован в медицине, а именно в диагностике гастродуоденита и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Проводят соединение капли слюны больного с кристаллообразующим веществом, выдержку препарата в течение 24 ч и затем его исследование под микроскопом. По рисунку кристаллов определяют степень развития геликобактериоза, а именно по наличию в кристаллограмме темных и светлых центров кристаллизации определяют присутствие в слизистой верхнего этажа желудочно-кишечного тракта слабовирулентных форм Helicobacter pylori, по наличию до трех темных или светлых центров кристаллизации с радиальными лучами из всех углов кристаллов - присутствие патогенных форм Helicobacter pylori, no наличию более 3-4 центров кристаллизации с развитой структурой радиальных лучей - развитие хронического процесса, по наличию более 3-4 разрушенных центров кристаллизации с радиальными лучами - обострение инфекции Helicobacter pylori, по наличию беспорядочных радиальных лучей и отсутствию центров кристаллизации - эрадикацию Helicobacter pylori. Способ повышает эффективность диагностики хронического гастродуоденита и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки и контроля эффективности эрадикации Helicobacter pylori в динамике лечения. 5 ил.

Способ определения хеликобактериоза путем микроскопического исследования биологического материала, отличающийся тем, что исследуют слюну больного в динамике лечения путем добавления в капле слюны капли кристаллообразующего вещества, выдерживают полученный препарат в течение 24 ч в горизонтальном положении при комнатной температуре, нормальной влажности, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов и исследуют под микроскопом, при этом по наличию в кристаллограмме темных и светлых центров кристаллизации определяют присутствие в слизистой верхнего этажа желудочно-кишечного тракта слабовирулентных Helicobacter pylori, по наличию до трех темных или светлых центров кристаллизации с радиальными лучами из всех углов кристаллов - присутствие патогенных форм Helicobacter pylori, при этом по наличию более 3-4 центров кристаллизации с развитой структурой радиальных лучей определяют развитие хронического процесса, по наличию более 3-4 разрушенных центров кристаллизации с радиальными лучами - обострение инфекции Helicobacter pylori, по наличию беспорядочных радиальных лучей и отсутствию центров кристаллизации - эрадикацию Helicobacter pylori.