СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА Российский патент 2004 года по МПК A61K39/10 A61K31/00 

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно к лечению и профилактики инфекционных заболеваний.

Бруцеллез - зоонозная инфекция с высокой потенциальной возможностью перехода в хроническую форму. Для профилактики бруцеллеза широко используют различные вакцины - живые и инактивированные, однако их применение затруднено из-за возникновения нежелательных побочных симптомов, таких как реактогенность, сенсибилизация, агглютиногенность, низкая протективная активность, а также сложностью работы с живой бруцеллезной вакциной (1). Многократное введение вакцины часто вызывает симптомы, сходные с таковыми при латентных и хронических формах бруцеллеза (2, 3). Известно применение вакцинных препаратов как для профилактики бруцеллеза, так и для лечения бруцеллеза. Однако применение вакцинотерапии в последнее время ограничивается из-за повышения сенсибилизации организма к различным лекарственным препаратам и природным веществам, а также из-за увеличения противопоказаний для применения вакцинотерапии (1, 4, 5, 6, 7).

Известно применение антибиотиков для лечения бруцеллеза и других болезней, сопровождающихся внутрифагоцитарным персистированием возбудителя в период первичного, острого развития болезни. Однако антибиотики совершенно неэффективны при использовании их в случае хронического течения заболевания. Длительные курсы антибиотикотерапии не действуют на бруцеллы, которые находятся внутриклеточно и надежно защищены от циркулирующего в организме антибиотика. Кроме того, длительное применение антибиотиков в лечебных дозах вызывает ряд побочных явлений (4, 8).

Наиболее близким способом лечения бруцеллеза, который следует взять за ближайший аналог, является применение иммуностимулятора - зимозана для лечения бруцеллеза (9). Данный способ лечения с помощью зимозана недостаточно эффективен вследствие его кратковременного действия. Кроме того, данный препарат не применяют для лечения острого бруцеллеза, а также его профилактики.

Сущность изобретения заключается в том, что в качестве лечебного и профилактического средства используют производные 4-изопропилтолуен, которые вводят в организм перорально ежедневно в течение 2-60 дней. Причем с профилактической целью его применяют за 2-10 дней до начала периода наибольшего риска заражения (предродовой и родовой период, период возможного контакта с инфицированным материалом или культурой бруцелл) и в течение этого периода. Производные 4-изопропилтолуен вводят совместно с иммуностимуляторами, низкомолекулярными нуклеиновыми кислотами и противомикробными препаратами. Производные 4-изопропилтолуен (2-изопропил-5-метилфенол, 2-изопропил-5-метилциклогексанол, 2-изопропил-5-метилгексанон, 1,8-метандиол) не специфически активируют функции фагоцитов, в результате чего возбудитель бруцеллеза, локализующийся и размножающийся внутри фагоцитов, успешно подвергается лизису. Противомикробные препараты в этой композиции служат дополнительным фактором, который способствует уничтожению возбудителя, который в данный момент не локализован в фаголизосомах, а внеклеточно циркулирует в организме. Иммуностимуляторы, низкомолекулярные нуклеиновые кислоты также способствуют повышению неспецифической резистентности организма и в совокупности с производными 4-изопропилтолуен резко повышают эффективность лечения и профилактики бруцеллеза, хотя при индивидуальном применении мало влияют на защиту и санацию организма от возбудителя бруцеллеза.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. В качестве модели воспроизведения экспериментального бруцеллеза были выбраны морские свинки как животные, наиболее чувствительные к этой инфекции. Двадцать морских свинок весом 300-350 г разделили на две группы по 10 голов. Первой группе животных в течение 14 дней вместе с комбикормом скармливали 2-изопропил-5-метилциклогексанол из расчета 0,02 мг в день. Другую контрольную группу кормили одним комбикормом. Через две недели после начала скармливания обе группы животных были заражены вирулентным штаммом бруцелл Brucella abortus 54 в дозе 10 ИД₁₀₀. Свинок первой группы продолжали кормить комбикормом с добавкой еще две недели. Через 40 дней после заражения всех животных убили и провели бактериологическое исследование внутренних органов и лимфоузлов на предмет выявления возбудителя бруцеллеза. Обнаружение культуры хотя бы в одном из объектов исследования рассматривалось как заражение. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 2. Аналогичен примеру 1, но опытным животным дополнительно делали инъекции иммуностимулятора - Байпамун в дозе 0,1 мл с интервалом в 5 дней. В качестве дополнительного контроля была группа свинок, обработанная Байпамуном. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 3. Аналогичен примеру 1, но в рационе животных первой группы вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол использовали 2-изопропил-5-метилфенол из расчета 0,005 мг в день и дополнительно вводили иммуностимулятор - Иммунофор из расчета 10 мг/день. Животным третьей группы скармливали и комбикорм, и иммуностимулятор Иммунофор. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 4. Аналогичен примеру 1, но в рацион опытных животных дополнительно вводили антибиотик тетрациклина гидрохлорид из расчета 0,5 мг/день, а 2-изопропил-5-метилциклогексанол задавали с кормом из расчета 0,05 мг в день. Контролем служила группа, которой в комбикорм вводили тетрациклин гидрохлорид. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 5. Аналогичен примеру 1, но в рацион опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол вводили 1,8 метандиол и дополнительно добавляли антибиотик рифампицин из расчета 0,5 мг/день. Контролем служила группа животных, которой в комбикорм вводили рифампицин. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 6. Аналогичен примеру 1, но в рацион опытных животных дополнительно вводили антибиотик - левомицетин из расчета 0,5 мг/день. Контролем служила группа, в рацион которой добавляли левомицетин. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 7. Аналогичен примеру 1, но в рационе опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол присутствовал 2-изопропил-5-метилфенол и дополнительно вводили сульфаниламидный препарат Бактрим из расчета 0,7 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм вводили Бактрим. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 8. Аналогичен примеру 1, но в рацион опытных животных дополнительно вводили фуразолидон из расчета 0,2 мг/день. Контролем служила группа, которой кроме комбикорма скармливали фуразолидон. Результаты представлены в таблице 1.

