СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛ, СОДЕРЖАЩИХ ЖИВЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ Российский патент 2004 года по МПК A61K9/54 A61K31/79 

Описание патента на изобретение RU2220716C1

Изобретение относится к медицине, а именно к технологии лекарственных форм с бактерийными препаратами.

Для коррекции дисбиотических состояний в медицинской практике широко применяются различные препараты, созданные на основе живых штаммов микроорганизмов, входящих в состав нормальной флоры.

В последнее время различные исследователи уделяют большое внимание использованию микрокапсулированных форм бактерийных препаратов. Вещества, используемые в качестве инкапсулирующего покрытия для микроорганизмов должны обеспечивать их стабильность при длительном хранении и равномерное высвобождение при непосредственном применении во влажных средах организма.

Особый интерес вызывают микрокапсулированные формы лактобактерий, полученные на основе поливинилпирролидона. Этот полимер нетоксичен, не опасен для человека и микроорганизмов, разрешен для использования в медицинских целях. Он отличается хорошей растворимостью в неорганических растворителях, в том числе в воде, причем его растворимость не зависит от рН среды, что позволяет использовать его для получения микрокапсулированных форм лактобактерий, предназначенных для растворения в различных средах, в том числе и для производства микрокапсул для наружного применения (в виде присыпок).

Известен способ получения микрокапсулированных форм лактобактерий с помощью водных растворов сшитого или линейного поливинилпирролидона (патент США 5733568, НПК 424-422, 1998 г.). Суть его заключается в следующем: лиофилизированную культуру лактобактерий диспергируют при температуре около 0oС в растворе сшитого или линейного поливинилпирролидона при постоянном перемешивании, а затем проводят сшивку полимера дивинилбензеном. При этом бактерии берут с таким расчетом, чтобы в готовых микрокапсулах было не менее 103 бактерий в одной микрокапсуле.

При воспроизведении данного способа в условиях лаборатории выявлено, что количество жизнеспособных лактобактерий, сохранившихся в процессе микрокапсулирования и определенных после разрушения оболочки фосфатным буфером, составляет менее 104 в 1,0 грамме микрокапсул.

К недостаткам этого способа следует отнести высокий показатель потерь микроорганизмов в ходе технологического процесса, который достигает 104 клеток и более, и использование в качестве агента для сшивки полимера дивинилбензена, являющегося токсичным органическим реагентом. Применение этого вещества приводит, с одной стороны, к значительным потерям микроорганизмов в ходе процесса микрокапсулирования, с другой - представляет опасность для человека, т.к. является умеренно токсичным веществом.

Задачей изобретения явилось снижение потерь живых микроорганизмов и повышение безопасности процесса за счет исключения токсичных реагентов.

Поставленная задача была решена при использовании в качестве отверждающего агента такого природного вещества, как танин, получаемого из растительного сырья (сумах, скумпия и др.) и представляющего собой сумму полисахаридов, насыщенных полифенольными группами.

Для изготовления микрокапсул взята лиофилизированная культура лактобактерий, содержащая 108 клеток в 1,0 грамме.

Сущность изобретения состоит в том, что лиофилизированную культуру микроорганизмов (в чистом виде или на защитном носителе полисахаридной структуры) диспергируют при охлаждении в 30-50% водном растворе поливинилпирролидона с молекулярной массой 15000 (см. таблицу) в соотношении от 1:10 до 1: 15 по массе при перемешивании до образования взвеси, содержащей отдельные частицы требуемого размера. К полученной взвеси прибавляют раствор сшивающего агента (дубителя) - 10%-30% водный раствор танина (ГФX, ст.658). Смесь перемешивают в течение 30-180 минут, после чего отвержденные микрокапсулы собирают фильтрованием, промывают и сушат. Полученные микрокапсулы представляют собой частицы серо-желтого цвета размером от 10 до 200 мкм в зависимости от реологических параметров технологической смеси.

Изобретение иллюстрируется конкретными примерами, которые изложены ниже.

ПРИМЕР 1.

Для изготовления микрокапсул взята культура лиофилизированных лактобактерий штамма L.fermentum 90TS4, содержащая 108 живых клеток в 1,0 грамме.

