ВАКЦИНА ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХ Российский патент 1995 года по МПК A61K39/02 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой иммунологически сбалансированную концентрированную вакцину, предназначенную для профилактики лептоспироза животных.

Лептоспироз - природноочаговая инфекционная болезнь сельскохозяйственных животных и человека, получившая убиквитарное распространение. Заболевание сопровождается гибелью части заболевших животных, абортами у свиноматок и коров, снижением удоев и привесов. Однако у большинства инфицированных животных заболевание протекает бессимптомно, диагноз можно только поставить на основании лабораторных методов исследования. Переболевшие животные остаются лептоспироносителями и до 4-24 месяцев выделяют в большом количестве возбудитель с мочой, заражают здоровых животных, людей и инфицируют внешнюю среду.

Вакцинация профилактирует клиническое проявление лептоспироза, включая аборты лептоспирозной этиологии, массовое перезаражение животных, лептоспироносительство, исключает формирование интенсивного очага лептоспироза.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза животных, содержащая антигены лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Isterohaemorrhagiae, Canicola, Sejroe в двух вариантах, консервант, адъювант и воду. Штаммы лептоспир культивируют в сывороточной среде, инактивируют, разделяют на две части, добавляют к одной части 3% трихлоруксусной кислоты, выдерживают в течение 3 ч до выпадения осадка белка, удаляют 60% надосадочной жидкости, нейтрализуют кислоту аммиаком, соединяют две части культуры лептоспир и добавляют гидроксал в количестве 30%.

Вакцину применяют однократно внутримышечно в следующих дозах: крупному рогатому скоту в возрасте от 2 до 12 месяцев - 4 см³; от 1 до 2 лет - 8 см³, взрослым животным старше 2 лет - 10 см³; мелкому рогатому скоту в возрасте до 6 месяцев - 2 см³, от 6 до 12 месяцев - 2,5 см³ и взрослым животным - 5 см³; поросятам в возрасте 1-3 месяцев вакцину вводят двукратно в дозе 2-3 см³ с интервалом 10-15 дней, от 3 до 10 месяцев - 6 см³, хрякам и свиноматкам - 10 см³.

Основными недостатками вакцины являются невысокая иммуногенная активность и низкое накопление лептоспир (не более 100 млн./см³) в питательной среде, что вынуждает вводить вакцину животным в больших дозах (до 10 см³) и транспортировать значительное количество препарата по стране, а обработка бактериальных клеток сильными химическими реактивами (ТХУ концентрированная, аммиак) отражается на качестве вакцины.

Целью изобретения является повышение антигенной и иммуногенной активности вакцины.

Поставленная цель достигается получением вакцины, содержащей суспензию клеток штаммов Leptospira interrogans серогрупп: Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, Canicola ВГНКИ-3 или Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Sejroe "Hardjo", формалин, белок сыворотки крови, альбумин, гемоглобин, гидрат окиси алюминия,буферный раствор, воду рН - 7,2-7,6, при следующем соотношении компонентов, (мас. /об. % ): Суспензия клеток штаммов Leptospira interrogans серогрупп Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, Canicola ВГНКИ-3 или Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Sejroe "Hardjo", взятых в равных соотношениях 0,5-5,0 млрд.кл/см³ Фоpмалин 0,24-0,26 Белок сыворотки крови 0,2-0,5 Альбумин 0,08-0,12 Гемоглобин 0,08-0,12 Гидроокись алюминия 1,68-1,86 Фосфатный солевой буфер с рН -7,2-7,6 9,9-10,1 Вода Остальное
Используемые для изготовления вакцины штаммы Leptospira interrogans Pomona PSR-1 и Leptospira interrogans Sejroe "Hardjo" депонированы в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов.

