СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ РОТОГЛОТКИ У ДЕТЕЙ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/559 

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может найти применение в лечебно-профилактических учреждениях здравоохранения для прогнозирования тяжести течения инфекционных заболеваний ротоглотки у детей.

Известно, что входными воротами инфекционных заболеваний ротоглотки является слизистая ротоглотки. Микроорганизмы (бактерии, вирусы) фиксируются на клетках тканей, размножаются и в процессе жизнедеятельности продуцируют токсические вещества, оказывающие как местное, так и общее воздействие, обусловливающее все явления патологического процесса.

Начальный этап инфекционного процесса при инфекционных заболеваниях ротоглотки характеризуется специфическим взаимодействием возбудителя с клетками хозяина. Секреторный иммуноглобулин A (sIgA) - основной иммуноглобулин секрета слизистых, блокирующий адгезию микроорганизмов к эпителиоцитам, тем самым обеспечивая локальную иммунную защиту. Количественная характеристика sIgA позволяет оценить состояние барьерных функций слизистых вместе вегетации, персистенции микроба и установить прогностические критерии течения инфекционного процесса.

Проведенный поиск по научно-медицинской и патентной литературе выявил различные способы диагностики дифтерии. Известен “Способ экспресс-диагностики дифтерии у детей” - патент 2129276 Россия, МПК G 01 N 33/53 /Мельникова А.В., Железникова Г.И., Иванова В.В./, опубл. 20.04.99 бюл. №11 путем выявления дифтерийного токсина в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Недостатком этого метода является использование для исследования сыворотки крови, что требует проведения внутривенных манипуляций.

Известен “Способ определения течения токсической дифтерии” - патент 2135998 Россия, МПК G 01 N 33/52 /Амбалов Ю.М., Пополитова C.Б., Усаткин А.В./, опубл. 27.08.99 бюл. №24 путем оценки биохимических показателей крови. Недостатки этого метода заключаются в том, что материалом для исследования служит плазма крови, sIgA. Метод, основанный на определении активности ферментов, требует особого режима проведения исследования, от которого зависит качество полученных результатов.

Наиболее близким способом прогнозирования формы тяжести дифтерии является “Способ прогнозирования течения дифтерийной инфекции у детей” - патент 2146055 Россия, МПК G 01 N 33/569 / Иванова В.В., Быценко Д.С., Кветная А.С./, опубл. 27.02.2000 БИПМ №6. Этот способ взят в качестве прототипа. Способ заключается в определении микробной резистентности слизистой фарингеального эпителия с помощью выявления секреторного иммуноглобулина А на основе реакции иммунофлюоресценции и определения чувствительности эпителиоцитов к адгезии микробных клеток. Недостатком метода является его сложность, обусловленная тем, что определение проводят на эпителиоцитах в брашбиоптатах слизистой полости рта. Для исследования используют тест-штаммы C.diphtheriae, для выращивания которых требуется время. Метод дорогостоящий, т.к. для его обеспечения необходимо оборудование: щеточка от эндоскопа, набор реактивов для хемилюминесценции и иммуноферментной диагностики вирусных и бактериальных инфекций.

Целью изобретения является упрощение, ускорение, повышение точности прогнозирования тяжести течения инфекционных заболеваний ротоглотки у детей.

Цель достигается путем выявления и количественной характеристики sIgA в слюне методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини, основанным на измерении диаметра кольца преципитации, образующегося при внесении исследуемого препарата в лунки, вырезанные в слое агара, в котором предварительно диспергирована моноспецифическая антисыворотка.

