ВАКЦИНА ПРОТИВ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ НА ОСНОВЕ ВАГИНАЛЬНОГО СУППОЗИТОРИЯ Российский патент 2004 года по МПК A61K39/116 A61K9/02 A61P13/00 

Область изобретения
Настоящее изобретение относится в целом к устройству и способу лечения заболевания у людей, в частности к профилактическому лечению урогенитальных инфекций у людей. Более конкретно, изобретение относится к устройству на основе суппозитория для интравагинальной доставки вакцины с целью профилактики инфекций мочевых путей у людей, в котором суппозиторий включает вакцину, полученную из цельных или фракционированных патогенных микроорганизмов. Еще более конкретно, настоящее изобретение относится к устройству доставки на основе суппозитория для профилактики рецидивирующих инфекций мочевых путей у людей, в котором суппозиторий содержит вакцину из цельных, инактивированных бактерий, которые происходят из культур от 4 до 20 уропатогенных бактериальных штаммов, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекциями мочевых путей, и которое включает полиэтиленгликолевую основу суппозитория.

Предпосылки изобретения
Инфекции мочевых путей представляют собой большую проблему в медицине. Может поражаться любая часть мочевых путей. Наиболее часто встречающимися заболеваниями являются цистит, уретральный синдром, пиелит и пиелонефрит. Для инфекций мочевых путей характерна тенденция к рецидивам и хроническому прогрессированию. Заболевание в десять раз чаще встречается у женщин, чем у мужчин. Это различие связано главным образом с тем, что особое анатомическое строение женской уретры способствует инфекции собственной бактериальной флорой кишечника. Главным диагностическим критерием инфекций мочевых путей является бактериурия, присутствие бактерий в правильно собранном образце мочи (моча среднего потока). Для того, чтобы бактериурия считалась диагностически значимой, она должна превышать концентрацию 10⁵ бактерий на 1 мл мочи.

Бактерии, достигающие мочевыводящие пути, вызывают инфекцию или через поток крови, или путем восходящего распространения из уретры в мочевой пузырь и затем вверх по мочеточнику в почки. Восходящая инфекция является самым распространенным способом и объясняет ее более частое развитие у женщин. Расположение устья уретры и короткая уретра у женщин способствуют инфекции. Различные бактерии, происходящие из фекальной флоры, всегда живут в устье уретры и в дистальной части уретры женщин. Инфекции мочевых путей у женщин начинаются, когда одна из Enterobacteriaceae, происходящая из фекальной флоры, заселяет преддверие влагалища.

Самым часто встречающимся и многочисленным компонентом фекальной флоры является Escherichia coli, которая также часто обнаруживается в моче как возбудитель инфекций мочевых путей. Escherichia coli также часто обнаруживается в периуретральной области. Эта бактерия способна прилипать к периуретральным эпителиальным клеткам. Прилипание бактерий является необходимым предварительным условием для заселения и инфекции мочевых путей. Многие исследования in vitro показали, что феномен прилипания связан с наличием фимбрий у Escherichia coli, инфицирующих мочевые пути. Бактерии Escherichia coli являются самыми частыми возбудителями инфекций мочевых путей.

Мочевые пути могут также заселяться другими Enterobacteria, такими как Proteus и Klebsiella, и граммположительные кокки, такие как Staphylococcus и Streptococcus faecalis (Enterococcus). В мочевые пути также внедряются другие бактерии, такие как Pseudomonas aeruginesa и Haemophilus influenzae. Любые бактериальные обитатели кишечного тракта, которые выделяются с фекалиями, могут заселять мочевые пути. Кроме того, мочевые пути человека могут заселяться микоплазмой, L-формами бактерий, хламидиями, грибами, вирусами и простейшими.

Для инфекций мочевых путей характерны рецидивирование и хронизация. Рецидив может быть или вследствие возобновления, или вследствие повторной инфекции. Несмотря на большие достижения в лечении других бактериальных инфекций, в течение последних 20-25 лет заболеваемость и смертность от инфекций мочевых путей остаются неизменными. Причин для этого огромное количество, и они зависят от организма хозяина и микробных факторов.

Рецидивы инфекций ранее инфицировавшим штаммом организма встречаются редко и могут возникнуть вследствие неправильного выбора лекарственного препарата, появления устойчивых штаммов, недостаточной продолжительности лечения, недостаточной концентрации антибактериальных средств, существования бактериальных L-форм и выживания организмов в мочевых камнях. Все рецидивирующие инфекции мочевых путей у женщин по существу представляют собой повторные инфекции другими организмами и в целом штаммами, имеющими более высокую способность прилипать к эпителиальным клеткам влагалища и уретры. Повторно инфицирующие бактерии происходят из кишечной флоры. Состав кишечной флоры может изменяться с помощью профилактического и лечебного применения антибиотиков и других антибактериальных материалов, которые применяются при лечении и профилактике инфекций мочевых путей. У кишечной флоры часто развивается устойчивость к антибиотикам, и устойчивые бактерии могут затем вызвать повторную инфекцию или первичную оппортунистическую инфекцию мочевых путей. Такие первичные инфекции могут быть вызваны оппортунистическими условно-патогенными бактериями, которые возникают вследствие уничтожения антибиотиками нормальной, безвредной флоры, такой как молочнокислые бактерии. В этом случае могут размножаться и становиться патогенными другие микробы, устойчивые к антибиотикам. Устойчивость бактерий к антибиотикам, вызванная R-плазмидами, не только передается между одними и теми же видами бактерий, но также передается почти всем Enterobacteriaceae. Часто также встречается устойчивость к многим антибиотикам.