Штамм Leptospira interrogans S."Hardjo" получен путем селекции выделенного от крупного рогатого скота изолята лептоспир и типичен по своим культурно-морфологическим свойствам. Однако по антигенной и иммуногенной активности превосходит существующие аналоги. Сравнение в динамике антигенной активности трех штаммов показывает, что титр антител к используемому штамму на 15 день после иммунизации составляет в РМА 1:1130, на 20-й день - 1:1160 и на 25-й день - 1:3200, в то время как к двум другим штаммам 1:100, 1:200, 1: 400, 1:800 и 1:1130 соответственно. Аналогичные результаты получены и по активности монопрепаратов, изготовленных из разных штаммов Hardjo.

П р и м е р 1. Приготовлено 6 серий концентрированной вакцины против лептоспироза животных. Для этого штаммы лептоспир серогрупп: Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, Canicola ВГНКИ-3 или Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1 и Sejroe "Hardjo" выращивают раздельно на буферно-сывороточной среде с добавлением альбумина и гемоглобина до накопления микробных клеток 70-100 млн/см³, инактивируют формалином, который добавляют до 0,24-0,26%-ной концентрации. Суспензию бактериальной массы смешивают 1:1:1:1, концентрируют ультрафильтрацией до получения бакмассы с содержанием 0,5-5,0 млрд/см³ лептоспир и добавляют 6%-ную гидроокись алюминия до 28-31%-ной концентрации. Полученную вакцину расфасовывают и контролируют на стерильность, безвредность и активность.

Концентрированная вакцина против лептоспироза животных имеет следующий компонентный состав, мас./об.%:
Серия 1. Суспензия клеток штаммовLeptospira interrogans : Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2б Canocola ВГНКИ-3, взятых в равных соотношениях 0,5 млрд.кл/см³ Формалин 0,24 Белок сыворотки крови 0,2 Альбумин 0,08 Гемоглобин 0,08 Гидроокись алюминия 1,68 Фосфатный солевой буфер, рН 7,2 9,9 Вода Остальное
Вакцина против лептоспироза серии 2, имеет следующий компонентный состав, мас./об.%: Суспензия клеток штаммов: Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, Canocola ВГНКИ-3, взятых в равных соотношениях 2,5 млрд.кл/см³ Формалин 0,25 Белок сыворотки крови 0,3 Альбумин 0,1 Гемоглобин 0,1 Гидроокись алюминия 1,75 Фосфатный солевой буфер, рН 7,5 10,0 Вода Остальное
Вакцина против лептоспироза животных серии 3 содержит, мас./об.%: Суспензия клеток штаммов лептоспир Роmona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, Canicola ВГНКИ-3, взятых в равных соотношениях 5 млрд.кл/см³ Формалин 0,26 Белок сыворотки крови 0,5 Альбумин 0,12 Гемоглобин 0,12 Гидроокись алюминия 1,86 Фосфатный солевой буфер, рН 7,6 10,1 Вода Остальное
Вакцина против лептоспироза животных серии 4 имеет следующий компонентный состав, мас./об.%: Суспензия клеток штаммов лептоспир Роmona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Sejroe "Hardjo", взятых в равных соотношениях 0,5 млрд.кл/см³ Формалин 0,24 Белок сыворотки крови 0,2 Альбумин 0,08 Гемоглобин 0,08 Гидроокись алюминия 1,68 Фосфатный солевой буфер, рН 7,2 9,9 Вода Остальное
Вакцина против лептоспироза животных серии 5 содержит, мас./об.%: Суспензия клеток штаммов лептоспир Роmona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Sejroe "Hardjo", взятых в равных соотношениях 2,5 млрд. кл/см³ Формалин 0,25 Белок сыворотки крови 0,3 Альбумин 1,0 Гемоглобин 1,0 Гидроокись алюминия 1,75 Фосфатный солевой буфер, рН 7,4 10,0 вода Остальное
Вакцина против лептоспироза животных серии 6 содержит, мас./об.%: Суспензия клеток штаммов лептоспир Роmona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Serjoe "Hardio", взятых в равных соотношениях 5,0 млрд. кл/см³ Формалин 0,26 Белок сыворотки крови 0,5 Альбумин 0,08 Гемоглобин 0,08 Гидроокись алюминия 1,86 Фосфатный солевой буфер, рН 7,6 10,1 Вода Остальное
Уменьшение концентрации лептоспир в вакцине приводит к снижению антигенной и иммуногенной активности препарата и вынужденному повышению объема вакцинальной дозы. Снижение содержания белка сыворотки крови, альбумина, гемоглобина и гидроокиси алюминия также ведет к снижению антигенной и иммуногенной активности вакцины, снижение содержания формалина не вызывает полной инактивации лептоспир.

