СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРФЕРМЕНТЕМИИ ПРИ НАРУШЕНИИ ВНЕШНЕСЕКРЕТОРНОЙ ФУНКЦИИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в лечении заболеваний поджелудочной железы.

Своевременное определение нарушения ферментопродукции поджелудочной железой, диагностика гиперферментемии (выброс липазы, амилазы, трипсина) продолжают вызывать затруднения в практике врачей различных специальностей (терапевтов, гастроэнтерологов, хирургов, эндокринологов и др.).

Нередко приступ острого панкреатита своевременно не распознается, а трактуется как клиника острого живота, обусловленная перфорацией язвы желудка, приступом острого холецистита, острого аппендицита, кишечной непроходимости. Это приводит к тактическим ошибкам (Хендерсон Дж. Патофизиология органов пищеварения. - С. -Петербург, 1997, с.197-224). Нарушение внешней секреции поджелудочной железы (ПЖ) может наблюдаться и при хроническом панкреатите, а также при других заболеваниях органов желудочно-кишечного тракта, при которых вторично страдает ПЖ, при развитии осложнений после операций на ПЖ и близлежащих органах. Известны случаи нарушения внешней секреции ПЖ (в первую очередь, увеличение содержания в крови ферментов липазы, амилазы, трипсина) при кардиоваскулярном шунтировании, трансплантации сердца, почек.

Нарастание болевого синдрома при остром панкреатите и обострении хронического панкреатита сопровождается повышением содержания в крови ферментов амилазы, липазы, трипсина (Циммерман Я.С. Хронический панкреатит. Методические рекомендации. - Пермь, 1990; Логинов А.С., Сперанский М.Д., Асташенкова К. Ю. Скрининговые методы экспресс-диагностики заболеваний печени и поджелудочной железы. Методические рекомендации. - М., 1987; Григорьев П.Я., Яковенко Э.П. Диагностика и лечение болезней органов пищеварения. - М.: Медицина, 1996).

Диагностика гиперферментемии позволяет получить ценную информацию о нарушении внешней секреции поджелудочной железы. Наиболее важным в диагностическом процессе является исследование содержания ферментов в плазме сыворотки крови (СК), определение содержания α-амилазы, липазы, трипсина. α-амилаза образуется поджелудочной железой, слюнными железами. Гиперамилаземия наблюдается при многих заболеваниях, но наиболее выражена при остром панкреатите.

Липаза катализирует расщепление глицеридов, высших жирных кислот. Она образуется в поджелудочной железе, легких, кишечнике. Повышение активности сывороточной липазы может быть следствием патологии поджелудочной железы, легких, кишечника, желудка, лейкоцитарного ростка крови.

Трипсин вырабатывается в поджелудочной железе, из которой в составе поджелудочного сока (в виде трипсиногена) поступает в двенадцатиперстную кишку и участвует в переваривании белков пищи. При поражении поджелудочной железы активность трипсина резко повышается, особенно при остром панкреатите.

Диагностику нарушения ферментообразовательной функции поджелудочной железы осуществляют путем количественного определения содержания ферментов в сыворотке крови - α-амилазы, липазы, трипсина, а также и в других биологических жидкостях. При этом используют различные способы количественного определения ферментов (Медицинские лабораторные технологии. Справочник. Т.2. - С. -Петербург, 1999; Биохимические методы исследования в клинике. - М., 1969).

Активность липазы определяют в большинстве способов на основании титрометрического определения количества освободившихся под действием фермента жирных кислот. Эти способы отличаются используемым субстратом: оливковое масло, твин, тербутирин (Биохимические методы исследования в клинике. Справочник. - М., 1969, с.186-191).

Недостатком этих способов является их невысокая специфичность, т.к. эти субстраты гидролизируются не только липазой, но и другими эстеразами печеночного происхождения.

Титрометрический способ определения липазы основан на титровании жирных кислот, освобождающихся в результате ферментативного гидролиза, фотометрический - связан с введением в реакционную смесь особых реактивов. В качестве унифицированого способа используют турбидиметрический, в котором в качестве субстрата используют оливковое масло (Справочник. Медицинские лабораторные технологии. Т.2. - С.-Петербург, 1999, с.39-41).

Принцип: спектрофотометрическое определение изменения мутности суспензии оливкового масла под действием липазы.

