СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИОКСИДАНТНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2003 года по МПК A61K31/357 A61K35/78 A61P39/06 

Описание патента на изобретение RU2209063C1

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к производству лекарственных средств в виде субстанций и индивидуальных биологически активных соединений (БАС), и касается способа получения 2,3-дегидросилибина из плодов расторопши пятнистой [Silybum marianum (L.) Gaertn.].

В фармацевтической технологии известны способы получения лекарственных средств и субстанций на основе суммы БАС (карсил, силибор, силимар, силимарин и др. ), а также индивидуальных веществ из плодов расторопши пятнистой [7, 16-21, 24, 27, 34, 47, 49], однако недостатком известных способов является сложность технологического процесса и низкий выход целевого продукта. Кроме того, до настоящего времени как в отечественной, так и зарубежной литературе [5-7, 20, 26, 42, 46, 50] подчеркивалась прежде всего значимость трех основных компонентов плодов расторопши пятнистой - силибина, силидианина и силикристина, которые определяют гепатопроекторные, антиоксидантные, мембраностабилизирующие свойства препаратов на основе сырья данного растения до настоящего времени как в отечественной, так и зарубежной литературе [5-7, 22-24, 26, 29-33, 44-50]. Именно это стало основанием для разработки целой серий очищенных препаратов на основе суммы вышеперечисленных флаволигнанов, получившей название "Силимарин". Для целей стандартизации плодов расторопши пятнистой и отечественных препаратов на основе этого сырья нами предложено использовать силибин в качестве государственного стандартного образца [8-11, 14, 15].

За прототип изобретения нами взят способ получения 2,3-дегидросилибина из плодов расторопши пятнистой [28], однако выделение этого вещества осуществляется с использованием громоздкой технологии, заключающейся в последовательной экстракции сырья (2,0 кг) петролейным эфиром, бензолом, этиловым спиртом, упаривании спиртового извлечения, хроматографировании полученного остатка на силикагеле (элюент - бензол-этилацетат, 1:1), последующем рехроматографировании полученной смеси веществ на силикагеле (элюент - бензол-этилацетат, 3: 1) и очисткой сырого дегидросилибина (0,3 г) методом кристаллизации из метанола с выходом целевого вещества 0,2 г или 0,01% от воздушно-сухого сырья. Данный способ является не только громоздким, но и дает низкий выход целевого вещества 2,3-дегидросилибина. Кроме того, на стадии экстракции сырья используются такие опасные растворители, как петролейный эфир и бензол.

Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта, обладающего антиоксидантным действием.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве экстрагента используют 80% этиловый спирт, позволяющий исчерпывающе извлекать целевой продукт 2,3-дегидросилибин (1) из плодов расторопши пятнистой с последующим хроматографическим разделением экстрактивных веществ на полиамиде и силикагеле

Проведенный заявителем поиск по научно-техническим и патентным источникам информации и выбранный из перечня аналогов прототип [28] позволили выявить отличительные признаки в заявленном техническом решении. Следовательно, заявляемый способ получения удовлетворяет критерию изобретения "новизна".

Проведенный заявителем дополнительный поиск известных технических решений [1-4, 7, 13-25, 27, 35-41, 43, 47, 49] с целью обнаружения в них признаков, сходных с признаками заявляемого способа получения, показал, что эти признаки отсутствуют, следовательно, заявляемое техническое решение удовлетворяет критерию "изобретательский уровень".

Исследование антиоксидантного действия флаволигнанов плодов расторопши пятнистой (2,3-дегидросилибин, силибин) и экстракта расторопши жидкого проведено на крысах, у которых под наркозом удалялась печень и из нее готовили гомогенат в стеклянном гомогенизаторе при температуре +1oС на 0,05 М фосфатном буфере. Во всех сериях опытов гомогенат был взят от одной крысы, разведен на пять порций, которые и были использованы в пяти сериях опытов по девять проб в каждой, что позволяло сравнивать результаты всех серий опытов с достаточно высокой степенью достоверности. Во всех пробах определялась концентрация малонового диальдегида (МДА) по реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) по методике О.Н. Коробейникова [12]. К 0,5 мл печеночного гомогената добавлялось 5 мл 20% раствора фосфорновольфрамовой кислоты. Смесь оставляли на холоде до образования крупных хлопьев, затем центрифугировали. Надосадочную жидкость сливали, к осадку добавляли 2 мл дистиллированной воды и 1 мл раствора ТБК, который готовили путем растворения 80 мг ТБК в 5 мл ледяной уксусной кислоты. Пробы инкубировали в кипящей водяной бане в пробирках при температуре 99-100oС. Пробирки охлаждали, центрифугировали 10 мин при 8000 об/мин, затем фотометрировали на спектрофотометре при длине волны 535 нм и при длине 580 нм.

