Изобретение относится к медицине и может быть использовано в вакцинно-сывороточном деле для приготовления вакцины.
Известно, что в настоящее время для приготовления лептоспирозной вакцины, применяемой с целью профилактики лептоспироза у людей, используют штаммы серогруппы Icterohaеmorragiае.
Иммуногенность используемых в настоящее время для приготовления вакцины штаммов по-видимому недостаточно высока.
Цель изобретения - получение антигенно, иммуногенно и эпидемиологически актуального штамма лептоспир, пригодного для приготовления вакцины.
Штамм выделен в 1982 году из крови больного иктерогеморрагическим лептоспирозом человека. Депонирован в коллекции лептоспир Института эпидемиологии и микробиологии АМН СССР им. Н. Ф. Гаммалеи N 460.
Характеристика штамма.
Морфологические и культуральные свойства. Грамотрицательные спирохеты с характерной морфологией и подвижностью. Культивируются на жидкой питательной среде Терских с добавлением 5% сыворотки кролика при 28оС. Лаг-фаза длится двое суток, экспоненциальная фаза - 6 сут, время генерации 22 ч. В стационарной фазе наибольшая концентрация составляет (3,7 ± 0,2) ˙107 лептоспир в 1 мл.
Патогенные свойства. На экспериментальных моделях штамм отнесен к высоко вирулентному: ЛД50, которую определяли при внутрибрюшинном заражении золотистых хомячков массой 30,0 г, составляет 5,6·10°/(8,2·101-2,5·10°). В знаменателе указано значение пределов, в которых с вероятностью 95% заключено действие значения ЛД50. Клинические проявления инфекции у экспериментальных животных характеризуются появлением лихорадки у 100% животных, геморрагий у 100% и желтухи у 80% .
Антигенность. Антигенная активность штамма высокая: в ответ на однократное внутривенное введение кроликам массой 3,0 кг живой культуры лептоспир, содержащей 108 микробных клеток, появлялись антитела, максимум которых приходился на вторую-третью неделю и средний геометрический титр составлял 51200.
Иммуногенная активность. Штамм обладает выраженной иммуногенной активностью. Убитый нагреванием в течение 2 ч при 56оС в дозе 3 ˙107 он защищает от гибели и развития инфекции 100% морских свинок, зараженных лептоспирами серогруппы Icterohaemorrhagiae в дозе, в 1000 раз превышающей летальную.
Из лептоспир штамма "Рябухин" получена вакцина, которая была испытана в эксперименте на животных.
Пример приготовления и испытания вакцины.
Культуру лептоспир штамма "Рябухин", выращенную на среде Терских и содержащую 3 ˙107 микробных клеток в 1 мл, нагревали при 56оС в течение 2 ч. Полученную таким образом гретую вакцину вводили 20 морским свинкам массой 150,0 г в дозе 1 мл внутрибрюшинно. В ответ на введение вакцины у всех экспериментальных животных появлялись антитела, средний геометрический титр которых в реакции микроагглютинации составлял 1: 84. Через 30 дней всем вакцинированным и контрольным животным вводили лептоспиры серогруппы Icterohaemorrhagiae в дозе, в 1000 раз превышающей летальную. Все иммунизированные морские свинки оставались живы в течение 30 дней, симптомы заболевания отсутствовали, из органов забитых животных при посеве на питательную среду лептоспиры не выделены. Все контрольные животные (20 морских свинок), получившие вместо вакцины питательную среду, погибли при яркой картине иктерогеморрагического лептоспироза.
Иммуногенность вакцины, изученная методом пассивной защиты на золотистых хомячках. Животным за два часа до инъекции летальной дозы лептоспир вводили внутрибрюшинно иммунную сыворотку морских свинок, содержащую антитела в титре 1: 40. Превентивная активность сыворотки морских свинок, вакцинированных опытными образцами вакцины, для золотистых хомячков, подсчитанная путем определения ЕД50, составила 
.
Изучение в эксперименте на золотистых хомячках вирулентности прототипов, коррелирующей с иммуногенностью, показало, что ЛД50 штамма "Одесса 853" равна 1,0·103/(6,9·103-1,4·103). ЛД50 штамма "Rattus norvegicus 382" равна 2,0·104/(1,4·105-2,9·103) .
Изучение иммуногенности прототипов методом определения протективной активности сывороток животных, иммунизированных штаммами "Одесса 853" и "Rattus norvegicus 382", показало, что для шт. "Одесса 853" ЕД50= 
, для штамма "Rattus norvegicus 382" ЕД50= 
.
Таким образом, предлагаемый штамм обладает более выраженными по сравнению с прототипами иммуногенными свойствами и может быть рекомендован для конструирования вакцины. (56) Leptospiroses and medicin. Human and Vet. , 1989. Coll Found, Marsel, Merienx, P. 119-135.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ШТАММ БАКТЕРИЙ LEPTOSPIRA INTERROGANS "МИТРОНОВ" СЕРОГРУППЫ CANICOLA ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ | 2002 |
|
RU2227160C1 |
| Вирулентный штамм бактерий Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni, используемый для экспериментального изучения лептоспирозной инфекции | 2021 |
|
RU2768008C1 |
| Штамм патогенных лептоспир RаттUS NoRVeGIcUS, используемый для получения поливалентной противолептоспирозной вакцины | 1985 |
|
SU1621940A1 |
| ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗА ЧЕЛОВЕКА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | 1998 |
|
RU2184775C2 |
| ШТАММ БАКТЕРИЙ LEPTOSPIRA INTERROGANS, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ ВАКЦИН | 1992 |
|
RU2049815C1 |
| Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae | 2023 |
|
RU2799846C1 |
| Тест-штамм Leptospira interrogans серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni для детекции антител к L. icterohaemorrhagiae | 2016 |
|
RU2607006C1 |
| ВАКЦИНА ИНАКТИВИРОВАННАЯ КОМБИНИРОВАННАЯ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ И ЛЕПТОСПИРОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2009 |
|
RU2395297C1 |
| Новая поливалентная вакцина против лептоспироза человека и способ её получения | 2021 |
|
RU2753972C1 |
| ВАКЦИНА ИНАКТИВИРОВАННАЯ КОМБИНИРОВАННАЯ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ, РОТА-, КОРОНАВИРУСНОЙ БОЛЕЗНЕЙ И ЛЕПТОСПИРОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2009 |
|
RU2395299C1 |
Область использования: микробиология, лептоспироз, вакцина, вакцинный штамм. Сущность изобретения: новый штамм Zeptospira in ferrogans "Рябухин" НИИЭМ N 460 обдадает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами, гарантирующими использование его для приготовления вакцины. Штамм выделен из крови человека больного лептоспирозом. Гретый при 56С в течение 2 ч штамм обладает высокой иммуногенной активностью и защищает экспериментальных животных от гибели при введении им вирулентных лептоспир в дозе, более чем в 1000 раз превышающей летальную. Сыворотка животных, иммунизированных опытными образцами вакцины, приготовленной из штамма, обладает высокой протективностью.
Штамм бактерий Leptospira interrogans "Рябухин" серогруппы Icterohaemorrhagiae серовара copenhageni НИИЭМ N460, используемый для приготовления вакцины против лептоспироза.