Реактивы: оливковое масло, оксид алюминия, сульфат меди, этиловый спирт, натриевая соль дезоксихолевой кислоты, соляная кислота.

Специальное оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой.

Ход определения: Перед определением исследуемую сыворотку крови и реактивы прогревают до температуры измерения. В кювету приливают 3 мл рабочей эмульсии оливкового масла, добавляют 0,1 мл сыворотки крови, смешивают (без встряхивания) и ставят в термостат при 30^oС или 37^oС, через 2 минуты измеряют экстинкцию (Е1) против дистилированной воды или воздуха при длине волны 340 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм, затем кювету снова помещают в термостат при той же температуре и через 5 минут измеряют экстинкцию (Е2), рассчитывая ΔЕ за 1 мин. Расчет активности липазы производят по формуле

Недостатки способа:
- нарушение нативности СК (подогревание, соединение с реактивом);
- использование реактивов, требующих дополнительной обработки;
- применение дорогостоящей аппаратуры;
- косвенное определение наличия липазы.

Трипсин определяют в сыворотке крови путем определения его активности по Эрлангеру с сотр. в модификации В.А. Шорникова (Биохимические методы исследования в клинике. - Л., 1969, с.206-208). Способ основан на расщеплении трипсином синтетического бесцветного субстрата - бензоиларгинин-р-нитроанилид - с образованием окрашенного р-нитроанилина, количество которого определяют калибриметрически.

Недостаток способа:
- использование реактивов сопровождается трудоемкостью и дороговизной способа;
- использование спектрофотометра;
- проведение расчетов;
- нарушение нативности сыворотки крови;
- недостоверность результатов.

Наиболее распространено в последнее время определение трипсина с помощью набора Био-LA СНЕМА-тест (Kasafirek Е., Chavko M., Bartik M.: Coll. Czechisiov. Chem. Commum. 36, 4070, 1971) - фотометрическим способом. В основе способа лежит способность трипсина гидролизировать хромогенный субстрат. N-альфа-тозил-L-аргинин-4-нитроанилид. Образовавшийся 4-нитроанилид определяют фотометрически (кинетический способ).

Кинетический способ.

Реактивы: трис буфер 3,4 ммоль, хлорид кальция 1,7 ммоль/флакон, субстрат L-тара 10 ммоль/л, стандартный раствор 4-нитроанилин 500 мкмоль/л.

Состав инкубационной смеси:
Трис буфер, рН 8,2 (25^oС) - 40,6 ммоль/л,
L-TAPA - 0,94 ммоль/л,
СaCl - 20,6 ммоль/л.

Объемное соотношение сыворотка:инкубационная смесь - 1:16.

Вспомогательный реактив:
раствор уксусной кислоты - 1,75 ммоль/л.

Ход определения:
1. Готовят буферный раствор с реактивом.

2. Готовят рабочий раствор (смешивают реактив - 1 доля реактива 2 и 9 долей буферного раствора).

Измеряют оптическую плотность в интервале 30-90 секунд и вычисляют изменение оптической плотности за минуту (ΔА).

Измеряют оптическую плотность стандарта против бланка (А2).

Расчет по формуле

Недостатки способа:
1. Нарушение нативности сыворотки.

2. Использование фотометра.

3. Приготовление рабочего и буферного растворов.

Способ определения активности α-амилазы
В биологических жидкостях делится на три основные группы:
1. Редуктометрические, основанные на определении образующихся из крахмала сахаров.

2. Амилокластические, основанные на определении количества нерасщепленного крахмала по его реакции с йодом.

3. Хромолитические, основанные на использовании комплексов субстрат-краситель, которые под действием α-амилазы распадаются с образованием водорастворимого красителя (Справочник. Медицинские лабораторные технологии. Т.2. - С.-Петербург, 1993, с.19 и 20).

Недостатки вышеупомянутых способов:
- использование субстратов;
- нарушение нативности сыворотки крови;
- использование косвенной реакции (крахмал+йод);
- трудоемкость и недостоверность.

Нами в качестве прототипа использован унифицированный амилокластический способ со стойким крахмальным субстратом (способ Каравея) (Справочник. Медицинские лабораторные технологии. Т.2. - С.-Петербург, 1999, с.20 и 21).