Готовят 100,0 г 50%-го водного раствора поливинилпирролидона, процесс осуществляют при постоянном перемешивании. Затем в указанном растворе в течение 30 минут диспергируют 10,0 г лиофилизированных лактобактерий до образования однородной устойчивой суспензии (температура процесса 4oС). Параллельно при нагревании (водяная баня около 80oС) готовят 30%-й водный раствор танина в количестве 140 мл до получения прозрачного раствора красно-коричневого цвета. Раствор охлаждают до 4oС и через делительную воронку подают в рабочую суспензию со скоростью 1,8 мл/мин. Систему оставляют при постоянном перемешивании на 30 минут, а отвержденные микрокапсулы затем собирают фильтрованием, промывают и сушат. Полученные микрокапсулы представляют собой частицы серо-желтого цвета размером 50-150 мкм. Выход готовых микрокапсул составил 70,5%. Количество жизнеспособных лактобактерий определяли после разрушения полимерной оболочки микрокапсул в фосфатном буфере при рН 7,6-7,8 с последующим титрованием культуры и высевом лактобактерий на агаризованную среду МРС. В качестве контроля использовали стандартную культуру в аналогичных разведениях. Число жизнеспособных лактобактерий в данном примере составило 1,5•104 клеток в 1,0 грамме микрокапсул.

ПРИМЕР 2
Для изготовления микрокапсул взята культура лиофилизированных лактобактерий штамма L.fermentum 90TS4, содержащая 108 живых клеток в 1,0 грамме.

Готовят 120,0 г 40%-го водного раствора поливинилпирролидона, охлаждают до 4oС, затем к этому раствору добавляют 10,0 г лиофилизированных лактобактерий и перемешивают до образования однородной устойчивой суспензии. Через 30 минут в эту систему тонкой струей подают 50 мл 10%-го водного раствора танина, охлажденного до 4oС. Систему оставляют при постоянном перемешивании на 180 минут. По окончании перемешивания происходит осаждение отвержденных микрокапсул, их собирают фильтрованием, промывают и сушат. Полученные микрокапсулы представляют собой округлые частицы серо-желтого цвета размером 50-120 мкм. Выход микрокапсул составил 67,8%. Количество жизнеспособных лактобактерий определяли по методике, описанной выше. Число жизнеспособных лактобактерий при этом составило 4,5•104 клеток в 1,0 грамме микрокапсул.

ПРИМЕР 3
Для изготовления микрокапсул взята культура лиофилизированных лактобактерий штамма L.fermentum 90TS4, содержащая 10 живых клеток в 1,0 грамме.

Готовят 100,0 г 50%-го водного раствора поливинилпирролидона и охлаждают его до 4oС. 5,0 г лиофилизированных лактобактерий смешивают с 5,0 г инертного защитного носителя полисахаридной структуры и затем в течение 30 минут диспергируют в растворе ПВП до образования однородной устойчивой суспензии. Далее в эту систему тонкой струей подают 50 мл 10%-го водного раствора танина, охлажденного до 4oС. Систему оставляют при постоянном перемешивании на 60 минут. Отвержденные микрокапсулы собирают фильтрованием, промывают и сушат. Полученные микрокапсулы представляют собой сферические частицы серо-желтого цвета размером 10-150 мкм. Выход составил 75,9%. Количество жизнеспособных лактобактерий определяли по методике, описанной выше. Число жизнеспособных лактобактерий при этом составило 5,3•104 клеток в 1,0 грамме микрокапсул.

ПРИМЕР 4
Для изготовления микрокапсул взята культура лиофилизированных лактобактерий штамма L.fermentum 90TS4, содержащая 108 живых клеток в 1,0 грамме.

Готовят 75,0 г 30%-го водного раствора поливинилпирролидона, охлаждают его 4oС. В полученном растворе в течение 30 минут диспергируют 5,0 г лиофилизированных лактобактерий до образования однородной устойчивой суспензии. Затем в эту систему через делительную воронку подают 70 мл 30%-го водного раствора танина, охлажденного до 4oС со скоростью 1,8 мл/мин. Систему оставляют при постоянном перемешивании на 180 минут, после чего отвержденные микрокапсулы собирают фильтрованием, промывают и сушат. Полученные микрокапсулы представляют собой округлые частицы серо-желтого цвета размером 80-200 мкм. Выход готовых микрокапсул составил 64,7%. Количество жизнеспособных лактобактерий определяли по методике, описанной выше. Число жизнеспособных лактобактерий при этом составило 3,7•104 клеток в 1,0 грамме микрокапсул.

