СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТИМУЛЯТОРА РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ ИЗ КОРМОВЫХ ДРОЖЖЕЙ Российский патент 2004 года по МПК C12N1/00 C12N1/14 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано при получении питательных сред различного целевого назначения.

В приготовлении питательных сред в качестве стимуляторов роста микроорганизмов широко используют экстракты, диализаты, автолизаты дрожжей (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7).

Известны способы получения экстрактов дрожжей, предусматривающие экстрагирование водорастворимых факторов роста с последующей фильтрацией (8, 9, 10).

Однако указанные способы не обеспечивают возможность получения препаратов высокого качества. Это связано с низкой эффективностью процесса фильтрации и с недостаточно высокой прозрачностью получаемых экстрактов.

Наиболее близким к предлагаемому по совокупности признаков и достигаемому эффекту является способ получения экстракта кормовых дрожжей, заключающийся в том, что кормовые дрожжи смешивают с водой, кипятят при постоянном перемешивании и фильтруют (11).

Недостатками указанного способа являются длительность процесса фильтрации, наличие взвешенных частиц и высокая пигментация экстракта.

Слабая фильтруемость и недостаточно высокая степень чистоты экстрактов объясняются тем, что суспензия кормовых дрожжей представляет собой полидисперсную коллоидную систему с размером частиц от нескольких микрон до одного и выше миллиметра.

Коллоидные частицы быстро забивают поры фильтрующего материала, в результате чего резко падает скорость фильтрации.

Предлагаемым изобретением решаются задачи увеличение скорости фильтрации и повышение степени очистки целевого продукта.

Для достижения названного технического результата в предлагаемом способе кормовые дрожжи ГОСТ 20083-74, ОСТ 59-17-76 смешивают с водой, перемешивают, нагревают до кипения, кипятят 15-20 мин, затем охлаждают, отстаивают в течение 18-24 ч, декантируют, к экстракту добавляют натрий фосфорнокислый двузамещенный, перемешивают, подщелачивают до рН 7,9-8,3, вносят хлористый кальций, перемешивают, доводят рН до 6,7-7,1, кипятят в течение 1 ч, выдерживают 10-14 ч, фильтруют, фильтрат концентрируют и высушивают известными способами.

Отличительные признаки предлагаемого способа от указанного выше известного, наиболее близкого к нему, заключаются в том, что после кипячения экстракт кормовых дрожжей отстаивают и после декантации обрабатывают смесью солей фосфорнокислого натрия двузамещенного и хлористого кальция.

В результате химической реакции образуется гель фосфата кальция с развитой поверхностью, обладающий высокой адсорбирующей способностью по отношению к коллоидным частицам и пигментирующим веществам, вследствие чего повышается степень очистки и происходит осветление целевого продукта. Кроме того, гель фосфата кальция снимает заряд коллоидных частиц, что приводит к образованию сравнительно крупных, пористых частиц, через слой которых легко осуществляется фильтрация.

Подщелачивание экстракта после внесения фосфата натрия до pH 7,9-8,3 обеспечивает полноту протекание реакции между хлористым кальцием и фосфатом натрия, что исключает наличие в экстракте ионов кальция, обладающих ингибирующими свойствами по отношению к микроорганизмам, а последующее подщелачивание до рН 6,7-7,1 обеспечивает лучшие условия для адсорбции балластных веществ.

В отличие от известного способа, предусматривающего получение жидкого препарата, что создает у потребителя определенные проблемы, связанные хранением и транспортировкой, предлагаемый способ предусматривает получение сухого препарата, обеспечивающий стандартность, удобство при использовании и стабильность при хранении.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. В реактор наливают 2000 л воды, включают мешалку, загружают 100 кг кормовых дрожжей, смесь перемешивают в течение 10-15 мин. В паровую рубашку реактора подают пар давлением 1,0-1,2 атм, люк реактора закрывают, нагревают до кипения и кипятят 15-20 мин. После окончания кипячения пар отключают и в паровую рубашку реактора подают теплую воду, охлаждают до 70-75°С, а затем подают холодную воду.