Расчет производили по формуле, предложенной автором статьи [12]
C = 0,21+26,5ΔД,
где С - концентрация МДА в нмоль/мл гомогената печени;
ΔД - оптическая плотность при длине волны 535 нм за вычетом плотности при длине волны 580 нм.

Проведены пять серий опытов. В первой серии опытов определялось перекисное окисление липидов в гомогенате печени без добавления каких-либо веществ. Оно составило 2,80±0,064 нмоль/мл гомогената. Перекисное окисление в гомогенате печени во второй серии опытов было повышено добавлением FeSO4 в конечной концентрации 0,076 мг/мл (0,5 мМ). Таким образом нами был создан исходный фон повышенного перекисного окисления липидов с добавлением признанного стимулятора этого процесса - сульфата железа (II). Этот фон и служил контролем для последующих опытов. В следующей третьей серии опытов в пробирки добавляли силибин в конечной концентрации 2 мМ/л, в четвертой серии опытов к гомогенату печени добавляли дегидросилибин также в конечной концентрации 2 мМ, в пятой серии опытов к гомогенату печени, также как и в предыдущих сериях опытов, добавляли сульфат железа, а кроме того, и экстракт расторопши в таком количестве, чтобы суммарное содержание в среде силибина и дегидросилибина, содержащихся в экстракте, было 2 мМ/л. Результаты исследований приведены в таблице.

Таким образом, силибин, дегидросилибин и экстракт расторопши, содержащий в своем составе оба вещества (протокол исследования антиоксидантного действия веществ и препарата прилагается), обладают выраженным антиоксидантным действием. Антиоксидантная активность дегидросилибина выявлена впервые и на 14,0% выше таковой силибина, относящегося к основным биологически активным соединениям силимарина и других препаратов плодов расторопши пятнистой.

Заявляемый способ иллюстрируется следующим примером.

Пример 1. 200,0 г измельченных плодов расторопши пятнистой [Silybum marianum (L. ) Gaertn.] заливают 80% этиловым спиртом в соотношении 1:10 и настаивают в течение 24 ч, затем экстракцию сырья осуществляют 80% этиловым спиртом при нагревании в течение 30 мин 2 раза. Объединенное водно-спиртовое извлечение упаривают под вакуумом до водного остатка, который затем наносят на слой полиамида и элюируют водой и затем смесью растворителей вода - этиловый спирт с возрастанием концентрации последнего. Целевой продукт элюируют 40% этиловым спиртом. Последующее хроматографическое разделение экстрактивных веществ осуществляют на силикагеле L 40/100 с использованием градиентной элюентной смеси хлороформ - этиловый спирт в различных соотношениях (100:0,98:2,97:3,95:5,93:7), что приводит к получению сырого целевого продукта (0,5 г). Окончательную очистку целевого продукта осуществляют кристаллизацией из водного спирта. Выход целевого продукта - индивидуального 2,3-дегидросилибина составляет 0,2 г или 0,1% от массы воздушно-сухого сырья.

Спектральные и физико-химические свойства 2,3-дегидросилибина (1):
Кристаллы желтого цвета состава С25Н20О10 (M+ 480) с т. пл. 253-255oС. УФ-спектр: λmax 267,365 нм. 1Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (200 МГц): 12,15 (с, 5-ОН), 9,74 (уш. с, 7-ОН), 7,87 (д.2,1 Гц, Н-21), 7,17 (дд, 8,3 и 2,1 Гц, Н-61), 7,8-6,9 (м, 4Н-Аr), 6,60 (д, 2,1 Гц, Н-8), 6,28 (д, 2,1 Гц, Н-6), 5,06 (д, 8,06 Гц, НA), 4,24 (м, НВ), 3,88 (с, 3Н, СН3О), 3,80 (дд, 12,5 и 3,5 Гц, НC), 3,55 (дд, 12,5 и 4,3 и Гц, НD).