Увеличение концентрации лептоспир в вакцине не ведет к повышению иммуногенной активности препарата и, кроме того, представляет затруднения при введении ее молодняку животных. Повышение содержания белка сыворотки крови, альбумина, гемоглобина и гидроокиси алюминия не приводит к повышению активности препарата, увеличение концентрации формалина приводит к денатурации белка и изменению антигенной активности лептоспир.

П р и м е р 2. Активность полученной вакцины против лептоспироза животных в сравнении с известной вакциной-прототипом проверяют на лабораторных животных. С этой целью кроликам массой 3-3,5 кг вводят однократно внутривенно предварительно оттитрованное количество лептоспир (40-50 млн.клеток). Через 25 дней у кроликов берут кровь и сыворотку исследуют в РМА с гомологичными лептоспирами. Результаты представлены в табл. 1.

Из приведенных данных следует, что активность концентрированной вакцины значительно выше активности вакцины-прототипа несмотря на одинаковое количество лептоспир в дозе каждого препарата.

П р и м е р 3. Вакцину используют для профилактики лептоспироза животных путем однократного внутримышечного введения препарата, содержащего суспензию клеток штаммов Leptospira interrogans Pomona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Icterohaemorrhagiae ВГНКИ-2, Canocola ВГНКИ-3 или Роmona PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-1, Sejroe "Hardjo", инактивированных формалином и сорбированных на гидрате окиси алюминия и стабилизатор из белка сыворотки крови, альбумина и гемоглобина в буферном растворе, рН 7,2-7,6, при этом препарат используют в дозах крупному рогатому скоту:
молодняку 2-6 месяцев 250-300 млн. микробных клеток
6-12 месяцев 500-600 млн. микробных клеток
1,0-2,0 лет 600-700 млн. микробных клеток
Взрослым животным массой до 400 кг - 750-800 млн. микр. кл.

взрослым животным массой свыше 400 кг - 1,0-1,2 млрд. микр. клеток.

Мелкому рогатому скоту 2-6 месячного возраста препарат вводят в дозах 150-200 млн. микробных клеток, животным 6-12 месяцев - 250-300 млн. микробных клеток. Поросятам 1-3 месяцев вакцину применяют в дозах 350-450млн. микробных клеток, 3-10 месяцев вакцину применяют в дозах 450-550 млн. микробных клеток, а взрослым свиньям - 600 -750 млн. микробных клеток.

П р и м е р 4. Вакцину против лептоспироза животных, содержащую суспензию клеток штаммов лептоспир PSR-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4 или PSR-1, ВГНКИ-1, ВГНКИ-4, Hardjo с общей концентрацией микробных клеток 0,5-5 млрд/1 см³, формалин - 0,24-0,26%, белок сыворотки крови - 0,2-0,5%, альбумин - 0,08-0,12%, гемоглобин - 0,08-0,12%, гидрат окиси алюминия - 1,68-1,86% , фосфатный буфер, рН 7,2-7,6, 9,9-10,1% и воду до 100% и проверяют в остром опыте на золотистых хомячках.

Хомячков вакцинируют концентрированной вакциной в последовательно убывающих дозах, на каждую дозу используют по 15 зверьков. Через 28 дней опытных и контрольных (вакцинированных препаратом ВГНКИ в соответствии с известным способом профилактики) зверьков заражают введением 10 LD₅₀ контрольного штамма лептоспир. Результаты учитывают через 10 дней после гибели контрольных не вакцинированных зверьков. Эффективность вакцины оценивают по величине 50%-ной иммунизирующей дозы для золотистых хомячков, выраженной количеством микробных клеток. Результаты опыта представлены в табл. 2.