В процессе охлаждения проводят отстаивание экстракта в течение 18-24 ч. Затем верхнюю часть отстоявшегося экстракта ваккумом декантируют в другой реактор. К полученному объему экстракта (1700 л) добавляют 5,1 кг натрия фосфорнокислого двузамещенного, содержимое реактора перемешивают 10-15 мин, подщелачивают 30% раствора едкого натрия до pH 7,9-8,3, перемешивают в течение 10-15 мин, после чего вносят 10,2 л 35% раствора хлористого кальция. Содержимое вновь перемешивают, доводят pH до 6,7-7,1, смесь кипятят в течение часа и оставляют экстракт на 10-14 ч. Далее экстракт сжатым воздухом перекачивают на нутч-фильтры. В течение 15-20 мин фильтрацию проводят самотеком, а затем постепенно включают вакуум, экстракт отфильтровывают в вакуум-выпарительную установку. Концентрирование проводят при разрежении 450-500 мм рт.ст., до содержания в экстракте 6-18% сухих веществ. Высушивание экстракта проводят на распылительной сушке при температуре на входе в сушилку 170-200 С, на выходе не менее 100-110°С. Выход сухого экстракта составляет 18-21 кг. Сухой экстракт кормовых дрожжей содержит 1,6±0,3% аминного азота, влаги не более 7%, рН 5,2-6,2, 0,5% раствор экстракта прозрачный, без опалесценции.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что к экстракту, полученному после декантации, добавляют 5,95 кг натрия фосфорнокислого двузамещенного и 11,9 л 35% раствора хлористого кальция. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примеров 1, 2 тем, что к экстракту, полученному после декантации, добавляют 6,8 кг натрия фосфорнокислого двузамещенного и 13,6 л 35% раствора хлористого кальция. Далее согласно примеру 1.

В таблице приведены некоторые технологические показатели способов получения экстрактов кормовых дрожжей.

Из таблицы видно, что предлагаемый способ имеет преимущество по скорости фильтрации, выходу конечной продукции и по степени пигментации.

Бактериологический контроль качества полученного экстракта проводили на модели тиогликолевой среды, рекомендованной для контроля стерильности. При этом было отмечено, что интенсивность роста тест-штамма Cl.oedematiens 198 на среде с экстрактом, полученным по предлагаемому способу, была в 10 раз выше, чем на среде с использованием экстракта, полученного по известному способу.

Кроме того, высокая прозрачность и низкая степень пигментации позволяет легко производить учет результатов бактериологических исследований.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает высокую скорость фильтрации, необходимую степень чистоты и прозрачности, что в целом способствует улучшению ростовых свойств экстракта.

Способ легко воспроизводим и может быть внедрен на предприятиях, выпускающих питательные среды.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ

1. Ю.П.Козлов. Питательные среды в медицинской микробиологии. Москва, Медгиз, 1950, C. 101-106.

2. Руководство по клиническим лабораторным методам исследования./Под ред. Л.Г.Смирновой и Е.А.Кост. Москва, Медгиз, 1960, С. 745-746.

3. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней. Под ред. И.К.Матвеева. Москва, 1964, с. 144-145.

4. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М.О.Биргера. Москва, Медицина, 1982. С. 51-52.

5. The Oxoid Manual of Culture Media Fifth edition, 1982, S.339-340.

6. Microbiology Manual, 1990, Merck, S.261.

7. Справочник по микробиологическим питательным средам. Под ред. М.М.Меджидова. Махачкала, 1999, С. 15.

8. Инструкция о порядке расследования учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях. Москва, 1975, С. 120.

9. Справочник. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции. Под ред. Б.И.Антонова. Москва, Агропромиздат, 1986, С. 252.

10. Дж.Мейнелл, Э.Мейнелл. Экспериментальная микробиология. Москва, Мир, С. 63-64.

11. Л.Б.Бендас, Б.М.Раскин, А.К.Баранова. Стимулятор бактериального роста из кормовых дрожжей. Лаб. дело, 1974, С. 43-46.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано при получении питательных сред. Способ предусматривает смешивание кормовых дрожжей с водой с последующим кипячением. После кипячения экстракт охлаждают, отстаивают, декантируют. Далее к экстракту добавляют натрий фосфорнокислый двузамещенный, перемешивают до полного растворения соли, подщелачивают до рН 7,2-8,3, перемешивают. После чего добавляют хлористый кальций, вновь перемешивают, подщелачивают, до рН 6,7-7,1, кипятят в течение часа, оставляют на 10-14 ч. После отстаивания фильтруют, фильтрат концентрируют и высушивают известными способами. Предлагаемый способ улучшает процесс фильтрации, повышает степень очистки целевого продукта, а сухая форма препарата обеспечивает стандартность, удобство при использовании и стабильность при хранении. 1 табл.

Способ получения стимулятора роста микроорганизмов из кормовых дрожжей, предусматривающий смешивание кормовых дрожжей с водой в соотношении 1:20, кипячение и фильтрацию, отличающийся тем, что после кипячения экстракт охлаждают, отстаивают в течение 18-24 ч, декантируют, к экстракту добавляют 0,3-0,4 кг натрия фосфорнокислого двузамещенного на каждые 100 л экстракта, перемешивают до полного растворения соли, подщелачивают до рН 7,9-8,3, добавляют 0,6-0,8 л 35% раствора хлористого кальция на каждые 100 л экстракта, перемешивают, доводят до рН 6,7-7,1, кипятят в течение одного часа, отстаивают в течение 10-14 ч, фильтруют, фильтрат концентрируют до содержания сухих веществ 6-18% и высушивают известными способами.