ЭКСТРАКТ ОКОЛОПЛОДНИКА ZANTHOXYLUM BUNGEANUM, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ И КОСМЕТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 2003 года по МПК A61K7/15 A61K7/42 A61K9/08 A61K35/78 A61P17/04 A61P17/16 A61P29/00 

Настоящее изобретение относится к новому экстракту, полученному с помощью экстракции околоплодника Zanthoxylum bungeanum диоксидом углерода и к фармацевтическим и косметическим составам, содержащим его. Этот экстракт обладает противовоспалительным и болеутоляющим действием и может использоваться при лечении зуда.

Околоплодник Zanthoxylum bungeanum традиционно используется в Китае в качестве пищевой пряности. Кроме того, в китайской и индийской народной медицине данная часть растения используется в качестве местного анестезирующего средства и для лечения дизентерии. Эфирное масло, которое содержит ряд монотерпенов, таких как 1,8-цимол, линалоол, 4-терпинол, кариофилен, лимонен и т.п., описывается как сильный репеллент против насекомых.

Недавно в ЕР 568001 была описана антивирусная активность кожуры данного фрукта.

В патенте США 5137912 раскрывается, что хелкритрин, выделенный из коры корня Zanthoxylum simulans (синоним bungeanum), эффективен для предотвращения тромбоза. Согласно JP 01294657 экстракция околоплодника (или перикарпа) органическими растворителями дает экстракт, содержащий изобутиламиды, оказывающий местное анестезирующее действие уже через 30 секунд после нанесения на язык и продолжающееся вплоть до 20-80 минут.

В настоящее время неожиданно обнаружено, что экстракт околоплодника Zanthoxylum bungeanum, полученный экстракцией диоксидом углерода в сверхкритических условиях, обладает заметной болеутоляющей активностью без оказания локального анестезирующего действия, характерного для экстрактов, получаемых при помощи растворителей. Продукт настоящего изобретения получают экстракцией околоплодника Zanthoxylum bungeanum, тонко измельченного или трансформированного в гранулы, диоксидом углерода при давлении от 150 до 300 бар (1,5•10⁴ кПа - 3,0•10⁴ кПа), предпочтительно при 180-230 бар (1,8•10⁴-2,3•10⁴ кПа), при температуре от 35 до 55^oС, предпочтительно при 35-40^oС.

Полученный экстракт может или использоваться как таковой после удаления экстракционной воды или дополнительно очищаться разделением его несмешиваемыми растворителями, такими как алифатические спирты и алифатические углеводороды, предпочтительно н-гексан или петролейный эфир.

Полученные экстракты, как оказалось, обладают ярко выраженной анальгетической или болеутоляющей активностью при применении людям подкожно; поэтому они являются ценными для использования как в фармацевтической, так и в косметической областях.

В фармацевтической области они полезны для облегчения боли при диабетической микроангиопатии, при геморроидальных болях, ожогах и при любых формах локальной боли. Дополнительным применением экстрактов согласно изобретению является лечение зуда.

В косметической области экстракты согласно изобретению полезны в депиляторных кремах, составах для применения после загара, лосьонах и кремах для бритья и при всех обработках кожи, требующих локального болеутоляющего или противозудного действия.

Противозудная активность экстрактов согласно изобретению оценивали с помощью электрофизиологических измерений при использовании экспериментальной модели ин витро препарата седалищный нерв - длинная мышца-разгибатель (экстензор) пальцев (extensor digitorum longus (EDL) крысы.

Использовали взрослых Sprague-Dawley крыс, умерщвленных при помощи внутрисердечной передозировки пентотала (Penthotal). EDL мышца с длинным участком седалищного нерва рассекалась и помещалась в контейнер для электрофизиологических исследований с раствором Рингера (Ringer), который заменяли каждые 10 минут. Тестируемые экстракты, предпочтительно с добавленным поверхностно активным веществом, диспергировали в различных концентрациях, таким образом, приводя в контакт с нервными волокнами, нервно-мышечными соединениями и мышцей. Для электрофизиологических опытов внутриклеточный микроэлектрод, заполненный 3М КСl, помещали в клетки мышцы для регистрации электрических явлений (малых потенциалов концевой пластинки, потенциалов концевой пластинки, мембранных потенциалов мышечной клетки) как спонтанных, так и вызванных стимуляцией нерва. Для данной цели нерв соединяли со стимулятором и необязательно стимулировали один раз в секунду. Электрические явления в мышечных клетках детектировали при помощи микроэлектрода, соединенного с усилителем сигнала и визуализировали при помощи цифрового электронно-лучевого осциллографа.

Экстракты согласно изобретению при испытании с концентрациями, изменяющимися от 0,0005 до 0,002%, оказывали сильное транзиторное активирующее действие на нервно-мышечную синаптическую передачу, о чем свидетельствует увеличение частоты малых потенциалов концевой пластинки и появление спонтанных потенциалов концевой пластинки. Наоборот, экстракты, полученные при помощи растворителей, обладающие местным анестезирующим действием, уменьшали и ингибировали передачу нервного импульса.