Главной причиной рецидивирующих инфекций мочевых путей у женщин является иммунологическое расстройство, которое облегчает прилипание уропатогенных организмов к периуретральной области. Исследования выявили, что низкий уровень секреторного IgA (sIgA) в моче указывает на недостаточность местного иммунного ответа мочевых путей и способствует рецидивирующим восходящим инфекциям мочевых путей. Самым важным свойством sIgA является то, что они предотвращают взаимодействие бактериальных фимбрий со специфическими рецепторами, обнаруживаемыми на эпителии мочевых путей. Опосредованная фимбриями способность к прилипанию является важным фактором вирулентности вовлеченных бактерий. Для защиты против инфекции важно уменьшить прилипание возбудителей к эпителию мочевыводящих путей или предотвратить прикрепление бактерий друг к другу.

Обычно организм хозяина вырабатывает специфические местные антитела против внедряющихся бактерий и секретирует эти антитела в виде sIgA. У пациентов с персистирующими или часто рецидивирующими инфекциями мочевых путей этот естественный механизм местной иммунологической защиты против инфекции, очевидно, нарушен. Поэтому усиление иммунной защиты является рациональным средством устранения причины рецидивирующих инфекций мочевых путей. Особенно благоприятна вакцинация, которая стимулирует выработку антител против спектра антигенов, присутствующих в нескольких типах Escherichia coli, и других часто встречающихся мочевых бактериях.

Ранее вакцины против инфекций мочевых путей вводились парентерально или орально и приводили к усиленной устойчивости к инфекциям мочевых путей. Парентеральное введение SOLCOUROVAC^®, вакцины против инфекций мочевых путей, производимой компанией Solco Basel AG, Basel Switzerland, и описанной в патенте США 4606919, содержание которого полностью включено в это описание, уменьшала тяжесть инфекций мочевых путей после гистерэктомии, снижала частоту инфекций у восприимчивых женщин и увеличивала содержание sIgA. Однако некоторые пациентки испытывали побочные эффекты, такие как недомогание, лихорадка и мышечные боли. Оральная вакцина, состоящая из иммуностимулирующих фракций, экстрагированных из штаммов Escherichia coli, уменьшала бактериурию, развитие сепсиса, потребность в антибиотиках у пациенток с травмами спинного мозга и частоту рецидивирующих инфекций мочевых путей у взрослых женщин. Как и при парентеральном введении, у многих пациенток наблюдались побочные реакции.

В попытке преодоления недостатков, связанных с парентеральным и оральным введением вакцины против инфекций мочевых путей, была предложена интравагинальная вакцина против инфекций мочевых путей. Обоснованием интравагинального введения вакцины против инфекций мочевых путей являлось то, что существует иммунная система слизистой оболочки, в которой антигены поглощаются через поверхности слизистой оболочки и обрабатываются специализированными местными лимфоидными тканями, после чего антитела секретируются на местные поверхности слизистой оболочки. Как обсуждалось выше, в мочеполовых путях временная или частичная недостаточность местной выработки антител во влагалище или мочевых путях является важным фактором возросшей восприимчивости к инфекциям мочевых путей, выявленной у некоторых женщин. Иммунизация через поверхности слизистой оболочки в пределах мочеполовых путей предпочтительнее парентерального или орального путей введения, поскольку было обнаружено, что вакцинация через интравагинальную поверхность создает секреторный иммунный ответ в мочеполовых путях.

В прошлом вакцины против инфекций мочевых путей вводились вагинально в форме жидкой вакцины. С интравагинальным введением жидкой вакцины против инфекций мочевых путей было связано несколько проблем. Главная проблема, с которой сталкивались, состояла в том, что жидкая вакцина вытекала из влагалища вскоре после введения. Это резко ограничивает количественные пределы времени, в течение которого жидкие антигены находятся в контакте с поверхностью слизистой оболочки влагалища, уменьшая эффективность вакцины. Для того, чтобы вызвать реакцию секреторного иммуноглобулина, антигенам требуется достаточный контакт со слизистой оболочкой влагалища. Требовалось, чтобы для предотвращения немедленного вытекания из влагалища пациентки, получающие вакцинацию, лежали на спине в течение продолжительного периода времени после введения вакцины. Однако часто после периода времени, проведенного в положении лежа на спине, вакцина все же вытекала из влагалища, ограничивая эффективность вакцины.

Кроме того, необходимость пребывания в положении лежа на спине в течение продолжительного периода времени после получения вакцины является обременительным условием. В течение курса лечения пациентки могут получать несколько вакцинаций и после каждой вакцинации пациентки должны значительное количество времени проводить в неподвижном состоянии. Поэтому очевидно, что необходимы усовершенствования в профилактике против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей, и вакцин против инфекций мочевых путей.

