ШТАММ БАКТЕРИЙ LEPTOSPIRA INTERROGANS "МИТРОНОВ" СЕРОГРУППЫ CANICOLA ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ Российский патент 2004 года по МПК C12N1/20 A61K39/02 C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и может быть использовано для приготовления вакцины против лептоспироза.

В настоящее время для профилактики лептоспироза используется поливалентная вакцина (см. Инструкцию по применению вакцины лептоспирозной концентрированной инактивированной жидкой. Утверждена начальником Управления государственного контроля лекарственных средств и медтехники Р.У. Хабриевым 16 октября 1998 года), которая может быть рассмотрена в качестве аналога изобретения. Лептоспиры серогруппы Canicola в состав указанной вакцины не входят. Однако возбудители этой серогруппы имеют большое эпидемиологическое значение на территории Российской Федерации (см. Онищенко Г.Г., Монисов А.А., Гульченко Л.П., Федоров Ю.М. // Микробиол., 1999, №4, с.14-18).

Наиболее близкой по сущности к заявляемому изобретению является вакцина лептоспирозная инактивированная, применявшаяся в течение многих лет для профилактики лептоспироза у людей, в состав которой входили лептоспиры серогруппы Canicola (см. Барышев П.М. Анализ антигенноиммунологической активности гретой лептоспирозной вакцины у привитых и в эксперименте. // Микробиол., 1980, №3, с.52-57).

Недостатком препарата является его низкая иммунологическая эффективность - 17,8%. Антитела к лептоспирам серогруппы Canicola обнаружены только у 1,6% вакцинированных людей.

Изобретение направлено на получение антигенно- и иммуногенноактивного и эпидемиологически актуального штамма лептоспир серогруппы Canicola, пригодного для приготовления вакцины.

Штамм выделен из крови человека, больного лептоспирозом. Депонирован в коллекции лептоспир Института эпидемиологии и микробиологии АМН РФ имени Н.Ф.Гамалеи №480 от 25.05.2001 г.

Характеристика штамма

Морфологические и культуральные свойства. Грамотрицательные спирохеты с характерной морфологией и подвижностью. Культивируются на жидкой питательной среде Терских с добавлением 5% сыворотки кролика при 28°С. В стационарной фазе наибольшая концентрация составляет (3,0±0,3)·10⁷ лептоспир в 1 мл.

Патогенные свойства. На экспериментальных моделях штамм отнесен к умеренно вирулентному: ЛД₅₀, которую определяли при внутрибрюшинном введении морским свинкам массой 100,0-150,0 г, составляет 2·10⁴ микробных клеток. Клинические проявления инфекции у морских свинок характеризуются появлением лихорадки у 100%, геморрагии - у 50% животных.

Антигенностъ. Антигенная активность штамма выражена: в ответ на однократное внутривенное введение кроликам массой 3,0 кг живой культуры лептоспир, содержащей 3·10⁷ микробных клеток, появлялись антитела, максимум которых приходился на вторую - третью недели и средний геометрический титр антител, определяемых в реакции микроагглютинации, составлял 1:51 200.

Иммуногенная активность. Штамм обладает выраженной иммуногенной активностью. Убитый нагреванием в течение 1 ч при 56°С в дозе 3·10⁷, он защищает от гибели и развития инфекции 100% морских свинок, зараженных лептоспирами серогруппы Canicola в дозе, в 100 раз превышающей летальную.

Из лептоспир штамма “Митронов” получена вакцина, которая была испытана в эксперименте на животных.

Вакцина может быть получена следующим способом.

Культуру лептоспир штамма “Митронов”, выращенную на среде Терских и содержащую 3·10⁷ микробных клеток в 1 мл, нагревали при 56°С в течение 1 ч. Полученную таким образом гретую вакцину вводили 15 морским свинкам массой 150,0 г в дозе 1 мл внутрибрюшинно. В ответ на введение вакцины у всех экспериментальных животных появлялись антитела, средний геометрический титр которых в реакции микроагглютинации составлял 1:79. Через 30 дней всем вакцинированным и 10 контрольным животным вводили лептоспиры серогруппы Canicola в дозе, в 100 раз превышающей летальную. Все иммунизированные морские свинки остались живы в течение 30 дней, симптомы заболевания отсутствовали. Из органов забитых животных при посеве на питательную среду лептоспиры не выделены. Все контрольные животные, получившие вместо вакцины физиологический раствор, погибли.

Иммуногенность вакцины изучена методом пассивной защиты на золотистых хомячках. Животным за 2 ч до инъекции летальной дозы лептоспир вводили внутрибрюшинно иммунную сыворотку морских свинок, содержащую антитела в титре 1:80. Превентивная активность сыворотки морских свинок, вакцинированных опытными образцами вакцины для золотистых хомячков, подсчитанная путем определения ЕД₅₀, составила 0,2.

Таким образом, предлагаемый штамм обладает выраженными иммуногенными свойствами и может быть рекомендован для введения в вакцину.

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и может быть использовано для приготовления вакцины против лептоспироза. Штамм L. interrogans выделен из крови человека, больного лептоспирозом. Прогретый при 56°С в течение 1 ч штамм обладает высокой иммуногенной активностью и защищает экспериментальных животных от гибели при введении им вирулентных лептоспир в дозе, в 100 раз превышающей летальную. Сыворотка животных, иммунизированных опытными образцами вакцины, приготовленной из штамма “Митронов”, содержащая антитела к лептоспирам серогруппы Canicola, в эксперименте на золотистых хомячках обладает высокой протективностью – ЕД₅₀ составляет 0,2. Штамм депонирован в коллекции НИИЭМ им. Гамалеи АМН РФ под номером 480. Использование штамма L. interrogans №480 позволяет получать вакцину против эпидемиологически актуального возбудителя лептоспироза.

Штамм бактерий Leptospira interrogans "Митронов" серогруппы Canicola №480 (коллекция лептоспир НИИЭМ им. Гамалеи АМН РФ) для приготовления вакцины.