Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть). Т Тa
Изобретение относится к генной инженерии, а в частности к средствам генной терапии. Предложена совместимая двухкомпонентная система. Первый компонент содержит генную конструкцию, кодирующую распознающий клетки радикал, представляющий собой анти-СЕА антитело, и гетерологичный фермент - карбоксипептидазу, активирующий пролекарство. Второй компонент представляет собой пролекарство, преобразующееся в цитотоксическое лекарство ферментом карбоксипептидазой. Пролекарство выбрано из группы, представляющей собой N-(4-[N, N-бис(2-йодэтил)амино] феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты, гамма-(3,5-дикарбокси)анилида N-(4-[N, N-бис(2-хлорэтил)-амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты или N-(4-[N,N-бис-(2-хлорэтил)амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты, или их фармацевтически приемлемой соли. Кроме того, предложен способ доставки цитотоксического лекарства к месту назначения, предусматривающий введение млекопитающему-хозяину первого компонента системы, с последующим введением хозяину второго компонента. Предложенное изобретение позволяет проводить более селективную геннаправленную ферментативную пролекарственную терапию и снизить нежелательный эффект в нормальных тканях при ошибочной активации пролекарства. Изобретение может быть использовано в медицине для проведения противоопухолевой геннаправленной ферментативной пролекарственной терапии. 3 н. и 6 з.п.ф-лы., 6 ил.
1. Совместимая двухкомпонентная система, предназначенная для применения у млекопитающего-хозяина в качестве лекарственного средства, компоненты которой содержат (i) первый компонент, который содержит генную конструкцию, кодирующую распознающий клетки радикал, представляющий собой анти-СЕА антитело, выбранное из антитела А5В7 или антитела 806.077, и гетерологичный фермент, активирующий пролекарство, представляющий собой карбоксипептидазу, в котором генная конструкция способна экспрессировать распознающий клетки радикал и гетерологичный фермент, активирующий пролекарство, в клетке млекопитающего-хозяина в виде конъюгата и где конъюгат направлен на выход из клетки для селективной локализации на антигене клеточной поверхности, распознаваемом распознающим клетки радикалом, и (ii) второй компонент, который содержит пролекарство, которое может быть преобразовано в цитотоксическое лекарство карбоксипептидазой, кодируемой первым компонентом, где второй пролекарственный компонент выбран из N-(4-[N,N-бис(2-йод-этил)амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты, гамма-(3,5-ди-карбокси)анилида N-(4-[N,N-бис(2-хлорэтил)амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты или N-(4-[N,N-бис(2-хлорэтил)амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты или их фармацевтически приемлемой соли.2. Совместимая двухкомпонентная система по п.1, отличающаяся тем, что карбоксипептидазой является CPG2.3. Совместимая двухкомпонентная система по п.2, отличающаяся тем, что CPG2 содержит мутированные полипептидные сайты гликозилирования для предотвращения или снижения гликозилирования при экспрессии в клетках млекопитающих.4. Совместимая двухкомпонентная система по п.2 или 3, отличающаяся тем, что конъюгат антитело-фермент CPG2, экспрессирующийся генной конструкцией, является гибридным белком, в котором фермент присоединен к С-концу антитела через его тяжелую или легкую цепь, в результате чего при экспрессии может иметь место димеризация кодируемого конъюгата через домен димеризации CPG2.5. Совместимая двухкомпонентная система по п.4, отличающаяся тем, что экспрессирующийся гибридный белок образован посредством присоединения С-конца Fab тяжелой цепи антитела к N-концу молекулы CPG2 с получением Fab-CPG2, в результате чего при экспрессии две молекулы Fab-CPG2 димеризуются через CPG2 с образованием конъюгата (Fab-CPG2)2.6. Совместимая двухкомпонентная система, предназначенная для применения в качестве лекарственного препарата у млекопитающего-хозяина, компоненты которой содержат (i) первый компонент, который содержит генную конструкцию, кодирующую распознающий клетки радикал, представляющий собой анти-СЕА антитело, выбранное из антитела А5В7 или антитела 806.077, и гетерологичный фермент, активирующий пролекарство, представляющий собой карбоксипептидазу, в виде конъюгата в клетке млекопитающего-хозяина и где конъюгат направлен на выход из клетки для селективной локализации на антигене клеточной поверхности, распознаваемом распознающим клетки радикалом, и дополнительно содержит регулирующую транскрипцию последовательность, содержащую промотор и контрольный элемент, содержащий генный переключатель для контроля экспрессии генной конструкции; (ii) второй компонент, который содержит пролекарство, которое может быть преобразовано в цитотоксическое лекарство карбоксипептидазой, кодируемой первым компонентом, где второй пролекарственный компонент выбран из N-(4-[N,N-бис(2-йодэтил)-амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты, гамма-(3,5-дикарбокси)анилида N-(4-[N,N-бис(2-хлорэтил)амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты или N-(4-[N,N-бис(2-хлорэтил)амино]-феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты или их фармацевтически приемлемой соли.7. Совместимая двухкомпонентная система по п.6, отличающаяся тем, что регулирующая транскрипцию последовательность содержит контрольный элемент-генный переключатель, регулируемый наличием тетрациклина или экдизона.8. Совместимая двухкомпонентная система по п.6 или 7, отличающаяся тем, что промотор зависит от типа клеток и выбран из следующих промоторов: карциноэмбрионального антигена (СЕА); альфа-фетопротеина (AFP); тирозингидроксилазы; ацетилхолинтрансферазы; нейроспецифической енолазы; инсулина; глиального фибриллярного кислого белка; HER-2/neu; c-erbB2; и N-myc.9. Способ доставки цитотоксического лекарства к месту назначения, предусматривающий введение млекопитающему-хозяину первого компонента совместимой двухкомпонентной системы, определенного в любом из пп.1-8, с последующим введением хозяину второго пролекарственного компонента совместимой двухкомпонентной системы, выбранного из группы, состоящей из N-(4-[N,N-бис(2-йодэтил)амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты, гамма-(3,5-дикарбокси)анилида N-(4-[N,N-бис(2-хлорэтил)амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты или N-(4-[N,N-бис(2-хлорэтил)-амино]феноксикарбонил)-L-глутаминовой кислоты или их фармацевтически приемлемой соли.