Пример 2. 200,0 г измельченных плодов расторопши пятнистой заливают 80% этиловым спиртом в соотношении 1:9 и настаивают в течение 24 ч, затем экстракцию сырья осуществляют 80% этиловым спиртом при нагревании в течение 30 мин 2 раза, Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.

Выход целевого продукта - индивидуального 2,3-дегидросилибина составляет 0,2 г или 0,09% от массы воздушно-сухого сырья.

Пример 3. 200,0 г измельченных плодов расторопши пятнистой заливают 80% этиловым спиртом в соотношении 1:11 и настаивают в течение 24 ч, затем экстракцию сырья осуществляют 80% этиловым спиртом при нагревании в течение 30 мин 2 раза. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.

Выход целевого продукта индивидуального 2,3-дегидросилибина составляет 0,2 г или 0,1% от массы воздушно-сухого сырья.

Изучение запредельных параметров, а именно использование хроматографии и рeхроматографии на одном и том же сорбенте - на полиамиде или силикагеле - не приводит к получению целевого продукта, а осуществление экстракции 75 и 85% этиловым спиртом, а также в соотношении сырье-экстрагент (1:8) приводит к снижению выхода 2,3-дегидросилибина до 0,6, 0,7 и 0,75% соответственно.

Следовательно, оптимальными параметрами способа получения являются экстракция 80% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент в интервале 1: 8-1:10 с последующим хроматографическим разделением экстрактивных веществ на полиамиде и силикагеле и кристаллизацией целевого продукта из водного спирта.

Таким образом, использование заявляемого способа получения 2,3-дегидросилибина дает следующие преимущества:
1. Использование в заявляемом способе 80% этилового спирта позволяет исчерпывающе извлекать целевой продукт (2,3-дегидросилибин) из плодов расторопши пятнистой.

2. Заявляемый способ позволяет в 9-10 раз увеличить выход целевого продукта из плодов расторопши пятнистой по сравнению с прототипом.

3. Заявляемый способ позволяет по-новому трактовать вклад БАС препаратов на основе плодов расторопши пятнистой, что, в свою очередь, создает предпосылки для формирования новой концепции создания лекарственных средств на основе сырья данного растения, заключающейся в учете антиоксидантных свойств 2,3-дегидросилибина и, следовательно, в необходимости коррекции традиционных технологий, предполагающих получение очищенной силимариновой суммы.