Принцип: α-амилаза гидролизует расщепление крахмала с образованием конечных продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Об активности α-амилазы судят по уменьшению интенсивности окраски.

Реактивы:
1. Бензойная кислота.

2. Гидрофосфат натрия (Na₂HPО₄).

3. Крахмал, растворимый для нефелометрии или по Lintner (выпускается специально в качестве субстрата).

4. 154 мМ (0,9%) раствор хлорида натрия: 9 г NaCl растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды в мерной колбе емкостью 1 л, затем доводят до метки.

5. Субстратно-буферный раствор, рН 7,0: 13,3 г гидрофосфата натрия и 2 г бензойной кислоты растворяют в 250 мл 154 мМ раствора хлорида натрия и доводят до кипения. Суспендируют 0,2 г растворимого крахмала в небольшом количестве холодной дистиллированной воды и вводят в кипящий буферный раствор. Кипятят 1 минуту, охлаждают и доводят объем дистиллированной водой до 500 мл. Субстратно-буферный раствор должен быть прозрачным, он стабилен при комнатной температуре в течение 10-12 дней.

6. Йодид калия (KI).

7. Йодат калия (KIO₃).

8. Фторид калия(КF).

9. Концентрированная HCl.

10. 0,01 н. раствор йода: 0,036 г KIО₃ + 0,45 г KI растворяют в 40 мл дистиллированной воды и медленно при помешивании добавляют 0,09 мл концентрированной НСl. 5 г фторида калия растворяют в 50 мл дистиллированной воды, фильтруют в мерную колбу, приливают 40 мл раствора йода и доливают дистилированной водой до объема 100 мл. Хранят в посуде из темного стекла. Годен в течение месяца. Если в рабочий раствор йода не добавляют фторид калия, то его следует готовить ежедневно из 0,1 н. раствора I.

Ход определения:
- 0,5 мл субстратно-буферного раствора помещают в пробирку, нагревают 5 минут при температуре 37^oС, добавляют 0,01 мл сыворотки крови.

- Инкубируют 7,5 минут при температуре 37^oС. Время инкубации необходимо точно отсчитывать по секундомеру с момента добавления биологической жидкости (сыворотки крови) в крахмальный субстрат. Тотчас же после инкубации добавляют 0,5 мл 0,01 н. раствора йода и доводят объем дистиллированной водой до 5 мл.

- Фотометрируют в кювете с длиной оптического пути 10 мм при длине волны N (3,3-8,9 мг/с л) 630-690 нм (красный светофильтр) против дистиллированной воды.

Производят расчет:
Активность α-амилазы выражают в миллиграммах или граммах 1 крахмала, гидролизованного 1 л биологической жидкости за 1 с инкубации при 37^oС.

Расчет производят по формуле
,
где А - активность α-амилазы, мг/с л;
Ек - экстинкция контрольной пробы,
Ео - экстинкция опытной пробы;
0,2 - количество крахмала, введенного в опытную и контрльную пробы, мг;
10⁵ - коэффициент пересечения на 1 литр сыворотки крови;
7,5•60 - коэффициент пересечения на 1 с инкубации.

Недостатки способа:
1. Трудоемкость.

2. Использование (приготовление) сложных реактивов.

3. Длительность исследования.

4. Воздействие токсических веществ.

5. Нарушение нативности исследуемого фермента.

6. Использование фотометра (сложность прибора).

7. Недостоверность определения.

Задачи:
1. Упростить способ приготовления пробы.

2. Повысить информативность за счет выделения микротипов кристаллов, характерных для селективной гиперферментемии.

3. Повысить точность и качество диагностики нарушения внешнесекреторной функции поджелудочной железы.

Сущность изобретения заключается в том, что для диагностики нарушения внешнесекреторной функции поджелудочной железы (гиперферментемии) сыворотку крови наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом, сушат при температуре 37-38^oС, выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 часа, затем последуют в проходящем свете и при наличии ячеистой или дендритной сеток - диагностируют гипертрипсинемию, субпараллельных ламелей - гиперамилаземию, пузырьковых камер с отростками - гиперлипаземию.

Способ осуществляется следующим образом:
1. Производят забор крови из вены - 3,0 мл, центрифугируют для получения сыворотки.

2. Сыворотку в виде капель объемом 0,01-0,02 мл каждая наносят на предметное стекло, накывают покровным стеклом.