Пример 9. Аналогичен примеру 1, но в рацион опытных животных дополнительно вводили аденозин из расчета 0,02 мг/день. Контролем служила группа, которую кормили комбикормом с аденозином. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 10. Аналогичен примеру 1, но в рационе опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол присутствовал 2-изопропил-5-метилфенол и аденозинтрифосфат из расчета 0,02 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм вводили АТФ. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 11. Аналогичен примеру 1, но в рацион опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол вводили 1,8 метандиол и дополнительно аденозиндифосфат из расчета 0,01 мг/день. Контролем служила группа, которой в рацион вместе с комбикормом вводили АДФ. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 12. Аналогичен примеру 1, но в рацион опытных животных дополнительно вводили циклический гуанозин 3,5-монофосфат 0,001 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм вводили цГМФ. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 13. Пятьдесят морских свинок весом 300-350 г разделили на три группы по 10 голов. Первой группе в количестве 20 животных в течение 14 дней вместе с комбикормом скармливали 2-изопропил-5-метилциклогексанол, тетрациклин гидрохлорид, Иммунофор и АДФ. Второй группе (20 голов) вместе с комбикормом скармливали только тетрациклин гидрохлорид, Иммунофор и АДФ. Третью контрольную группу (10 животных) кормили одним комбикормом. Через две недели после начала скармливания все животные были заражены вирулентным штаммом бруцелл Brucella abortus 54 в дозе 20 ИД₁₀₀. Морских свинок продолжали содержать на прежнем рационе еще две недели. Через 40 дней после заражения всех животных убили и провели бактериологическое исследование внутренних органов и лимфоузлов на предмет выявления культуры бруцелл. Обнаружение культуры хотя бы в одном из объектов исследования рассматривалось как заражение. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 14. Аналогичен примеру 13, но животных опытной группы вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол скармливали 2-изопропил-5-метилгексанон. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 15. Аналогичен примеру 13, но животных опытных групп начали кормить комбикормом с добавками за 1 день до заражения. Результаты представлены в таблице 1.

Пример 16. Аналогичен примеру 13, но животных опытных групп начали кормить комбикормом с добавками за 3 дня до экспериментального заражения. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 17. Аналогичен примеру 13, но животных опытных групп начали кормить комбикормом с добавками за 20 дней и вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол в рационе присутствовал 2-изопропил-5-метилфенол. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 1.