Похожие патенты RU2220716C1

название год авторы номер документа
Способ микрокапсулирования пробиотика ветоспорина 2023
  • Сеин Олег Борисович
  • Сеин Дмитрий Олегович
RU2815782C1
Способ получения микрокапсул пробиотика Ветом 1 2021
  • Сеин Олег Борисович
  • Сеин Дмитрий Олегович
  • Керимов Кирилл Базарович
  • Локтионова Евгения Александровна
RU2781792C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛИРОВАННЫХ ФОРМ ЛАКТОБАКТЕРИЙ 2000
  • Быков В.А.
  • Далин М.В.
  • Сомов Д.В.
  • Павлова Л.А.
RU2171672C1
Способ получения микрокапсулированного энзимспорина 2021
  • Сеин Олег Борисович
  • Сеин Дмитрий Олегович
  • Зорикова Антонина Александровна
  • Керимов Кирилл Базарович
RU2780885C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛ С БИФИДОБАКТЕРИЯМИ 2017
  • Вобликова Татьяна Владимировна
  • Иванов Вячеслав Владимирович
  • Просеков Александр Юрьевич
  • Зайка Яна Николаевна
RU2650645C1
Способ микрокапсуляции энзимспорина 2018
  • Трубников Денис Владимирович
  • Сеин Олег Борисович
  • Горобец Александр Юрьевич
  • Трубникова Евгения Александровна
RU2689164C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИАДГЕЗИВНОГО КОМПОНЕНТА НА ОСНОВЕ ЛЕКТИНСВЯЗЫВАЮЩИХ СТРУКТУР 2008
  • Анохина Ирина Викторовна
  • Далин Михаил Викторович
  • Ермолаев Андрей Владимирович
  • Кравцов Эдуард Георгиевич
  • Яшина Наталия Вячеславовна
RU2367686C1
СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА "ЭНЗИМСПОРИН" В ПРОЦЕССЕ МИКРОКАПСУЛЯЦИИ 2020
  • Белоус Александр Сергеевич
  • Трубников Денис Владимирович
  • Трубникова Елена Владимировна
  • Горобец Александр Юрьевич
  • Карташов Максим Игоревич
RU2736377C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛИРОВАННОЙ ФОРМЫ КОРЕВОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ 2001
  • Сандахчиев Л.С.
  • Нечаева Е.А.
  • Вараксин Н.А.
  • Рябичева Т.Г.
  • Колокольцова Т.Д.
  • Вилесов А.Д.
  • Станкевич Р.П.
  • Исидоров Р.В.
RU2210361C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКОДИСПЕРСНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ МАТЕРИАЛОВ 2009
  • Давыдкин Валерий Юрьевич
  • Давыдкин Игорь Юрьевич
  • Афанасьев Станислав Степанович
  • Алёшкин Владимир Андрианович
  • Мелихова Александра Вадимовна
  • Колесов Николай Валерьевич
RU2440105C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 220 716 C1

Реферат патента 2004 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛ, СОДЕРЖАЩИХ ЖИВЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ

Изобретение относится к медицине. Способ состоит в том, что лиофилизированную культуру лактобактерий покрывают оболочкой, которая содержит поливинилпирролидон, дубленный танином. В результате технологического процесса происходит формирование агрегатов макромолекул пленкообразователя. Способ обеспечивает лучшую выживаемость микроорганизмов в ходе технологического процесса за счет использования безопасных для макроорганизма и микроорганизмов ингредиентов. Микрокапсулированные лактобактерии могут быть затем помещены в различные лекарственные формы и использованы в комплексе с другими препаратами. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 220 716 C1

Способ получения микрокапсул, содержащих живые микроорганизмы, на основе поливинилпирролидона, отличающийся тем, что лиофилизированную культуру микроорганизмов диспергируют в 30-50% водном растворе поливинилпирролидона в соотношении 1:10 - 1:15 по массе при перемешивании до образования устойчивой взвеси, прибавляют 10-30% водный раствор танина, смесь перемешивают до формирования микрокапсул.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2004 года RU2220716C1

US 5733568 А, 31.03.1998
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДНОЙ СУСПЕНЗИИ МИКРОКАПСУЛ 1994
  • Ханс Вальтер Хэсслин
RU2126628C1
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ЗАМЕДЛЕННОГО ВЫСВОБОЖДЕНИЯ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ 1993
  • Сигеру Камеи
  • Йасутака Игари
  • Йасиаки Огава
RU2128055C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРОНХОЛИТИЧЕСКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ КОМПОЗИЦИИ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ТЕОФИЛЛИНА 1992
  • Чучалин А.Г.
  • Кеменова В.А.
  • Алексеев К.В.
  • Чепурная А.П.
  • Меликянц Л.М.
  • Харенко А.В.
  • Кабанов В.А.
RU2036642C1
МНОГОКОМПОНЕНТНАЯ ДОЗИРОВАННАЯ ФОРМА С КОНТРОЛИРУЕМЫМ ВЫДЕЛЕНИЕМ АКТИВНОГО ИНГРЕДИЕНТА 1991
  • Массимо Мария Каланки[It]
  • Марко Дзема[It]
  • Энцо Джорджетти[It]
  • Габриэле Брунетти[It]
RU2111743C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛИРОВАННЫХ ФОРМ ЛАКТОБАКТЕРИЙ 2000
  • Быков В.А.
  • Далин М.В.
  • Сомов Д.В.
  • Павлова Л.А.
RU2171672C1

RU 2 220 716 C1

Авторы

Сомов Д.В.

Воронкова А.И.

Максимова Т.В.

Калмыкова Т.П.

Павлова Л.А.

Даты

2004-01-10Публикация

2002-04-24Подача