Настоящее изобретение преодолевает указанные выше ограничения и другие недостатки и описывает устройство доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей.

Сущность изобретения
В соответствии с настоящим изобретением предоставляется интравагинальное устройство доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных заболеваний мочеполовой системы, таких как инфекции мочевых путей.

Кроме того, в соответствии с настоящим изобретением, предоставляется устройство доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей, в котором для усиления иммунного ответа вакцина контактирует со слизистой оболочкой влагалища в течение достаточного периода времени.

Кроме того, еще в соответствии с настоящим изобретением, предоставляется устройство доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей, в котором вакцина легко вводится, не требует, чтобы пациентка находилась в положении лежа на спине в течение длительного периода времени после получения вакцинации, и удобно вводится пациенткой для первичной иммунизации и обычных потребностей в повторных иммунизациях.

Кроме того, еще в соответствии с настоящим изобретением, предоставляется устройство доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей у людей, причем указанный суппозиторий включает вакцину, состоящую из инактивированных бактерий, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, видов Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 миллионов до приблизительно 5 миллиардов бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Escherichia coli; и полиэтиленгликолевую основу суппозитория; в котором суппозиторий приспособлен для интравагинального введения с тем, чтобы обеспечить возможность нахождения суппозитория в контакте со слизистой оболочкой влагалища для облегчения передачи через нее материала суппозитория.

Преимущество настоящего изобретения состоит в обеспечении устройства доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей, в котором вакцина находится в контакте со слизистой оболочкой влагалища в течение периода времени, достаточного для усиления иммунного ответа.

Другое преимущество настоящего изобретения состоит в обеспечении устройства доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей, в котором вакцина легко вводится и не требует, чтобы пациентка находилась в положении лежа на спине в течение длительного периода времени после получения вакцинации.

Другое преимущество настоящего изобретения состоит в обеспечении устройства доставки вакцины на основе суппозитория, в котором вакцина удобно вводится пациенткой.

Другое преимущество настоящего изобретения состоит в обеспечении устройства доставки вакцины на основе суппозитория, в котором введение вакцины относительно безболезненно.

Еще одно преимущество настоящего изобретения состоит в обеспечении устройства доставки вакцины на основе суппозитория, в котором sIgA-специфическая стимуляция в результате вакцинации слизистой оболочки позволяет иммунным ответам специфично препятствовать возникновению бактериальной колонизации вместо борьбы с инфекцией после колонизации бактерий.

Еще одно преимущество настоящего изобретения состоит в обеспечении устройства доставки вакцины на основе суппозитория, в котором пациентка может самостоятельно периодически вводить суппозитории для ревакцинации.

Другие преимущества изобретения станут очевидны для специалистов в этой области после чтения и постижения смысла следующего подробного описания, сопровождающих чертежей и прилагаемой формулы изобретения.

Краткое описание чертежей
Изобретение может принять физическую форму в определенных частях и расположениях частей, предпочтительный вариант реализации и способ которого будет подробно описан в этом описании и проиллюстрирован чертежом, являющимся его составной частью, на котором представлен график, иллюстрирующий процентную долю пациенток, остающихся свободными от инфекции в ходе исследования.

Подробное описание предпочтительного варианта реализации
Это изобретение направлено на устройство доставки вакцины на основе суппозитория для иммунизации против инфекционных заболеваний у людей и способ их лечения. Более конкретно, это изобретение направлено на устройство доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики против инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей. Устройство доставки вакцины на основе суппозитория состоит из вакцины, включающей инактивированные бактерии, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий видов Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, и полиэтиленгликолевую основу суппозитория; в котором суппозиторий приспособлен для введения в отверстие (проход) тела человека с тем, чтобы обеспечить возможность нахождения суппозитория в контакте с тканью отверстия тела для облегчения передачи через нее материала суппозитория.

Суппозиторий состоит из вакцины, включающей инактивированные бактерии, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий видов Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis. Инактивированные бактерии присутствуют в количестве от приблизительно 50 миллионов до приблизительно 5 миллиардов бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Escherichia coli. Предпочтительно, неактивные бактерии происходят из 6 штаммов вида Escherichia coli и 1 штамма каждого из видов Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis. В предпочтительном варианте реализации неактивные бактерии присутствуют в общем количестве от приблизительно 1•10⁹ до приблизительно 1•10¹⁰ бактерий.

Суппозиторий состоит из вакцины, которая получена в соответствии со способом, описанным в патенте США 4606919, который полностью включен сюда в виде ссылки. Вакцина получена с помощью культивирования на подходящей питательной среде самих упомянутых выше от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий, которые были выделены из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, и после завершения культивирования удаления образованного биологического материала в виде частиц и инактивации его с помощью известных способов, смешивания количеств инактивированных бактерий, полученных из отдельных штаммов, друг с другом и разведения смеси количеством стерильного изотонического раствора, так что в одном суппозитории присутствует от приблизительно 50 миллионов до приблизительно 5 миллиардов бактерий каждого штамма.

Сначала у лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, берут образцы мочи (моча среднего потока) и немедленно производят внесение посевного материала в агар MacConkey; после внесения посевного материала чашки с агаром инкубируют при 37^o в течение 16-18 часов и затем выделяют образованные колонии и идентифицируют с помощью определения их биохимических и биологических свойств.