Пример 18. Двадцать морских свинок весом 300-350 г заразили вирулентным штаммом бруцелл Brucella abortus 54 в дозе 20 ИД₁₀₀. Через две недели после заражения морских свинок разделили на две группы. Первую группу животных в течение 14 дней кормили комбикормом с добавлением 2-изопропил-5-метилциклогексанол из расчета 0,02 мг в день. Другую контрольную группу кормили одним комбикормом. Через 60 дней после заражения всех животных убили и провели бактериологическое исследование внутренних органов и лимфоузлов на предмет выявления культуры бруцелл. При обнаружении возбудителя бруцеллеза хотя бы в одном из объектов исследования считали, что животное не санировалось от бруцелл после проведенного лечения. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 19. Аналогичен примеру 17, но опытным животным дополнительно делали инъекции иммуностимулятора - Достим в дозе 0,2 мл с интервалом в 5 дней. В качестве дополнительного контроля была группа морских свинок, которым применяли только препарат Достим. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 20. Аналогичен примеру 17, но в рацион животных первой группы вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол присутствовал 2-изопропил-5-метилфенол и дополнительно вводили иммуностимулятор - Иммунофор из расчета 10 мг/день. Животным второй группы скармливали комбикорм и иммуностимулятор - Иммунофор. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 21. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол вводили 1,8-метандиол в дозе 0,004 мг и антибиотик окситетрациклин из расчета 0,5 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм добавляли окситетрациклин в той же дозе. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 22. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных дополнительно вводили антибиотик - рифампицин из расчета 0,5 мг/день. Контролем служила группа животных, которой в комбикорм вводили рифампицин. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 23. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных дополнительно вводили антибиотик левомицетин из расчета 0,5 мг/день. Контролем служила группа животных, в рацион которой вводили левомицетин. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 24. Аналогичен примеру 17, но в рационе опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол присутствовал 2-изопропил-5-метилфенол и сульфаниламидный препарат - Бактрим из расчета 0,7 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм добавляли Бактрим. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 25. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных дополнительно вводили фуразолидон из расчета 0,2 мг/день. Контролем служила группа, которой кроме комбикорма скармливали фуразолидон. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 26. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол, 2-изопропил-5-метилгексанон, 1,8-метандиол-2-изопропил-5-метилциклогексанол добавляли 2-изопропил-5-метилфенол и гуанозин из расчета 0,02 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм вводили гуанозин. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 27. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных вместо 2-изопропил-5-метилциклогексанол вводили 1,8-метандиол и гуанозин монофосфат 0,01 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм добавляли ГМФ. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 28. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных дополнительно вводили гуанозинтрифосфат из расчета 0,002 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм вводили ГТФ. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 29. Аналогичен примеру 17, но в рацион опытных животных дополнительно вводили циклический аденозин 3,5 монофосфат из расчета 0,001 мг/день. Контролем служила группа, которой в комбикорм вводили цАМФ. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 30. Пятьдесят морских свинок весом 300-350 г заразили вирулентным штаммом бруцелл Brucella abortus 54 в дозе 20 ИД₁₀₀. Через две недели после заражения морских свинок разделили на три группы. Первую группу 20 животных в течение 14 дней кормили комбикормом с добавлением 2-изопропил-5-метилфенол, окситетрациклина, Иммунофора и цГМФ. Второй группе 20 животным вместе с комбикормом скармливали только окситетрациклин, Иммунофор и цГМФ. Третью контрольную группу 10 морских свинок кормили одним комбикормом. Через 60 дней после заражения всех животных убили и провели бактериологическое исследование внутренних органов и лимфоузлов на предмет выявления культуры бруцелл. Животное, в органах которого обнаруживали хотя бы одну культуру бруцелл, рассматривалось как больное. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 31. Аналогичен примеру 27, но животных опытных групп кормили после заражения комбикормом с добавками в течение 4 дней. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 32. Аналогичен примеру 27, но животных опытных групп в течение 60 дней после заражения кормили комбикормом, где вместо 2-изопропил-5-метилфенола присутствовал 2-изопропил-5-метилгексанон. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 2.

Пример 33. В овцеводческом хозяйстве, неблагополучном по бруцеллезу, выделили суягных овцематок, которых разделили на 10 гуртов. Овцематкам первого гурта (150 голов) за неделю до начала окота стали добавлять в рацион Иммунофор, тетрациклин гидрохлорид, цГМФ и 1,8-метандиол. Животным второго гурта (180 голов) в корм добавляли Иммунофор, тетрациклин гидрохлорид, цГМФ. Животным третьего гурта (100 голов) - Иммунофор, тетрациклин гидрохлорид. Животным четвертого гурта (100 голов) - тетрациклин гидрохлорид, цГМФ. Животным пятого гурта (95 голов) - тетрациклин гидрохлорид. Животным шестого гурта (120 голов) - Иммунофор. Животным седьмого гурта (78 голов) - цГМФ. Животным восьмого гурта (140 голов) - 1,8-метандиол. Животным девятого гурта (94 головы) - 1,8-метандиол и Иммунофор. Десятый гурт (180 голов) служил контролем. После окончания окотной компании учитывали количество абортировавших плодов и количество овцематок, давших положительные результаты в серологических исследованиях на бруцеллез по сравнению с доокотным периодом. Результаты представлены в таблице 3. Из результатов проведенного опыта видно, что в результате применения препаратов в первом гурте было отмечено снижение абортов, а также количество реагирующих на бруцеллез животных после проведения окотной компании по сравнению с десятым контрольным гуртом. Другие комбинации препаратов (гурт номер 2, 8 и 9) также дали снижение как числа абортов, так и числа вновь заразившихся овцематок.