3. Высушивают в термостате при температуре 37-38^oС на протяжении 1,5-2 часов.

4. Выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 часа.

5. Под микроскопом в проходящем свете изучают картину кристаллизации и при наличии в препарате кристаллов в виде ячеистой или дендритной сеток - диагностируют гипертрипсинемию, субпараллельных ламелей - гиперамилаземию, пузырьковых камер с отростками - гиперлипаземию.

Нами предварительно были обследованы эталонные кристаллограммы, для чего сыворотку крови здорового человека, помещенную в емкость из кварца, обогащали ферментами - амилазой, липазой, трипсином.

На фото 1 (а-г) представлены эталонные кристаллограммы (КГ) сыворотки крови здорового человека, обогащенной ферментами. КГ выполнены кристаллами в виде ячеистой сетки и дендритной сетки при пересыщении сыворотки крови (СК) ферментом - трипсином; модельный композит гипертрипсинемии, концентрация трипсина соответственно составила 1200 и 1800 ммоль/л, фото 1 (а, б); кристаллами из субпараллельных ламелей при пересыщении СК ферментом амилазой, модельный композит гиперамилаземии, концентрация амилазы составила 94 ммоль/л•ч, фото 1 в; кристаллами из пузырьковых камер с отростками при пересыщении СК ферментом липазой, модельный композит гиперлипаземии, концентрация липазы - 5,4 у.е., фото 1 г. Способ апробирован на 800 больных.

Примеры
Пример 1, фото 2 (а, в). Больной И., история болезни (ИБ) 1819. Диагноз: острый панкреатит. На фото 2 a-в приведены КГ сыворотки крови больного И., присутствуют пузырьковые камеры с отростками (а, б), дендритная сетка (в).

Технология: из вены больного И. осуществлен забор крови в количестве 3 мл, кровь отцентрифугирована для получения сыворотки. Капли СК (5) объемом 0,01 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую каплю накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 1,5 часов при температуре +37^oС. Препарат выдержали на открытом воздухе 2 часа, затем изучили в проходящем свете под микроскопом. Найдены кристаллы, представленные пузырьковыми камерами с отростками, дендритной сеткой. Одновременно в СК пациента определили уровень липазы и трипсина, которые оказались повышенными и составили соответственно - 3,4 у.е. (норма 0,8 у.е.), 630 ммоль/л (норма 220 ммоль/л).

Предполагаемая гиперферментемия (гиперлипаземия и гипертрипсинемия) подтвердилась.

Пример 2, фото 3 (а, б). Больная Ж., история болезни 9680. Диагноз: хронический рецидивирующий панкреатит, болевая форма. На фото 3 a, б приведена КГ сыворотки крови больной Ж., присутствуют дендритная сетка (а), субпараллельные ламели (б).

Технология: из вены больной Ж. взято 3 мл крови, которая отцентрифугирована для получения СК. Капли СК (3) объемом 0,02 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 2 чacoв пpи тeмперaтype +38^oС. Препарат выдержали на открытом воздухе 1,5 часа, затем микроскопировали. Обнаружили кристаллы - дентритную сетку и субпараллельные ламели. Одновременно в СК пациента определили уровень трипсина и амилазы, которые оказались повышенными и соответственно составили 780 ммоль/л (норма 220 ммоль/л) и 72 ммоль/л.ч. (норма 18,5 ммоль/л. ч. ). Предполагаемая гиперферментемия (гипертрипсинемия и гиперамилаземия) подтвердилась.

Пример 3, фото 4 (а, б). Больной Г., история болезни 10620. Диагноз: язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, осложненная рубцовой деформацией луковицы, подозрение на хронический панкреатит. На фото 4 а, б приведена КГ сыворотки крови больного Г., присутствуют дендритная сетка (а) и ячеистая сетка (б). Технология: из вены больного Г. взято 3 мл крови, которая отценрифугирована. Капли СК (4) объемом 0,02 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 2 часов при температуре +38^oС. Препарат выдержали на открытом воздухе 1,5 часа, затем изучили в проходящем свете. Найдены кристаллы - дендритная сетка и ячеистая сетка. Одновременно в СК пациента определили уровень трипсина, который оказался повышен и составил 630 ммоль/л (норма 220 ммоль/л). Предполагаемая гиперферментемия подтвердилась.

