СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕТЕРОЛОГИЧНОГО СЕКРЕТОРНОГО БЕЛКА Российский патент 2004 года по МПК C12N15/55 C12P1/00 C07H21/00 

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ секреторного продуцирования чужеродного белка, в частности трансглутаминазы, при помощи коринеформной бактерии. Гетерологичный секреторный белок, в частности трансглутаминазу, продуцируют способом, включающим использование конструкции для экспрессии гена, в которой последовательность гена целевого чужеродного белка, содержащего проструктурную часть, а именно последовательность гена протрансглутаминазы, лигирована ниже последовательности, кодирующей область сигнального пептида из коринеформной бактерии, введение указанной конструкции для экспрессии гена в коринеформную бактерию, культивирование трансформированной таким образом коринеформной бактерии и обработку секретированного из клетки белка протеазой или подобным ферментом для расщепления и удаления прочасти. Предлагаемое изобретение позволяет получить гетерологичный секреторный белок, в частности трансглутаминазу, используемую в пищевой промышленности, при изготовлении фармацевтических препаратов и в других областях. 23 з.п.ф-лы, 6 табл.

1. Способ продуцирования гетерологичного секреторного белка, который включает культивирование коринеформной бактерии, содержащей генную экспрессирующую конструкцию, в которой нуклеотидная последовательность, кодирующая домен сигнального пептида, выделенный из коринеформной бактерии, присоединена ниже последовательности промотора, функционирующей в коринеформной бактерии, и нуклеотидная последовательность, кодирующая гетерологичный секреторный белок, содержащий проструктурную часть, присоединена ниже нуклеотидной последовательности, кодирующей указанный домен сигнального пептида, благодаря чему данная коринеформная бактерия продуцирует и секретирует указанный гетерологичный секреторный белок, а также последующее расщепление и удаление проструктурной части из указанного гетерологичного секреторного белка.2. Способ по п.1, в котором гетерологичный секреторный белок является трансглутаминазой.3. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из коринеформной бактерии.4. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из Corynebacterium glutamicum.5. Способ по п.4, в котором сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:29.6. Способ по п.1 или 2, в котором сигнальный пептид является сигнальным пептидом поверхностного белка из Corynebacterium ammoniagenes.7. Способ по п.6, в котором сигнальный пептид имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:2.8. Способ по любому из пп.1-7, в котором проструктурная часть соответствует проструктурной части трансглутаминазы из актиномицета.9. Способ по п.8, в котором проструктурная часть имеет последовательность, соответствующую SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4.10. Способ по п.8, в котором проструктурная часть включает замену, делецию, вставку или добавление, по крайней мере, одной аминокислоты или их комбинацию в аминокислотной последовательности, соответствующей SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4.11. Способ по п.10, в котором аминокислотная последовательность проструктурной части является одной из аминокислотных последовательностей, соответствующих SEQ ID NO:30-SEQ ID NO:38.12. Способ по п.1 или 2, в котором расщепление и удаление проструктурной части выполняют при помощи протеазы.13. Способ по п.12, в котором коринеформная бактерия, продуцирующая и секретирующая гетерологичный секреторный белок, также продуцирует протеазу.14. Способ по п.13, в котором расщепление и удаление проструктурной части выполняют при помощи протеазы и пептидазы.15. Способ по п.14, в котором коринеформная бактерия, продуцирующая и секретирующая гетерологичный секреторный белок, также продуцирует протеазу и пептидазу.16. Способ по п.12 или 14, в котором протеаза происходит из актиномицета.17. Способ по п.12 или 14, в котором протеаза происходит из Strepromyces albogriseolus.18. Способ по п.14, в котором пептидаза происходит из актиномицета.19. Способ по п.14, в котором пептидаза происходит из Streptoverticillium mobaraense.20. Способ по любому из пп.2-11, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой актиномицета.21. Способ по п.20, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой Streptoverticillium mobaraense.22. Способ по п.21, в котором трансглутаминаза имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:5.23. Способ по п.20, в котором трансглутаминаза является трансглутаминазой Streptoverticillium cinnamoneum.24. Способ по п.23, в котором трансглутаминаза имеет аминокислотную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:43.