Похожие патенты RU2209063C1

название год авторы номер документа
СРЕДСТВО "СИЛИБОХОЛ" ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕПАТИТОВ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 1998
  • Куркин В.А.
  • Лебедев А.А.
  • Авдеева Е.В.
  • Запесочная Г.Г.
  • Симонова Г.В.
  • Лебедев П.А.
  • Суздальцев А.А.
  • Рощупкин В.И.
  • Юрченко Н.Г.
  • Попова Л.Л.
RU2139722C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТОРОПШИ ЭКСТРАКТА СУХОГО 2009
  • Куркин Владимир Александрович
  • Авдеева Елена Владимировна
  • Рыжов Виталий Михайлович
  • Мизина Прасковья Георгиевна
  • Лужнов Николай Данилович
  • Алексенко Павел Владимирович
  • Грядунов Павел Евгеньевич
RU2424818C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА ИЗ ОБЕЗЖИРЕННЫХ ПЛОДОВ РАСТОРОПШИ ПЯТНИСТОЙ 1998
  • Куркин В.А.
  • Лебедев А.А.
  • Авдеева Е.В.
  • Запесочная Г.Г.
  • Симонова Г.В.
  • Первушкин С.В.
  • Егоров В.А.
RU2139724C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА РАСТОРОПШИ ПЯТНИСТОЙ 1996
  • Куркин В.А.
  • Лебедев А.А.
  • Авдеева Е.В.
  • Запесочная Г.Г.
  • Первушкин С.В.
  • Симерзина Л.В.
  • Булатова М.В.
RU2102999C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИРОПА РАСТОРОПШИ ПЯТНИСТОЙ 2016
  • Куркин Владимир Александрович
  • Росихин Данил Владимирович
  • Рыжов Виталий Михайлович
  • Лужнов Николай Данилович
RU2647452C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАСЛА РАСТОРОПШИ ПЯТНИСТОЙ, ОБЛАДАЮЩЕГО РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ 1997
  • Ахтемиров Е.В.
  • Куркин В.А.
  • Лебедев А.А.
  • Лебедев П.А.
  • Первушкин С.В.
  • Авдеева Е.В.
  • Браславский В.Б.
  • Симерзина Л.В.
  • Булатова М.В.
  • Кантария Е.В.
RU2129873C1
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО "РАСТОСПИР", ОБЛАДАЮЩЕЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ, ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМ И АНТИОКСИДАНТНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ ДОБАВКА НА ЕГО ОСНОВЕ 1999
  • Первушкин С.В.
  • Тархова М.О.
  • Ахтемиров Е.В.
  • Куркин В.А.
  • Лазарев В.Н.
  • Сохина А.А.
  • Лапчук О.А.
  • Суздальцев А.А.
RU2162705C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО НООТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2005
  • Куркин Владимир Александрович
  • Дубищев Алексей Владимирович
  • Ежков Владимир Николаевич
  • Титова Ирина Николаевна
RU2288733C1
СПОСОБ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ РАСТОРОПШИ ПЯТНИСТОЙ 1996
  • Быков В.А.
  • Глызин В.И.
  • Климахин Г.И.
  • Тареева Н.В.
  • Сокольская Т.А.
  • Давыдова В.Н.
  • Громакова А.И.
  • Колхир В.К.
  • Багинская А.И.
  • Вичканова С.А.
  • Пименов К.С.
  • Вандышев В.В.
  • Лужнов Н.Д.
  • Гладышев Ю.А.
  • Малахов А.И.
  • Семикин В.В.
  • Коржова Л.П.
  • Кузнецова Н.В.
RU2099076C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АППЛИКАЦИОННОГО СРЕДСТВА 2001
  • Мизина П.Г.
  • Куркин В.А.
  • Быков В.А.
  • Чертова Е.Н.
RU2179456C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 209 063 C1

Реферат патента 2003 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИОКСИДАНТНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Для экстракции плодов расторопши пятнистой используют 80% этиловый спирт при отношении сырье:экстрагент 1:9-1:10. При последовательном хроматографическом разделении экстрактивных веществ на полиамиде и силикагеле с использованием градуентной элюентной смеси вода - этиловый спирт и хлороформ - этиловый спирт - соответственно в отношениях 100:0; 98:2; 97:3; 95:5; 93:7 получают целевой продукт после кристаллизации. Изобретение позволяет увеличить выход целевого продукта. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 209 063 C1

Способ получения 2,3-дегидросилибина из плодов расторопши пятнистой (Silybum marianum (L.) Gaertn.), включающий экстракцию органическими растворителями, в том числе этиловым спиртом, хроматографическое разделение и кристаллизацию, отличающийся тем, что способ осуществляют с использованием 80% этилового спирта при отношении сырье - экстрагент 1:9-1:10 и последовательного хроматографического разделения сначала на полиамиде с использованием элюентной смеси вода - этиловый спирт и затем на силикагеле с использованием смеси хлороформ - этиловый спирт соответственно в отношениях 100:0,98,:2,97: 3,95:5,93:7.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2003 года RU2209063C1

Ind
J.Chem
Контрольный висячий замок в разъемном футляре 1922
  • Назаров П.И.
SU1972A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИФЕНОЛОВ, ОБЛАДАЮЩИХ ГЕПАТОЗАЩИТНОЙ, ЖЕЛЧЕГОННОЙ, АНТИОКСИДАНТНОЙ И АНАЛЕПТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ 1992
  • Гужва Н.Н.
  • Пшуков Ю.Г.
  • Саркисов Л.С.
  • Ивашев М.Н.
  • Колпак А.М.
RU2018315C1
Лекарственные препараты зарубежных фирм в России
- М.: Астрафармсервис, 1993, с.350.

RU 2 209 063 C1

Авторы

Куркин В.А.

Лебедев А.А.

Запесочная Г.Г.

Авдеева Е.В.

Волоцуева А.В.

Булатова М.В.

Батаков Е.А.

Лебедева Е.А.

Лебедев П.А.

Даты

2003-07-27Публикация

2002-02-08Подача