Пример 4, фото 5 (а, б). Больная М., история болезни 10972. Диагноз: хронический рецидивирующий панкреатит, стадия затухающего обострения, эрозивный рефлюкс-эзофагит, хронический гастродуоденит.

На фото 5 а, б приведены КГ сыворотки крови больной М., присутствуют пузырьковые камеры с отростками.

Технология: из вены больной М. произведен забор крови в количестве 3 мл, кровь центрифугирована. Капли СК (3) объемом 0,02 мл каждая нанесли на предметное стекло и высушили в термостате на протяжении 2 часов при температуре +38^oС. Препарат выдержали на открытом воздухе 2 часа, затем микроскопировали. Найдены кристаллы в виде пузырьковых камер с отростками. Одновременно в СК определили уровень липазы, который оказался повышенным и составил 2,1 у.е. (норма 0,8 у.е.). Предполагаемая гиперферментемия (гиперлипаземия) подтвердилась.

Пример 5, фото 6 (а, б). Больная О., история болезни 9418. Диагноз: хронический гастродуоденит, постхолецистэктомический синдром. Хронический панкреатит, болевая форма. На фото 6 а, б приведена КГ сыворотки крови больной О., присутствуют субпараллельные ламели (а) и ячеистая сетка (б).

Технология: из вены больной О. взяли 3 мл крови, которая отценрифугирована. Капли СК (5) объемом 0,01 мл каждая нанесли на предметное стекло, каждую каплю накрыли предметным стеклом и высушили в термостате при температуре +37^o С на протяжении 2 часов. Препарат выдержали на открытом воздухе 1,5 часа, затем микроскопировали. Найдены кристаллы - субпараллельные ламели и ячеистая сетка. Одновременно в СК определяли содержание амилазы и трипсина, которое оказалось повышенным и соответственно составило 28,5 ммоль/л. ч. и 290 ммоль/л. Предполагаемая гиперферментемия (гиперамилаземия и гипертрипсинемия) подтвердилась.

Пример 6, фото 7.

Больная В. , история болезни 1443. Диагноз: хронический гастродуоденит, хронический холецистит, подозрение на хронический панкреатит. На фото 7 приведена КГ сыворотки крови больной В., присутствует дендритная сетка.

Технология: капли СК больной В. нанесли на предметное стекло (5 капель), каждая объемом 0,02 мл. Каждую каплю накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 1,5 часов при температуре +38^oС. Образец выдержали на открытом воздухе 1,5 часа и изучили под микроскопом. Найдены кристаллы в виде дендритной сетки. Одновременно в СК определили уровень трипсина, который оказался повышен и составил 285 ммоль/л (норма 220 ммоль/л). Предполагаемая гиперферментемия (гипертрипсинемия) подтвердилась.

Пример 7, фото 8 (а, б). Больной Б., история болезни 9389.

Диагноз: язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки в стадии неполной ремиссии. Катаральный рефлюкс-эзофагит. Хронический рецидивирующий панкреатит, болевая форма. На фото 8 а, б приведена КГ сыворотки крови, присутствуют пузырьковые камеры с отростками (а) и субпараллельные ламели (б).

Технология: 4 капли СК больного Б., каждая объемом 0,01 мл, нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным стеклом и высушили в термостате при температуре +37^oС на протяжении 1,5 часов. Образец выдержали на открытом воздухе 1,5 часа и микроскопировали. Найдены кристаллы: пузырьковые камеры с отростками и субпараллельные ламели. Одномоментно в СК определили уровень липазы и амилазы, которые оказались повышены и составили соответственно 1,2 у. е. (норма 0,8 у.е.) и 39,8 ммоль/л.ч. (норма 18,5 ммоль/л.ч.) Предполагаемая гиперферментемия (гиперамилаземия и гиперлипаземия) подтвердилась.

Пример 8, фото 9 (а, б). Больной Ж., история болезни 13200. Диагноз: хронический панкреатит, период обострения. На фото 9 (а, б) приведены КГ сыворотки крови больного Ж., присутствуют субпараллельные ламели.