Выделенным таким образом колониям предоставляют возможность расти дальше на агаровых чашках при 37^o в течение 24 часов и затем суспендируют в физиологическом солевом растворе, исследуют на чистоту посредством окрашивания по Граму и лиофилизации.

Для получения вакцин штаммы культивируют отдельно на твердой или жидкой питательной среде; предпочтительно используется твердая питательная среда, например питательный агар, такой как Nutrient Agar Difco. Среду стерилизуют при 121^oС в течение 15 минут, и она имеет рН приблизительно 7,2.

Для получения в крупных масштабах используют флаконы Roux, а для получения в лаборатории используют чашки Петри. Внесение посевного материала проводят посевным материалом, несколько миллилитров которого равномерно распределяют по всей поверхности. Флаконы Roux закрывают ватными пробками и среду хранят с засеянной поверхностью на дне. Посеянные культуры инкубируют при 37^o в течение 24 часов.

Бактериальные "газоны" смываются требуемым количеством (в зависимости от плотности роста культуры в сосуде) солевого раствора с фосфатным буфером при осторожном взбалтывании без повреждения поверхности агара.

С каждого флакона или каждой чашки Петри получают мазок, окрашивают по методу Грама и исследуют на чистоту. Флаконы или чашки Петри, которые оказались загрязненными, выбрасывают. Суспензии, полученные из одного штамма и в результате сбора одного посева, сливают вместе через стерильный нейлоновый фильтр.

Инактивация, как и само культивирование, происходит индивидуально для каждого штамма. Она может проводиться с помощью нагревания при температуре от приблизительно 55^oС до приблизительно 60^oС в течение приблизительно 1 часа, с помощью обработки раствором формальдегида или с помощью облучения γ-лучами. Ввиду своей простоты, предпочтительна инактивация с помощью нагревания. Количества, полученные с помощью культивирования, комбинируют и инактивируют в водяной бане при 60^oС в течение 1 часа и после инактивации добавляют фенол.

Содержимое контейнера с исходным материалом (инактивированные суспензии, происходящие от одного штамма) центрифугируют при 3000 об/мин в течение 1 часа в охлажденной центрифуге, надосадочную жидкость удаляют и бактериальный осадок суспендируют в солевом растворе, содержащем 0,01% тимеросала.

Суппозиторий настоящего изобретения состоит из любой подходящей полиэтиленгликолевой основы суппозитория, известной в современном уровне техники. Более конкретно, полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из полиэтиленгликоля и полисорбата. Предпочтительно, полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из приблизительно 98 мас.% полиэтиленгликоля и приблизительно 2 мас.% полисорбата. Предпочтительно, полиэтиленгликоль имеет средний молекулярный вес приблизительно от 3000 до 5000. В более предпочтительном варианте реализации полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из приблизительно 39 мас.% полиэтиленгликоля, имеющего молекулярную массу 8000, и 59 мас.% полиэтиленгликоля, имеющего молекулярную массу 400. Подходящей имеющейся в продаже полиэтиленгликолевой основой суппозитория является POLYBASE, производимый Paddock Laboratories Inc.

Полиэтиленгликолевая основа суппозитория присутствует в устройстве доставки вакцины на основе суппозитория в любом подходящем количестве с тем, чтобы обеспечить возможность контакта вакцины со слизистой оболочкой влагалища в течение достаточного периода времени для усиления иммунного ответа. Предпочтительно, полиэтиленгликолевая основа суппозитория составляет приблизительно от 80 до 95 мас.% суппозитория. Полиэтиленгликолевая основа суппозитория придает степень смешиваемости с поверхностями слизистой оболочки влагалища, при которой взвешенные частицы вакцины находятся в контакте с такими поверхностями слизистой оболочки в течение достаточного количества времени для того, чтобы вызвать реакцию секреторного иммуноглобина. Полиэтиленгликолевая основа суппозитория обладает адъювантным эффектом, который усиливает иммунный ответ с помощью обеспечения возможности удлинения контакта вакцины со слизистыми оболочками влагалища, служа в качестве депо, которое медленно высвобождает антиген, и с помощью определения локализации и доставки антигенов к иммунокомпетентным клеткам. Полиэтиленгликолевая основа суппозитория, кроме того, служит в качестве структурной необходимости, которая удерживает суппозиторий в его пресс-форме.

Суппозиторий вставляется в ламинированную капсулу суппозитория, которая образует пресс-форму. Суппозиторий хранится в капсуле до использования. Ламинированная капсула суппозитория представляет собой любую известную в современном уровне техники капсулу, пригодную для упаковки суппозитория. Капсула суппозитория должна быть способна выдерживать температуру 60^oС, используемую при изготовлении суппозитория, и температуру 4^oС для длительного хранения без нарушения целостности прессовки или реакции с суппозиторием неблагоприятным образом. Предпочтительно, ламинированная капсула суппозитория представляет собой ламинированную капсулу суппозитория из поливинилхлорида-полиэтилена. Подходящей имеющейся в продаже ламинированной капсулой суппозитория является ламинированная капсула суппозитория из поливинилхлорида-полиэтилена, изготовленная Paddock Laboratories Inc.

