СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФОРМЫ РИФАМПИЦИНА Российский патент 2004 года по МПК A61K31/496 A61K9/127 

Изобретение относится к области фармацевтики, а именно к способу получения липосомальной формы рифампицина, применяемой местно (ингаляционно или в заливках) для лечения туберкулеза.

Лечение туберкулеза проводят сочетанной терапией ряда препаратов, подавляющих размножение микобактерий туберкулеза, в число которых входит антибиотик широкого спектра действия рифампицин.

Известно, что рифампицин имеет низкую растворимость (1,2 мг/мл). В связи с этим длительное (в течение 2-6 месяцев) введение рифампицина вызывает возникновение большого количества побочных эффектов: нарушение функции печени и почек, отек Квинке, психические расстройства, язву.

Известно, что включение лекарственных препаратов в липосомы из фосфолипидов является одним из способов снижения их токсичности.

Известен препарат (RU 2063770, А1), применяемый в виде ингаляций для лечения гнойно-воспалительных заболеваний легких и содержащий рифампицин в липосомальной форме с размером липосом .

Этот препарат содержит (на 1 флакон) 8 мг рифампицина, 80 мг гентамицина, 35 мг лецитина и 2,5 мг эктерицида.

Известен также препарат (CN 1319395), содержащий 1-22% рифампина (синоним названия рифампицин) в липосомальной форме, 1-27% лецитина, 1-18% холестерола и 70-100% дистиллированной воды.

Однако получение этих препаратов в указанных источниках информации не описано.

Известен способ получения липосомальной формы рифампицина путем детергентного диализа (Грязнова Н. С. и др. Получение липосомальных препаратов различных биологически активных веществ методом детергентного проточного диализа. Журнал Антибиотики и химиотерапия, 1992, т. 37, 7, с. 3-5), заключающийся в том, что готовят пленку из смеси яичного фосфатидилхолина, холестерина, стеариновой кислоты и α-токоферола, взятых в весовых соотношениях 250: 12,5: 5, полученную липидную пленку диспергируют в фосфатном буфере (рН 7,0), содержащем рифампицин и детергент, а затем проводят детергентный диализ на приборе "Liposamate", получая одно- или двухслойные липосомы с диаметром от 35 до 75 нм.

Недостатком этого способа является получение липосом с малым содержанием рифампицина (0,1 мг/мл) и соответственно высокое соотношение рифампицин-липид. Кроме того, в препарате возможно наличие остаточных количеств детергента.

Известен способ получения липосомальной формы рифампицина (Курунов Ю.Н. и др. Эффективность липосомальной формы рифампицина при лечении экспериментального туберкулеза мышей. Журнал Проблемы туберкулеза, 1992, 1-2, с. 13-15) заключающийся в том, что сначала готовят пленку из смеси фосфатидилхолин : холестерин в молярном соотношении 3:1, затем липидную пленку (100 мг липидов) диспергируют в физиологическом растворе, содержащем 4 мг/мл рифампицина. Механическим встряхиванием получают мультиламелярные везикулы, которые отделяют от свободного рифампицина центрифугированием, с последующим редиспергированием. Включение рифампицина в мультиламелярные везикулы в количествах, превышающих его растворимость, обеспечено в данном способе большим количеством фосфолипидов, что увеличивает стоимость препарата. Кроме того, данный препарат представляет собой эмульсию частиц большого размера (1-3 мкм), которые не проходят в мелкие и средние бронхи.

Известен способ получения липосомальной формы рифампицина, включающий приготовление раствор рифампицина с фосфолипидами в органическом растворителе, замораживание раствора, его лиофилизацию и диспергирование в водной среде до получения суспензии мультимолярных везикул с заключенными в них рифампицином (заявка WO 93/23016 от 25.11.1993 г.).

Недостаток этого способа, в энергоемкости процесса лиофилизации, который проводится на специальном достаточно дорогом оборудовании, что резко увеличивает стоимость полученного продукта, другим недостатком этого способа является то, что в таком препарате размеры липосом колеблются в широких пределах, что делает его нестабильным при хранении.

Настоящее изобретение направлено на получении препарата с большей эффективностью действия.

Достигаемый при этом технический результат заключается в ускорении доступа к очагам поражения и стабильности хранения препарата за счет получении липосом, состоящих из небольших частиц одинакового размера (не более 0,5 мкм), которые быстрее попадают в мелкие сосуды легких и в другие очаги поражения, при этом препарат храниться длительное время без образования осадка, который получается в результате осаждения слипшихся липосом, при этом удалось получить гомогенную и стабильную при хранении эмульсию липосом, содержащих рифампицин в концентрациях, превышающих его растворимость в водной среде.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения липосомальной формы рифампицина готовят раствор рифампицина с фосфолипидами в органическом растворителе и затем удаляют растворитель до получения пленки, которую диспергируют в водной среде до получения суспензии мультимолярных везикул с заключенным в них рифампицином, затем полученную суспензию гомогенизируют при давлении (5,6-6,1)•10⁷ Па, а раствор рифампицина совместно с фосфолипидами готовят при массовом соотношении рифампицин : фосфолипиды, равном 1:3-15.

При этом гомогенизацию проводят в гомогенизаторе при высоком давлении или продавливая через фильтр под давлением.

Все указанные действия проводят в стерильных условиях.

В качестве фосфолипидов берут фосфатидилхолин или смесь фосфатидилхолина с любыми фосфолипидами яичного желтка, и/или сои, и/или крупного рогатого скота, взятых в любых сочетаниях и соотношениях. В качестве органического растворителя берут преимущественно этанол.