Болеутоляющее действие исследуемых экстрактов оценивали на 10 здоровых добровольцах с помощью оценки термической чувствительности кожи.

Постепенно нагреваемый термический зонд помещали в область лопатки субъекта через 30 минут после обработки исследуемым продуктом или соответствующим плацебо. Измерялась величина температуры, воспринимаемая субъектом как болезненная. Вводили 0,5 мл эмульсии, приготовленной согласно примеру VII, содержащей 0,5% экстракта Zanthoxylum bungeanum, полученного согласно примеру I. Представленные в табл.1 результаты показывают болеутоляющее действие исследуемого экстракта.

Экстракты согласно изобретению могут изготавливаться в форме кремов, лосьонов, пен, гелей для нанесения на кожу или слизистые, мягких желатиновых капсул, твердых желатиновых капсул, таблеток и суппозиториев; предпочтительно экстракт согласно изобретению изготавливается в виде кремов или пен для обработки кожи или в виде мягких желатиновых капсул, жевательных таблеток или суппозиториев для системного использования.

Дозировки экстракта в готовых формах препаратов изменяются между 5 и 100 мг на дозу в препаратах для системного использования, тогда как в случае препаратов для местного применения они изменяются от 0,05 до 1%.

Примеры, представленные здесь ниже, дополнительно иллюстрируют данное изобретение, не ограничивая его.

Пример I. Получение липофильного экстракта Zanthoxylum bungeanum.

10 кг околоплодника Zanthoxylum bungeanum экстрагировали согласно процедуре, описанной ниже, в 25 л экстракционной установке для сверхкритического газа, оснащенной двумя сепараторами в качестве конденсоров для фракционирования экстракта.

10 кг околоплодника, механически высушенного после сбора при температуре не выше чем 60^oС, экструдировали в форме кубиков и экстрагировали СО₂ в сверхкритических условиях при следующих условиях эксперимента:
- температура: 35^oС в экстракторе, 30^oС в первом сепараторе и 20^oС во втором сепараторе;
- давление: 180 бар (1,8•10⁴ кПа) в экстракторе, 100 бар (1,0•10⁴ кПа) в первом сепараторе и 50 бар (0,5•10⁴ кПа) во втором сепараторе.

Поток СО₂ составлял 10 л в минуту в течение 45 минут. Экстракт концентрировали во втором сепараторе, тогда как наибольшую часть воды, присутствующую в растительном матриксе, концентрировали в первом сепараторе. После сушки экстракта под вакуумом во втором сепараторе при температуре не выше 40^oС получали 1,5 кг пастообразного экстракта, который был слабо окрашен в желтый цвет, имел сильный запах и содержание изобутиламидов примерно 25 вес. %. Анализ HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография) проводили на Hibar RT LiChrospher 100RP-18 колонке с профилем элюирования (1 мл/мин) представленным в табл.2. Инъецируемое количество составляло 5 мкл раствора с концентрацией 2 мг/мл. Хроматограмма представлена на чертеже.

Пример II. Получение липофильного экстракта Zanthoxylum bungeanum.

10 кг околоплодника, механически высушенного после сбора при температуре не выше 60^oС, экструдировали в форме кубиков и экстрагировали CO₂ в сверхкритических условиях при следующих условиях эксперимента:
- температура: 40^oС в экстракторе, 30^oС в первом сепараторе и 20^oС во втором сепараторе;
- давление: 205 бар (2,05•10⁴ кПа) в экстракторе, 100 бар (1,0•10⁴ кПа) в первом сепараторе и 50 бар (0,5•10⁴ кПа) во втором сепараторе.

Поток СО₂ составлял 10 л в минуту в течение 45 минут. Экстракт концентрировали во втором сепараторе, тогда как наибольшую часть воды, присутствующую в растительном матриксе, концентрировали в первом сепараторе. После сушки экстракта под вакуумом во втором сепараторе при температуре не выше 40^oС получали 1,5 кг пастообразного экстракта, который был слабо окрашен в желтый/зеленый цвет и имел те же физико-химические характеристики, что и экстракт из примера I, и содержание изобутиламидов примерно 20 вес.%.

Пример III. Получение липофильного экстракта Zanthoxylum bungeanum.

10 кг околоплодника, механически высушенного после сбора при температуре не выше 60^oС, экструдировали в форме кубиков и экстрагировали СО₂ в сверхкритических условиях при следующих условиях эксперимента: температура в экстракторе 40^oС и давление 230 бар (2,3•10⁴ кПа). Соотношение СО₂, использованного для экстракции экстрагируемого лекарственного средства, составляло 27-45 кг на кг лекарственного средства. Экстракт концентрировали в сепараторе при 50 бар (0,5•10⁴ кПа) при 20^oС. После сушки экстракта под вакуумом во втором сепараторе при температуре не выше 40^oС, получали 1,3 кг пастообразного экстракта, который был слабо окрашен в желтый/зеленный цвет и имел те же физико-химические характеристики, что и экстракт из примера I.