Кроме того, для включения в состав устройства вакцины на основе суппозитория подходит деполяризованный желатин. Деполяризованный желатин представляет собой любой подходящий деполяризованный желатин, известный в современном уровне техники. Примеры подходящих деполяризованных желатиновых материалов включают желатин типа А или В из бычьего или свиного хряща, но не ограничиваются ими. Предпочтительно, деполяризованный желатин представляет собой желатин типа А. Деполяризованный желатин служит для защиты компонентов во время лиофилизации.

Деполяризованный желатин присутствует в суппозитории в любом подходящем количестве. Более конкретно, суппозиторий содержит от приблизительно 0,01 мас.% до приблизительно 0,02 мас.% деполяризованного желатина.

Кроме того, для включения в состав устройства вакцины на основе суппозитория подходит тимеросал. Тимеросал представляет собой антимикробный консервант. Подходящий имеющийся в продаже тимеросал можно приобрести в компании Sigma Chemical Co. Тимеросал присутствует в суппозитории в любом подходящем количестве. Более конкретно, суппозиторий включает от приблизительно 0,0005 мас.% до приблизительно 0,005 мас.% тимеросала.

Устройство доставки вакцины на основе суппозитория настоящего изобретения получают в боксах под асептическим стерильным ламинарным потоком. Полиэтиленгликолевую основу суппозитория нагревают до температуры приблизительно 80^oС так, что полиэтиленгликоль становится сжиженным. Полиэтиленгликолевую основу суппозитория нагревают в течение приблизительно 1 часа. Вакцину, состоящую из 8-14 штаммов инактивированных лиофилизированных уропатогенных бактерий, помещают в колбу. Часть сжиженной основы суппозитория охлаждают до 60^oС и выливают в отдельные колбы, содержащие вакцину. Вакцину и жидкую основу суппозитория перемешивают в течение приблизительно 10 минут при температуре приблизительно 60^oС, образуя однородную суспензию, состоящую из основы суппозитория и вакцины. Суспензию, состоящую из основы суппозитория и вакцины, помещают в отдельные ламинированные капсулы суппозитория. В колбу, которая содержит остаток вакцины, добавляют дополнительное количество жидкой основы суппозитория. Основу суппозитория и вакцину перемешивают в течение приблизительно 1 минуты при температуре 60^oС для образования однородной суспензии. Эту суспензию добавляют в ламинированную капсулу суппозитория. На верхушку ламинированной капсулы суппозитория добавляют чистую жидкую основу суппозитория до тех пор, пока капсула не наполнится. Суппозиторий охлаждают при температуре приблизительно 24^oС, давая возможность затвердеть основе суппозитория. Этот способ гарантирует, что материалы активной вакцины находятся в нижней части суппозитория, составляющей 67%, где они защищены от образования трещин и расслаивания, которые могут произойти на верхушке суппозитория, когда капсулы открываются для использования.

Далее настоящее изобретение иллюстрируется следующим примером. Пример иллюстрирует эффективность устройства доставки вакцины на основе суппозитория настоящего изобретения. Понятно, что пример лишь иллюстрирует предпочтительные варианты реализации в соответствии с настоящим изобретением, в котором изложенная формула изобретения определяет объем притязаний настоящего изобретения.

ПРИМЕР
Изготавливают устройство доставки вакцины на основе суппозитория, включающее вакцину, состоящую из инактивированных бактерий, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, видов Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 миллионов до приблизительно 5 миллиардов бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Escherichia coli; и полиэтиленгликолевую основу суппозитория.

POLYBASE, полиэтиленгликолевую основу суппозитория, производимую Paddock Laboratories Inc., нагревают до температуры 80^oС в течение приблизительно 1 часа для перевода основы суппозитория в жидкое состояние. Лиофилизированную вакцину SOLCOUROVAC^®, изготовленную компанией Solco Basel AG, в асептических условиях помещают в стерильную колбу Erlenmeyer в количестве, достаточном для изготовления 50 суппозиторий. Каждый суппозиторий будет содержать от приблизительно 1•10⁹ до приблизительно 1•10¹⁰ бактерий. Жидкую основу суппозитория охлаждают до приблизительно 60^oС и приблизительно 100 мл жидкой основы суппозитория выливают в отдельные колбы, содержащие вакцину. В колбу помещают стерильный магнитный брусок для перемешивания, и вакцину и основу суппозитория перемешивают в течение приблизительно 10 минут приблизительно при 60^oС в водяной бане с регулируемой температурой для образования однородной суспензии. Суспензию, состоящую из основы суппозитория и вакцины, с использованием стерильной пипетки помещают в отдельную ламинированную капсулу из поливинилхлорида-полиэтилена для суппозитория. В каждую капсулу помещают приблизительно 2,0 мл суспензии.

В колбу, которая содержит остаток вакцины, добавляют приблизительно 25 мл жидкой основы суппозитория. Основу суппозитория и вакцину перемешивают приблизительно в течение 1 минуты при температуре приблизительно 60^oС для образования однородной суспензии. В каждую капсулу добавляют приблизительно 0,5 мл этой суспензии. Для заполнения капсулы в каждую капсулу добавляют чистую жидкую основу суппозитория. Основу суппозитория охлаждают при температуре приблизительно 24^oС в течение приблизительно 30 минут для затвердевания основы суппозитория. Затем суппозитории хранят при 4^oС.