Таким образом, предложенный способ профилактики лептоспироза более эффективен, так как для создания иммунитета одинаковой напряженности нужно 2-8 раз меньше вакцинного препарата.

Предложенная концентрированная вакцина против лептоспироза животных представляет собой концентрированный иммунологически сбалансированный препарат, обладающий высокой антигенной и иммуногенной активностью. Использование концентрированной вакцины в ветеринарной практике способствует улучшению эпизоотической ситуации по лептоспирозу.

Область применения: ветеринарная микробиология, профилактика лептоспироза, вакцина против лептоспироза. Сущность изобретения: вакцина содержит водную суспензию инактивированных формалином и сорбированных на гидрате окиси алюминия штаммов Leptospira interrogans в двух вариантах: I-Pomona PSR-I, Tarassovi ВГНКИ-4, Canicola ВГНКИ-3, Jeterohaemorrhagiae ВГНКИ-2; II-Pomona PSR-I, Tarassovi ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГНКИ-I и Sejroc hardjo с общей концентрацией в каждом варианте 0,5-5,0 млрд. микробных клеток в 1 cм³ и стабилизатор, включающий белок сыворотки крови, альбумин, гемоглобин и фосфатный буферный раствор, pH 7,2-7,6. Вакцину вводят крупному рогатому скоту 2-6 мес. возраста 250-300 млн. микр. клеток, 6-12 мес. - 500-600 млн. микр. клеток, 1-2 лет - 600-700 млн. микр. клеток, взрослым животным массой до 400 кг - 750-800 млн. микр. клеток, свыше 400 кг - 1-1,2 млрд. микр. клеток; поросятам 1-3 мес. - 350-450 млн. микр. клеток, 3-10 мес. - 450-500 млн. микр. клеток, хрякам и свиноматкам - 600-750 млн. микр. клеток; мелкому рогатому скоту 2-6 мес. - 150-250 млн. микр. клеток, 6-12 мес. - 250-300 млн. микр. клеток, баранам и овцематкам - 350-400 млн. лептоспир в объеме 0,3-1,0 cм³ . Концентрированная вакцина обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью. 2 табл.

ВАКЦИНА ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЖИВОТНЫХ, содержащая суспензию клеток штаммов Zepfospira interrogans серогрупп Pomona, Tarassovi ВГНКИ=4, Canicola ВГНКИ-3, Jcterohaemorrhagiae ВГНКИ-2 или штаммов Pomona, Tarassoiv ВГНКИ-4, Grippotyphos, ВГНКИ-1, Sejroe, взятых в равных соотношениях, инактиватор, стабилизатор из белка сыворотки крови, гидроксид алюминия и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения антигенной и иммуногенной активности вакцины, она содержит из серогруппы Pomona - штамм PSR-1, из серогруппы Sejroe - штамм Hardjo, в качестве инактиватора - формалин и дополнительно содержит в составе стабилизатора альбумин и гемоглобин в буферном растворе с pH 7,2-7,6 при следующем соотношении компонентов, мас/об.%:
Суспензия клеток штаммов Zeptospira interogans Pomona
PSR-1, Tarassovi ВГНКИ-4, Canicola ВГНКИ-3
, Ycterohaemorrhagiae ВГНКИ-2 или Pomona PSR-1, Tarassovi_ ВГНКИ-4, Grippotyphosa ВГН
КИ-1, Sejroe Hardjo, взятых в равных соотношениях, 1
0⁹ клеток/см³ - 0,5 - 5,0
Формалин - 0,24 - 0,26
Белок сыворотки крови - 0,2 - 0,5
Альбумин - 0,08 - 0,12
Гемоглобин - 0,08 - 0,12
Гидроксид алюминия - 1,68 - 1,86
Фосфатный солевый буфер с pH 7,2-7,6 - 9,9 - 10,1
Вода - Остальное