Технология: кровь из вены в количестве 3 мл взята у больного Ж., отцентрифугирована. Капли СК (4) каждая объемом 0,01 мл нанесли на предметное стекло. Каждую каплю накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 1,5 часов при температуре +38^oС. Образец выдержали на открытом воздухе 1,5 часа, затем исследовали под микроскопом в проходящем свете. Найдены кристаллы в виде субпараллельных ламелей. Одновременно определили в СК уровень амилазы, который оказался повышен и составил 45 ммоль/л.ч. Предполагаемая гиперферментемия (гиперамилаземия) подтвердилась, что свидетельствует о нарушении внешнесекреторной функции поджелудочной железы.

Пример 9, фото 10 (а, б). Больная Б., история болезни 12228. Диагноз: хронический панкреатит, стадия неполного обострения. Хронический эрозивный гастрит, катаральный бульбит. На фото 10 а, б приведена КГ сыворотки крови больной Б., видны субпараллельные ламели (а) и пузырьковые камеры с отростками (б). Технология: капли СК (3) больной Б. нанесли на предметное стекло, каждая объемом 0,01 мл. Каждую каплю накрыли покровным стеклом и высушили в термостате при температуре +37^oС на протяжении 1,5 часов. Образец выдержали на открытом воздухе 2 часа и микроскопировали. Найдены субпараллельные ламели и пузырьковые камеры с отростками. Одновременно в СК больной определили уровень амилазы и липазы, которые оказались повышены и соответственно составили 78 ммоль/л.ч. и 3,8 у.е. (норма амилазы - 18,5 ммоль/л.ч. и липазы - 0,8 y. e.). Предпологаемая гиперферментемия (гиперамилаземия и гиперлипаземия) подтвердилась.

Пример 10, фото 11. Больной Ш., история болезни 10767. Диагноз: язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки с локализацией язвы на задней стенке луковицы двенадцатиперстной кишки, НР-ассоциированная, стадия обострения. Реактивный панкреатит. На фото 11 приведена КГ сыворотки крови больного Ш, присутствуют субпараллельные ламели.

Технология: капли СК больного Ш. нанесли на предметное стекло (5 капель), каждая объемом 0,01 мл. Каждую каплю накрыли покровным стеклом и высушили в термостате на протяжении 2 часов при температуре +38^oС, образец держали на открытом воздухе 1,5 часа и микроскопировали. Найдены субпараллельные ламели. Одновременно в СК определили уровень амилазы, который оказался повышен и составил 48 ммоль/л.ч. (норма - 18,5 ммоль/л.ч.). Предполагаемая гиперферментемия (гиперамилаземия) подтвердилась.

Способ при осуществлении позволяет:
1. Упростить определение гиперферментемии.

2 Исключить использование сложных химических реактивов и приборов.

3. Снизить себестоимость диагностики.

4. Создает возможность проведения экспресс-диагностики нарушения внешнесекреторной функции поджелудочной железы.

5. Обеспечивает высокую информативность.

6. Повышает достоверность получения результатов.

Изобретение относится к медицине, а именно к методам диагностики. Сущность способа: исследуют сыворотку крови больного, нанесенную на предметное стекло, покрытую покровным и высушенную при 37-38^oС в течение 1,5-2 ч. Образовавшиеся в сыворотке крови больного кристаллы сопоставляют с кристаллами модельных композитов, которые предварительно получают путем обогащения сыворотки крови здорового человека ферментами трипсином, амилазой, липазой. При наличии кристаллов в виде ячеистой или дендритной сеток диагностируют гипертрипсинемию, при наличии субпараллельных ламелей - гиперамилаземию, при наличии пузырьковых камер с отростками - гиперлипаземию. Способ обеспечивает высокую информативность и достоверность. 11 ил., 1 табл.

Способ диагностики нарушения внешней секреторной функции поджелудочной железы, включающий исследование сыворотки крови больного, нанесенной на предметное стекло, покрытое покровным, высушенной 37-38^oС в течение 1,5-2 ч с последующим изучением кристаллов, отличающийся тем, что предварительно создают модельные композиты путем обогащения сыворотки крови здорового человека ферментами, с кристаллами которых сопоставляют кристаллы сыворотки крови больного, и осуществляют диагностику гиперферментемии: при наличии кристаллов в виде ячеистой или дендритной сеток диагностируют гипертрипсинемию, при наличии субпараллельных ламелей - гиперамилаземию, при наличии пузырьковых камер с отростками - гиперлипаземию.