В исследовании суппозитория участвовала 91 пациентка в возрасте от 18 до 82 лет. У всех пациенток в течение последнего года было более двух инфекций мочевых путей, и у них всех проводилась оценка, состоящая из экскреторной урографии или ультразвукового исследования почек и цистоскопии. Перед испытанием суппозитория у пациенток проводили полный клинический и биохимический анализ крови, анализ мочи и посев культур из нее и влагалищное исследование с зеркалами. Пациенткам рекомендовали воздерживаться от зачатия во время испытания, и у них перед испытанием должен был быть отрицательный результат исследования мочи на беременность. 91 пациентки были распределены на три группы лечения. 1-я группа получала суппозитории, содержащие приблизительно 1•10⁹ бактерий на суппозиторий. 2-я группа получала суппозитории, содержащие приблизительно 2•10⁹ бактерий на суппозиторий. 3-я группа получала суппозитории, которые не содержали вакцину. Три группы не отличались по среднему возрасту, статусу гистерэктомии, половой активности или профилактическому получению антибиотиков в течение 0-4 недель.

Каждой пациентке суппозитории вводили 3 раза с интервалами в 1 неделю. Суппозитории вводили вагинально. Для размещения вагинального суппозитория пациенток укладывали в положении лежа на спине, и суппозиторий вводили высоко во влагалище. Пациентки оставались в положении лежа на спине приблизительно в течение 15 минут. Всех пациенток осматривали через 4 недели после первого лечения, а затем с интервалами 4 недели до 20-й недели. При каждом посещении брали для исследования сыворотку крови, мочу и влагалищную промывную жидкость. Посевы вагинальной культуры проводили, если во время испытания возникали патологические влагалищные выделения или симптомы.

Из 91 пациентки 44, которые в начале исследования профилактически получали антибиотики, продолжали прием антибиотиков до 2 недель после введения третьего суппозитория. Остальные 47 в течение всего испытания не принимали профилактически антибиотики.

Характеристики пациенток статистически сравнивали с помощью точного двухстороннего критерия Фишера и одностороннего критерия Kruskal-Wallis ANOVA. Периоды времени до возникновения первой повторной инфекции сравнивали с помощью логарифмического рангового критерия. Полное объяснение этих критериев дано в руководстве SAS/STAT Software, Changes and Enhancements, Ed. 6.07, Cary, SAS Institute, Inc., p. 620, 1993. Большинство инфекций подтверждалось с помощью посева культур из мочи и изучения чувствительности, и их лечили в течение 3 дней полными дозами обычных антибиотиков. Эпизоды типичных симптомов раздражения мочевого пузыря, которые быстро реагировали на общедоступные антибиотики, но не были подтверждены культурой мочи, также расценивались как рецидивирующие инфекции и анализировались таким же образом. Изменения уровня антител в ходе лечения сравнивали с помощью повторных показателей ANOVA для несбалансированных данных.

Не было пациенток, прекративших лечение вследствие побочных реакций. Одна пациентка жаловалась на легкое головокружение по возвращении домой после первой вакцинации, но вторую и третью вакцинацию восприняла без осложнений и по схеме. Три другие пациентки отметили небольшое раздражение влагалища после введений суппозитория, но они смогли без прерывания завершить схему лечения тремя суппозиториями. Не было других сообщений об эпизодах обильного выделения из влагалища, помехах при половом сношении или признаках и симптомах бактериального вагиноза.

Первоначальный анализ 91 пациентки не выявил различия в клиническом течении между группами плацебо и лечения. Это отсутствие эффекта лечения было вследствие того, что и у пациенток, получавших плацебо, и у пациенток, получавших лечение вакциной, в течение первых 4 недель исследования было меньше инфекций мочевых путей ввиду профилактического применения антибиотиков. При исследовании времени возникновения повторной инфекции с 0 недель у 47 женщин, профилактически не получавших антибиотики, в группе лечения наблюдалось значимое исходное удлинение периода времени до возникновения первой повторной инфекции. Не было значимого различия периода времени до возникновения первой инфекции в группах низкой дозы и высокой дозы, поэтому эти данные комбинировались при анализе эффективности вакцины. Результаты показали, что количество пациенток, не имевших инфекции в течение 8 недель, было значимо больше в группе, получавшей лечение вакциной, чем в группе плацебо. Кроме того, средний период времени до развития первой инфекции удлинился с 8,7 недель до 13 недель у иммунизированных пациенток. Чертеж представляет собой график, иллюстрирующий процентную долю пациенток, остающихся свободными от инфекции, в течение испытания. Такие пациентки из 1-й группы представлены пунктирной линией. Пациентки из 2-ой и 3-й групп представлены сплошной линией.