Растворитель удаляют высушиванием в вакууме при 30-50^oС.

Гомогенизацию проводят с помощью ядерного фильтра.

Ядерный фильтр представляет собой полимерную поликарбонатную пленку с отверстиями размером от 0,1 мкм и выше, которые получаются при бомбардировке пленки ядрами различных элементов. Размер отверстий подбирают так, чтобы при пропускании раствора липосом фильтр пропускал липосомы и задерживал микроорганизмы.

Ниже приведены данные, согласно которым после 6 мес хранения при температуре +4^oС размеры липосом не изменяются, а перекисное число увеличивается незначительно.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами конкретного осуществления.

Пример 1. В спиртовом растворе смеси фосфолипидов сои (2 г/100 мл этанола) растворяют 0,3 г рифампицина. Полученный раствор высушивают в вакууме при температуре не выше 40^oС до получения тонкой пленки. Полученную пленку диспергируют стерильным изотоническим раствором NaCl в течение 4 часов до полного перехода высушенных веществ в водную фазу. Получают однородную эмульсию, представляющую собой мультиламелярные везикулы с размером частиц 2,0-3,0 мкм, которую переносят в реактор гомогенизатора типа "α-Laval" (Швеция) (также можно использовать гомогенизатор "Донор" (Россия), где подвергают обработке при температуре 30^oС и давлении 6,0•10⁷ Па в стерильных условиях.

В таблицах 1-2 приведены данные, обосновывающие достаточность выбранной последовательности операций, состава смеси липидов и количественного соотношения липиды : рифампицин для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата.

Как видно из данных, представленных в таблице 1, для получения мультиламелярных везикул, содержащих рифампицин в концентрациях, превышающих его растворимость, необходимо сначала растворить липиды и рифампицин в этаноле и, удалив растворитель, получить пленку, состоящую из липидов и рифампицина, которую далее диспергировать стерильным изотоническим раствором. Иная последовательность смешивания компонентов (диспергирование сухой пленки липидов изотоническим раствором рифампицина или добавление сухого антибиотика к мультиламелярным везикулам фосфолипидов в стерильном изотоническом растворе) не позволяет получить гомогенную эмульсию мультиламелярных везикул даже при концентрациях рифампицина, незначительно превышающих его растворимость.

Как видно из данных, приведенных в таблице 2, для получения однородной эмульсии мультиламелярных везикул оптимальным является использование смеси фосфолипидов разного происхождения на основе фосфатидилхолина (75%) с небольшой примесью других классов фосфолипидов, в том числе лизокомпонентов. Такой состав позволяет увеличить содержание рифампицина в водной фазе до 15-20 мг/мл, что в 10-17 раз превышает его растворимость в воде (1,2 мг/мл).

Полученные таким образом содержащие рифампицин липосомы сохраняют свои физико-химические характеристики в течение полугода.

В табл.3 приведены данные, согласно которым после 6 мес хранения при температуре +4^oС размеры липосом не изменяются, а перекисное число увеличивается незначительно.

Таким образом, предлагаемый способ получения липосомальной формы рифампицина позволяет получить в стерильных условиях большие объемы стабильных липосом одинакового размера 0,1-0,5 мкм, содержащих рифампицин в высоких концентрациях.

При таком способе получения спектр рифампицина не изменяется, а фосфолипиды не окисляются и в силу этого липосомы стабильны при хранении.

Готовят раствор рифампицина вместе с фосфолипидами в органическом растворителе. Затем растворитель удаляют до получения тонкой пленки, которую диспергируют в водной среде до получения суспензии мультиламелярных везикул с заключенным в них рифампицином. Полученную суспензию гомогенизируют при высоком давлении или продавливают через фильтр под давлением до получения липосом размером 0,1-0,5 мкм. В качестве фосфолипидов берут смесь, содержащую, мас. %: фосфатидилхолина 70-80, остальное - смесь любых других липидов яичного желтка, и/или сои, и/или крупного рогатого скота. Раствор рифампицина совместно с фосфолипидами готовят при соотношении рифампицин : фосфолипиды, равном 1:3-15. В качестве органического растворителя берут преимущественно этанол, в качестве водной среды берут изотонический стерильный раствор NaCl. Растворитель удаляют высушиванием в вакууме при 30-50^oC. Гомогенизирование проводят при давлении 5,6•10⁷-6,1•10⁷ Па. Для фильтрации используют ядерный фильтр. Изобретение позволяет повысить активность продукта. 5 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Способ получения липосомальной формы рифампицина, включающий приготовление раствора рифампицина с фосфолипидами в органическом растворителе, удаление растворителя до получения пленки, которую диспергируют в водной среде до получения суспензии мультиламелярных везикул с заключенным в них рифампицином, отличающийся тем, что полученную суспензию гомогенизируют при давлении (5,6-6,1)·10⁷ Па, а раствор рифампицина совместно с фосфолипидами готовят при массовом соотношении рифампицин: фосфолипиды, равном 1:3-15.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что все указанные действия проводят в стерильных условиях.3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве фосфолипидов берут фосфатидилхолин или смесь фосфатидилхолина с любыми фосфолипидами яичного желтка, и/или сои, и/или крупного рогатого скота, взятых в любых сочетаниях и соотношениях.4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя берут преимущественно этанол.5. Способ по п.1, отличающийся тем, что растворитель удаляют высушиванием в вакууме при 30-50°C.6. Способ по п.1, отличающийся тем, что гомогенизацию проводят с помощью ядерного фильтра.