ФЕРМЕНТАЦИОННЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ЛИЗИНА Российский патент 2003 года по МПК C12P13/06 C12N15/54 C12N1/21 C12N15/70 C12P13/06 C12R1/185 

Текст описания в факсимильном виде (см. чертежи) Т Тм

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства L-лизина. Для осуществления способа используют ДНК, кодирующую дигидродипиколинатсинтазу из Escherichia, десенсибилизированную к ингибированию по типу обратной связи L-лизином и имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в тексте описания, и которой трансформируют бактерию рода Escherichia. Бактерия также несет аспартокиназу, десенсибилизированную к ингибированию по типу обратной связи L-лизином, что может быть осуществлено введением в бактерию ДНК, кодирующей аспартокиназу III из Escherichia. Такую бактерию культивируют в подходящей среде и собирают L-лизин из культуры. Использование трасформированных бактерий рода Escherichia в качестве продуцента позволяет повысить продуктивность L-лизина. 2 с. и 8 з.п.ф-лы, 24 ил., 22 табл.

1. ДНК, кодирующая дигидродипиколинатсинтазу, происходящую из бактерий рода Escherichia, десенсибилизированную к ингибированию по типу обратной связи L-лизином и имеющую аминокислотную последовательность, содержащую мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутаций из замен: 81-го остатка аланина остатком валина, 118-го остатка гистидина остатком тирозина, 81-го остатка аланина остатком валина и 118-го остатка гиститида остатком тирозина, считая от N-конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:4. 2. Способ получения L-лизина, отличающийся тем, что культивируют бактерию рода Escherichia в подходящей среде для продуцирования и накопления L-лизина в культуре и собирают L-лизин из культуры, при этом бактерия несет дигидродипиколинатсинтазу, происходящую из бактерии рода Escherichia, содержащую мутацию, обуславливающую десенсибилизацию к ингибированию по типу обратной связи L-лизином, в результате введения в клетку бактерии ДНК по п.1, и аспартокиназу, ингибирование которой по типу обратной связи L-лизином также десенсибилизировано. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что бактерия несет аспартокиназу, ингибирование которой по типу обратной связи L-лизином десенсибилизировано введением в ее клетку ДНК, кодирующей аспартокиназу III, происходящую из бактерии рода Escherichia, имеющую мутацию, обуславливающую десенсибилизацию к ингибированию по типу обратной связи L-лизином. 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что мутация, обуславливающая десенсибилизацию к ингибированию аспартокиназы III L-лизином по типу обратной связи, выбрана из группы, состоящей из мутаций для замен: 323-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты, 323-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты и 408-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты, 34-го остатка аргинина остатком цистеина и 323-го остатка глицина остатком аспарагиновой кислоты, 325-го остатка лейцина остатком фенилаланина, 318-го остатка метионина остатком изолейцина, 318-го остатка метионина остатком изолейцина и 349-го остатка валина остатком метионина, 345-го остатка серина остатком лейцина, 347-го остатка валина остатком метионина, 352-го остатка треонина остатком изолейцина, 352-го остатка треонина остатком изолейцина и 369-го остатка серина остатком фенилаланина, 164-го остатка глутаминовой кислоты остатком лизина и 417-го остатка метионина остатком изолейцина и 419-го остатка цистеина остатком тирозина, считая от N-конца аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:8. 5. Способ по любому из пп.2-4, отличающийся тем, что в бактерии усилена экспрессия гена дигидродипиколинатредуктазы. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что бактерия трансформирована рекомбинантной ДНК, сконструированной лигированием гена, кодирующего дигидродипиколинатредуктазу, с вектором, автономно реплицируемым в клетках бактерии рода Escherichia. 7. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем, что в бактерии усилена экспрессия гена диаминопимелатдегидрогеназы. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что бактерия трансформирована рекомбинантной ДНК, сконструированной лигированием гена диаминопимелатдегидрогеназы с вектором, автономно реплицируемым в клетках бактерии рода Escherichia. 9. Способ по п.5 или 6, отличающийся тем, что в бактерии усилена экспрессия генов тетрагидродипиколинатсукцинилазы и сукцинилдиаминопимелатдеацилазы. 10. Способ по п.9, отличающийся тем, что бактерия трансформирована одной или двумя рекомбинантными ДНК, сконструированными лигированием генов тетрагидродипиколинатсукцинилазы и сукцинилдиаминопимелатдеацилазы с одним или различными векторами, автономно реплицируемыми в клетках бактерии рода Escherichia.