Устройство доставки вакцины на основе суппозитория настоящего изобретения позволяет вакцине находиться в контакте со слизистой оболочкой влагалища в течение периода времени, достаточного для усиления иммунного ответа. Кроме того, устройство доставки вакцины на основе суппозитория в соответствии с настоящим изобретением легко вводится, не требует, чтобы пациентка находилась в положении лежа на спине в течение продолжительного периода времени после получения вакцинации, удобно вводится пациенткой, безболезненно, пригодно для повторной вакцинации против обычных инфекций мочевых путей и предоставляет благоприятный способ доставки антигена в иммунокомпетентные клетки через слизистую оболочку.

Хотя были раскрыты различные варианты реализации устройства доставки на основе суппозитория для лечения инфекций мочевых путей и способ лечения инфекций мочевых путей у людей, следует понимать, что специалисты в этой области могут вносить в них изменения и приспосабливать к конкретным ситуациям. Другие признаки и аспекты этого изобретения будут понятны специалистам в этой области по прочтении и осмысливании этого описания. Очевидно, что такие признаки, аспекты и ожидаемые варианты и модификации представленных результатов и примеров находятся в пределах диапазона притязаний изобретения, причем изобретение ограничено только диапазоном притязаний следующей формулы изобретения.

Изобретение относится к иммунобиологической промышленности и касается вакцины против урогенитальных инфекций на основе вагинального суппозитория. Изобретение включает суппозиторий для профилактики инфекционных урогенитальных заболеваний, таких как инфекции мочевых путей, включающий инактивированные бактерии, происходящие из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий видов: Е. coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, выделенных из мочи людей, страдающих инфекций мочевых путей, и полиэтиленгликолевую основу суппозитория, а также способ профилактики урогенитальных заболеваний. Преимущество изобретения заключается в разработке устройства доставки вакцины на основе суппозитория для профилактики инфекционных урогенитальных заболеваний. 6 с. и 23 з. п. ф-лы, 1 ил.

