ПРИМЕНЕНИЕ ЭТИЛОВОГО ЭФИРА 5-БРОМ-3,4-ДИГИДРОКСИ-2-КАРБАМОИЛ-6-ОКСО-6-ФЕНИЛ-2,4-ГЕКСАДИЕНОВОЙ КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2004 года по МПК C07C235/78 A61K31/165 

Изобретение относится к биологически активным соединениям, а именно к этиловому эфиру 5-бром-3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты (I) формулы

обладающему противомикробной активностью, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве лекарственного противомикробного препарата.

Ближайшим структурным аналогом заявляемому соединению является этиловый эфир 3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты (II) формулы

описанный нами ранее и обладающий противомикробной активностью [Козьминых В.О., Игидов Н.М., Касаткина Ю.С. Журн. орган, химии, 2001, т.37, вып.11, cc. 1604-1609].

В качестве эталона сравнения нами взят противомикробный препарат - этакридина лактат [Машковский М.Д. Лекарственные средства// Харьков, т.2, с. 420 (1997)].

Целью данного изобретения является поиск в ряду эфиров и амидов 2-замещенных 6-арил-3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-2,4-гексадиеновых кислот соединения, обладающего выраженным противомикробным действием и низкой токсичностью.

Поставленная цель достигается получением этилового эфира 5-бром-3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты реакцией этилового эфира 3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты II с бромом

Пример получения заявляемого соединения I

Смесь 0,76 г (0,0025 моль) этилового эфира 3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты и 0,2 г (0,0025 моль) брома в 30 мл трихлорметана кипятят в течение 1 часа. Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этилацетата или этанола. Получают 0,51 г (53%) кристаллического соединения (I) с Т_пл. 240-241 (разл.). Найдено: С 47,00; Н 3,76; Вr 20,75; N 3,56. C₁₅H₁₄NO₆. Вычислено: С 46,90; Н 3,70; Вr 20,80; N 3,60. ИК спектр, ν, см^-1 (кристаллы): 3362 (CONH₂), 1703 (СООС₂Н₅), 1667 (CQNH₂), 1610 (СО_хелат). Спектр ПМР, δ, м. д. ДМСО-d6: 1,20 т (3 Н, СН₂СН₃), 4,16 кв (2 Н, СН₂СН₃), 7,48-7,93 м (5 Н, С₆Н₅), 8,81 с, 10,11 с (2 Н, NH₂).

Заявляемое соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в ДМФА, ДМСО, уксусной кислоте, труднорастворимое в спирте и нерастворимое в воде.

Для определения бактериостатической активности [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии //М., с. 109-111 (1971). Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ// М., с. 264-273 (2000)] навеску 0,05 г соединения I растворяли в 5 мл ДМСО. Разведение 1:100. Исходное разведение готовили на мясопептонном бульоне (МПБ) в разведении 1:500 (1 мл разведения 1:100 и 4 мл МПБ). Для опыта брали ряды пробирок, содержащих по 2 мл МПБ. Использован метод двукратных серийных разведений путем последовательного переноса 2 мл жидкости из одной пробирки в другую. В качестве контроля использовали пробирки со средой без препарата. Исследования проводили по отношению к двум видам тест-микробов: золотистому стафилококку (Staphylococcus aureus ATCC - 6538) и кишечной палочке (Escherichia coli ATCC 25922). Суточные агаровые культуры тест-микробов смывали изотоническим раствором хлорида натрия и доводили по оптическому стандарту до концентрации 500 млн. микробных тел в 1 мл (рабочий раствор). Конечная микробная нагрузка составила 250000 микробных тел в 1 мл среды. После добавления микробных взвесей пробирки термостатировали при 37°С. Учет результатов проводили через 18-20 часов по наличию роста бактерий (помутнение среды) или по его отсутствию за счет антибактериального действия препарата. Показателем антибактериальной активности химических соединений является минимальная ингибирующая концентрация (МИК) препарата (в мкг/мл), задерживающая рост соответствующего тест-микроба при стандартной постановке опыта.

Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения I определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии// М., с. 100, 109-117 (1971)]. Соединение I вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи.

Сравнивали острую токсичность ЛД₅₀, противомикробную активность против золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus АТСС - 6538), кишечной палочки (Escherichia coli ATCC 25922) и величину отношения МИК исследуемого соединения к его ЛД₅₀ в сравнении с широко применяемым в медицине противомикробным препаратом - этакридина лактатом [Машковский М.Д. Лекарственные средства// Харьков, т.2, с. 420 (1997)]. Результаты испытаний представлены в таблице.

Согласно классификации токсичности препаратов [Измеров И.Ф., Сапоцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов// М., с. 197 (1977)] соединение I относится к классу практически нетоксичных препаратов, оно в 14,3 раза менее токсично, чем этакридина лактат.

Как видно из таблицы, исследуемое соединение по противомикробной активности по отношению к золотистому стафилококку в 250 раз и по отношению к кишечной палочке - в 16 раз более активно по сравнению с этакридина лактатом. Отношение МИК (мкг/мл) к токсичности ЛД₅₀ (мг/кг) составляет для стафилококка 0,002 и для кишечной палочки 0,031.

Таким образом, этиловый эфир 5-бром-3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты (I) проявляет выраженную противомикробную активность по отношению к St. aureus и является практически нетоксичным. Следовательно, заявляемое соединение I может найти применение в медицине в качестве противомикробного лекарственного средства.

Изобретение относится к применению этилового эфира 5-бром-3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты формулы:

в качестве средства, обладающего противомикробной активностью. Технический результат - получение соединения, обладающего выраженным противомикробным действием и низкой токсичностью. 1 табл.

Применение этилового эфира 5-бром-3,4-дигидрокси-2-карбамоил-6-оксо-6-фенил-2,4-гексадиеновой кислоты в качестве средства, обладающего противомикробной активностью.