Пример IV. Получение очищенного липофильного экстракта Zanthoxylum bungeanum.

0,5 кг липофильного экстракта околоплодника Zanthoxylum bungeanum, приготовленного согласно примеру I, растворяли в 2,5 л 95% водного метанола и экстрагировали 3 раза каждый раз 0,5 л н-гексана. Гексановую фазу промывали противотоком метанола с использованием в качестве маркера изобутиламидов, которые должны оставаться в метанольной фазе. Неактивную гексановую фазу удаляли, тогда как метанольные фазы объединяли, разбавляли 0,6 л воды и повторно экстрагировали дважды 0,6 л н-гексана. Объединенные гексановые фазы обесцвечивали 0,3% древесным углем, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали до масла при температуре не выше 40^oС под вакуумом, получая 0,22 кг маслянистого экстракта медообразной консистенции, имеющего содержание изобутиламидов примерно 50%.

Пример V. Спиртовой раствор Zanthoxylum bungeanum.

100 мл содержит, г:
Zanthoxylum bungeanum 20% раствор в олеиловом спирте - 0,50
Циклометикон - 20,00
Этиловый спирт - 100,0 мл
Пример VI. Неспиртовой раствор Zanthoxylum bungeanum.

100 мл содержит, г:
Zanthoxylum bungeanum 20% раствор в олеиловом спирте - 0,50
PPG-26 Buteth 26 и PEG-40 гидрированное касторовое масло - 5,00
Метилхлоризотиазолинон и Метилизотиазолинон - 0,10
Очищенная вода в необходимом количестве до - 100,0 мл
Пример VII. Эмульсия Zanthoxylum bungeanum.

100 г содержит, г:
Zanthoxylum bungeanum 20% раствор в олеиловом спирте - 0,50
Изогексадекан - 5,00
Глицерин - 4,00
C_12-15 алкилбензоат - 2,00
Циклометикон - 2,00
PEG-20 глицерилстеарат и Глицерилстеарат - 2,00
Ланолиновый воск - 1,00
Акрилаты/С_10-30 алкилакрилатный сополимер - 0,50
Цетиловый спирт - 0,50
Имидазолидинилмочевина - 0,30
Феноксиэтанол - 0,50
Метилпарабен - 0,20
Токоферол - 0,10
Динатриевая соль EDTA (этилендиамин тетрауксусная кислота) - 0,10
Вода сколько необходимо - До 100,0 мл
Пример VIII. Жидкая эмульсия Zanthoxylum bungeanum.

100 г содержит, г:
Zanthoxylum bungeanum 20% раствор в олеиловом спирте - 0,50
PEG-20 глицерилстеарат и Глицерилстеарат - 10,00
С_10-18 триглецириды - 10,00
Глицерин - 5,00
Масло из проростков пшеницы - 2,00
Диметикон - 2,00
PPG-25 Laureth-25 - 2,00
Цетиловый спирт - 1,00
Гидроксилированный ланолин - 0,50
Имидазолидинилмочевина - 0,30
Гекторит (е) Гидроксиэтил - 0,50
Феноксиэтанол и метилпарабен, и этилпарабен, и пропилпарабен, и бутилпарабен - 0,50
Токоферол - 0,10
Вода сколько необходимо - До 100,0 мл0

Изобретение относится к медицине и касается экстракта из Zanthoxylum bungeanum, получаемый с помощью экстракции его околоплодника сверхкритическим СО₂, обладающим анальгезирующей активностью, экстракт применяют при лечении зуда. Изобретением также являются фармацевтическая и косметическая композиции на основе предложенного экстракта. 3 с. и 2 з.п.ф-лы, 2 табл., 1 ил.

1. Экстракт околоплодника Zanthoxylum bungeanum, обладающий анальгезирующей активностью, полученный экстракцией сверхкритическим СО₂. 2. Экстракт по п. 1, получаемый экстракцией СО₂ при температуре в интервале от 35 до 55^o, и под давлением в интервале от 150 до 300 бар (от 1,5•10⁴ до 3,0•10⁴ кПа). 3. Экстракт по п. 1, содержащий по весу от 20 до 50% изобутиламидов. 4. Фармацевтическая композиция, обладающая анальгезирующей активностью, содержащая в качестве активного ингредиента экстракт по п. 1 в смеси с подходящими эксципиентами. 5. Косметическая композиция, обладающая анальгезирующей активностью, содержащая в качестве активного ингредиента экстракт по п. 1 в смеси с подходящими эксципиентами.