1. Суппозиторий для профилактики урогенитальных заболеваний у людей, включающий (а) вакцину, состоящую из инактивированных бактерий, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий видов Еscherichia сoli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 млн до приблизительно 5 млрд бактерий каждого штамма на 1 мл, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Еscherichia сoli, и (b) полиэтиленгликолевую основу суппозитория, в котором суппозиторий приспособлен для введения в отверстие тела человека с тем, чтобы обеспечить возможность нахождения суппозитория в контакте с тканью отверстия тела для облегчения передачи через нее материала суппозитория.2. Суппозиторий для профилактики заболеваний мочевых путей у людей, включающий (а) вакцину, состоящую из инактивированных бактерий, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий видов Еscherichia сoli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 млн до приблизительно 5 млрд бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Еscherichia сoli, и (b) полиэтиленгликолевую основу суппозитория, в котором суппозиторий приспособлен для интравагинального введения с тем, чтобы обеспечить возможность нахождения суппозитория в контакте со слизистой оболочкой влагалища для облегчения передачи через нее материала суппозитория.3. Суппозиторий по п.2, отличающийся тем, что неактивные бактерии происходят из 6 штаммов вида Еscherichia сoli и 1 штамма каждого из видов Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis.4. Суппозиторий по п.2, отличающийся тем, что неактивные бактерии присутствуют в общем количестве от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁰ бактерий.5. Суппозиторий по п.2, отличающийся тем, что полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из полиэтиленгликоля и полисорбата.6. Суппозиторий по п.5, отличающийся тем, что полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из приблизительно 98 мас.% полиэтиленгликоля и приблизительно 2 мас.% полисорбата.7. Суппозиторий по п.5, отличающийся тем, что полиэтиленгликоль имеет средний молекулярный вес от приблизительно 3000 до приблизительно 5000.8. Суппозиторий по п.2, отличающийся тем, что полиэтиленгликолевая основа суппозитория составляет от приблизительно 80 мас.% до приблизительно 95 мас.% суппозитория.9. Суппозиторий по п.2, отличающийся тем, что дополнительно включает деполяризованный желатин.10. Суппозиторий по п.9, отличающийся тем, что деполяризованный желатин выбран из группы, состоящей из желатина типа А из бычьего коллагена, желатина типа А из свиного коллагена, желатина типа В из бычьего коллагена и желатина типа В из свиного коллагена.11. Суппозиторий по п.9, отличающийся тем, что суппозиторий содержит от приблизительно 0,01 мас.% до приблизительно 0,02 мас.% деполяризованного желатина.12. Суппозиторий по п.2, отличающийся тем, что дополнительно включает тимеросал.13. Суппозиторий по п.12, отличающийся тем, что суппозиторий включает от приблизительно 0,0005 мас.% до приблизительно 0,005 мас.% тимеросала.14. Суппозиторий для профилактики инфекций мочевых путей у людей включающий (а) вакцину, состоящую из инактивированных бактерий, которые происходят из культур 10 штаммов уропатогенных бактерий видов Еscherichia сoli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 млн до приблизительно 5 млрд бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Еscherichia сoli, в котором неактивные бактерии происходят из 6 штаммов вида Еscherichia сoli и 1 штамма каждого из видов Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, и в котором неактивные бактерии присутствуют в общем количестве от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁰ бактерий, и (b) полиэтиленгликолевую основу суппозитория, в котором полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из приблизительно 98 мас.% полиэтиленгликоля и приблизительно 2 мас.% полисорбата, в котором полиэтиленгликоль имеет средний молекулярный вес от приблизительно 3000 до приблизительно 5000 и в котором полиэтиленгликолевая основа суппозитория составляет от приблизительно 80 мас.% до приблизительно 95 мас.% суппозитория, в котором суппозиторий приспособлен для вагинального введения с тем, чтобы обеспечить возможность нахождения суппозитория в контакте со слизистой оболочкой влагалища для облегчения передачи через нее материала суппозитория.15. Суппозиторий по п.14, отличающийся тем, что дополнительно включает деполяризованный желатин и тимеросал, в котором деполяризованный желатин выбран из группы, состоящей из желатина типа А из бычьего коллагена, желатина типа А из свиного коллагена, желатина типа В из бычьего коллагена и желатина типа В из свиного коллагена, в котором суппозиторий включает от приблизительно 0,01 мас.% до приблизительно 0,02 мас.% деполяризованного желатина и в котором суппозиторий включает от приблизительно 0,0005 мас.% до приблизительно 0,005 мас.% тимеросала.16. Суппозиторий для профилактики инфекций мочевых путей у людей, получаемый в результате смешивания (а) вакцины, состоящей из инактивированных бактерий, которые происходят из культур 10 штаммов уропатогенных бактерий видов Еscherichia сoli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 млн до приблизительно 5 млрд бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Еscherichia сoli, в котором неактивные бактерии происходят из 6 штаммов вида Еscherichia сoli и 1 штамма каждого из видов Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis и в котором неактивные бактерии присутствуют в общем количестве от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁰ бактерий, и (b) полиэтиленгликолевую основу суппозитория, в котором полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из приблизительно 98 мас.% полиэтиленгликоля и приблизительно 2 мас.% полисорбата, в котором полиэтиленгликоль имеет средний молекулярный вес от приблизительно 3000 до приблизительно 5000 и в котором полиэтиленгликолевая основа суппозитория составляет от приблизительно 80 мас.% до приблизительно 95 мас.% суппозитория, в котором суппозиторий приспособлен для вагинального введения с тем, чтобы обеспечить возможность нахождения суппозитория в контакте со слизистой оболочкой влагалища для облегчения передачи через нее материала суппозитория.17. Способ профилактики урогенитального заболевания у людей, включающий стадии (а) введения суппозитория в отверстие тела человека, включающего вакцину, включающую инактивированные бактерии, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий видов Еscherichia сoli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 млн до приблизительно 5 млрд бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Еscherichia сoli, и полиэтиленгликолевую основу суппозитория и (b) обеспечения контакта суппозитория с тканью отверстия тела для облегчения передачи через нее материала суппозитория и с целью вызвать иммунную реакцию у человека.18. Способ профилактики инфекций мочевых путей у людей, включающий стадии (а) введения суппозитория во влагалище человека, включающего вакцину, включающую инактивированные бактерии, которые происходят из культур от 8 до 14 штаммов уропатогенных бактерий видов Еscherichia сoli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis, выделенных из мочи лиц, страдающих инфекцией мочевых путей, и присутствуют в количестве от приблизительно 50 млн до приблизительно 5 млрд бактерий каждого штамма на суппозиторий, в которых от половины до трех четвертей использованных штаммов относятся к виду Еscherichia сoli, и полиэтиленгликолевую основу суппозитория и (b) обеспечения контакта суппозитория со слизистой оболочкой влагалища для облегчения передачи через нее материала суппозитория и с целью вызвать иммунную реакцию у человека.19. Способ по п.18, отличающийся тем, что неактивные бактерии происходят из 6 штаммов вида Еscherichia сoli и 1 штамма каждого из видов Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Proteus morganii и Streptococcus faecalis.20. Способ по п.18, отличающийся тем, что неактивные бактерии присутствуют в общем количестве от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁰ бактерий.21. Способ по п.18, отличающийся тем, что полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из полиэтиленгликоля и полисорбата.22. Способ по п.21, отличающийся тем, что полиэтиленгликолевая основа суппозитория состоит из приблизительно 98 мас.% полиэтиленгликоля и приблизительно 2 мас.% полисорбата.23. Способ по п.21, отличающийся тем, что полиэтиленгликоль имеет средний молекулярный вес от приблизительно 3000 до приблизительно 5000.24. Способ по п.18, отличающийся тем, что полиэтиленгликолевая основа суппозитория составляет от приблизительно 80 мас.% до приблизительно 95 мас.% суппозитория.25. Способ по п.18, отличающийся тем, что суппозиторий дополнительно включает деполяризованный желатин.26. Способ по п.25, отличающийся тем, что деполяризованный желатин выбран из группы, состоящей из желатина типа А из бычьего коллагена, желатина типа А из свиного коллагена, желатина типа В из бычьего коллагена и желатина типа В из свиного коллагена.27. Способ по п.25, отличающийся тем, что суппозиторий содержит от приблизительно 0,01 мас.% до приблизительно 0,02 мас.% деполяризованного желатина.28. Способ по п.18, отличающийся тем, что суппозиторий дополнительно включает тимеросал.29. Способ по п.28, отличающийся тем, что суппозиторий включает от приблизительно 0,0005 мас.% до приблизительно 0,005 мас.% тимеросала.