БИКУНИН ЧЕЛОВЕКА (ВАРИАНТЫ), КОДИРУЮЩАЯ ЕГО ДНК И ВЕКТОР ЭКСПРЕССИИ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2003 года по МПК C07K14/81 C12N15/55 C12N15/81 C12N15/86 

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть). Т Т

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетической инженерии и может быть использовано в медицине. В ткани плаценты человека идентифицирован белок (бикунин), который содержит два домена, характерных для ингибиторов сериновых протеаз семейства Кунитца, и обладает ингибирующей активностью в отношении трипсина и плазмина человека, сравнимой с таковой апротинина, и значительно более выраженным, чем у апротинина, действием на калликреин. Определена кодирующая бикунин человека последовательность ДНК и аминокислотная последовательность белка; предложены векторы экспрессии, обеспечивающие возможность получения ингибитора в гетерогенных системах. Синтетическим и рекомбинантным методом получены различные фрагменты и производные бикунина, в том числе содержащие часть трансмембранного домена, которые сохраняют по крайней мере часть активности полноразмерного нативного белка. 5 с. и 1 з.п.ф-лы, 24 ил., 11 табл.

1. Существенно очищенный белок, обладающий ингибирующей активностью в отношении сериновых протеиназ, причем указанный белок характеризуется аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности нативного полноразмерного бикунина (SEQ ID No. 52) или производной указанной последовательности, которая выбрана из группы, состоящей из SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No. 6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 1 и SEQ ID No. 8, и наличием по меньшей мере одной внутрицепочечной дисульфидной связи.2. Существенно очищенный белок, содержащий последовательность нативного полноразмерного бикунина и по меньшей мере часть последовательности сигнального полипептида, причем указанный белок характеризуется аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 45, SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 49.3. Белок по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный белок гликозилирован.4. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая биосинтез и необязательно секрецию белка, обладающего ингибирующей активностью в отношении сериновых протеаз, которая выбрана из группы полинуклеотидных последовательностей, в соответствии с генетическим кодом определяющих аминокислотные последовательности белка по п.1 или 2.5. Рекомбинантный дрожжевой вектор экспрессии, характеризующийся наличием регуляторных элементов, обеспечивающих репликацию и экспрессию в дрожжах чужеродного фрагмента нуклеиновой кислоты, с которыми оперативно связана последовательность ДНК по п.4.6. Рекомбинантный бакуловирусный вектор экспрессии, характеризующийся наличием регуляторных элементов, обеспечивающих репликацию и экспрессию в клетке насекомого чужеродного фрагмента нуклеиновой кислоты, с которыми оперативно связана последовательность ДНК по п.4.