Пример 34. В неблагополучном по бруцеллезу хозяйстве все поголовье овец разделили на две равные части (по 800 голов). За две недели до начала окотной компании (период наибольшего риска перезаражения животных) одной группе овец стали добавлять в суточный рацион 2-изопропил-5-метилциклогексанол из расчета 15 мг на голову в сутки, Иммунофор и АМФ. Кормили животных этими препаратами в течение всей окотной компании (20 дней). Вторая группа овец оставалась в качестве контроля (животных кормили обычными кормами). Животные двух групп между собой не контактировали. В результате в опытной группе наблюдалось только 19 абортов и небруцеллезной этиологии. В контрольной группе было 120 абортов. Причем из 24 аборт плодов была выделена культура бруцелл.

Таким образом, предлагаемый способ профилактики и лечения бруцеллеза способен предотвращать заражение организма вирулентными штаммами бруцелл, а заразившихся особей освобождать от присутствия возбудителя бруцеллеза. Данный способ может найти применение для профилактики бруцеллеза у сельскохозяйственных животных в периоды наиболее возможного заражения бруцеллезом (окотная компания у овец, отел у крупного рогатого скота и т.д.), у людей в периоды обслуживания больных животных (стрижка овец, родовспоможение при отеле и окоте, при работе с вирулентными культурами бруцелл). Для лечения бруцеллеза данный способ может применяться при выявлении больного скота и невозможности сдать его на убой, что значительно уменьшит возможность дальнейшего распространения инфекции среди животных, у людей при остром бруцеллезе или непосредственно после контакта с инфицированным материалом, а также при хроническом течении бруцеллеза.

Литература

1. Вершилова П.А., Чернышева М.И., Князева Э.Н. // Патогенез и иммунология бруцеллеза; - М.: Медицина, 1974 г., стр. 240-255.

2. Губина Е.А., Грекова Н.А., Середа Г.Н. // Иммуноморфологический ответ организма животного при многократном введении бруцеллезной вакцины. Проблемы особо опасных инфекций; - 1971. №1, - стр. 110-114.

3. Орлова B.C., Касымова Х.К. // Состояние естественного иммунитета у людей, привитых многократно живой противобруцеллезной вакциной ВА-19. Бруцеллез в Казахстане; Алма-Ата, 1970, - стр. 110-114.

4. Джалилов К.Д., Имомолиев У.Н. // Бруцеллез у детей; Ташкент, Медицина, УзССР, 1990 г., стр. 95-101.

5. Вершилова П.А. // Бруцеллез (организационно-методические материалы); - М.: Медицина, 1968 г., стр. 159-168.

6. Толоконская Н.П., Букин В.Н. // Теоретические и практические вопросы профилактики, диагностики и лечения наиболее распространенных заболеваний Сибири и Дальнего Востока. Тез. докладов Новосибирск; 1983 г., стр. 148-149.

7. Хаев А.Е., Отараева Б.И. // Экспериментально-клинические параллели при бруцеллезе в процессе лечения малыми дозами вакцины // Второй Всероссийский съезд инфекционистов. - М. - Кемерово, 1983, - стр. 379-380.

8. Белозеров Е.С.// Бруцеллез, - М.: Медицина, 1985, стр. 142-178.

9. Жуманбаев К.А. Лечение зимозаном бруцеллеза // Клиническое применение зимозана и изучение механизма его действия: Сб. научных статей. - Рига, 1982 г., - стр. 116-118.

Изобретение относится к ветеринарии и медицине, а именно к лечению и профилактике бруцеллезной инфекции. В качестве лечебного и профилактического средства используют производные 4-изопропилтолуена, которые вводят в организм перорально ежедневно в течение 2-60 дней. С профилактической целью его применяют за 2-10 дней до начала периода наибольшего риска заражения (предродовой и родовой период, период возможного контакта с инфицированным материалом или культурой бруцелл) и в течение этого периода. Производные 4-изопропилтолуена вводят совместно с иммуностимуляторами, низкомолекулярными нуклеиновыми кислотами и противомикробными препаратами. Использование производных 4-изопропилтолуена повышает эффективность лечения и профилактики бруцеллеза. 2 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Способ профилактики и лечения бруцеллеза, включающий введение противобруцеллезного препарата, отличающийся тем, что в качестве противобруцеллезного препарата используют производное 4-изопропилтолуена, введение которого осуществляют перорально в течение 2-60 дней.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно вводят иммуностимулятор, и/или противомикробные препараты, и/или низкомолекулярные нуклеиновые кислоты.3. Способ по любому из пп.1 и 2, отличающийся тем, что профилактику проводят за 2-10 дней до начала периода наибольшего риска заражения и в период наибольшего риска заражения.