Способ осуществляется следующим образом: При первичном осмотре ребенок прополаскивает полость рта 50 мл стерильной дистиллированной воды, после чего в течение 3 мин собирают слюну с помощью автоматической пипетки с наконечником. Слюна собирается в микропробирки типа “Эппендорф”. На пластины 7×10 см помещают латунную П-образную рамку толщиной 1 мм, а сверху - вторую стеклянную пластину, смазанную гидрофобной жидкостью. Пластины скрепляют зажимами и в пространство между пластинами заливают 6 мл приготовленной смеси агара с антисывороткой. После застывания смеси зажимы снимают, рамку и стеклянную пластину убирают и в слое агара пробойником выбивают лунки диаметром 2 мм на расстоянии 15 мм одна от другой. В лунки микрошприцем вносят по 2 мкл стандарта - очищенного секреторного IgA с концентрацией белка 2 мг/мл, в разведениях 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 и исследуемые секреты. Пластины инкубируют во влажной камере 24 часа при комнатной температуре +20°С. По окончании инкубации пластины промывают 2 дня физиологическим раствором и красят амидочерным. Диаметр колец преципитации измеряют с точностью до 0,1 мм циркулем-измерителем, шкалой с нониусом или специальной линейкой, выпускаемой фирмой Берингверке. По миллиметровой бумаге строят калибровочную кривую, откладывая на оси ординат квадраты радиусов колец преципитации в мм, полученные с разными разведениями стандарта, а на оси абсцисс - соответствующие этим кольцам концентрации стандарта - секреторного IgA в мг/мл. Для правильной трактовки полученных результатов каждый секрет исследуют параллельно и с сывороткой против сывороточного IgA, используя тот же стандарт. При сопоставлении результатов, полученных с этими двумя антисыворотками, судят об общем уровне IgA в секрете (величина, определяемая с сывороткой против сывороточного IgA), об уровне секреторного IgA (величина, определяемая с антисывороткой против секреторного IgA) и об уровне сывороточного IgA (разница между указанными величинами).

При содержании sIgA в слюне ниже показателей у здоровых детей - 0,4+0,05 - прогнозируют тяжелое течение инфекционных заболеваний ротоглотки.

Пример 1. Больной К., 8 лет, поступил в детское инфекционное отделение с предварительным диагнозом: "Дифтерия ротоглотки". При поступлении в слюне определялось 0,44 мг/мл sIgA, что выше показателей у здоровых детей. Окончательный диагноз: "Локализованная дифтерия ротоглотки, легкая форма".

Пример 2. Больной А., 10 лет, поступил в детское инфекционное отделение с предварительным диагнозом: "Дифтерия ротоглотки, токсическая форма". В слюне уровень sIgA составил 0,15 мг/мл” что вдвое ниже показателей у здоровых детей. Окончательный диагноз: "Дифтерия ротоглотки, токсическая 1 степени, тяжелая форма. Осложнение: миокардит, НК 1 ст.".

Пример 3. Больная Ю., 8 лет, поступила в детское инфекционное отделение с предварительным диагнозом: "Контактная с больным дифтерией". В слюне уровень sIgA составил 0,53 мг/мл, что намного выше показателей у здоровых детей. Окончательный диагноз: "Бактерионосительство токсигенной дифтерийной палочки", что свидетельствует о благоприятном течении инфекции.

Пример 4. Больной Д., 7 лет, поступил в детское инфекционное отделение с предварительным диагнозом: "Лакунарная ангина". В слюне уровень sIgA составил 0,27 мг/мл, что ниже показателей у здоровых детей. Окончательный диагноз: "Лакунарная ангина стрептококковой этиологии, тяжелая форма".

Пример 5. Больная С., 5 лет, поступила в детское инфекционное отделение с предварительным диагнозом: "ОРВИ, лакунарная ангина, лимфаденит". В слюне уровень sIgA составил 0,23 мг/мл, что значительно ниже показателей у здоровых детей. Окончательный диагноз: инфекционный мононуклеоз Эпштейн-Барр этиологии, тяжелая форма".

Предложенный способ апробирован в 6 детском инфекционном отделении городской больницы №1 г. Ростова-на-Дону на 133 больных различными формами дифтерии ротоглотки и 10 бактерионосителях. Результаты изложены в таблицах 1 и 2:

Как видно из данных таблиц, у носителей наблюдаются самые высокие показатели sIgA в слюне, превышающие показатели у здоровых детей. При локализованных формах дифтерии ротоглотки, являющихся легкими формами инфекции, содержание sIgA в слюне такое же, что и у здоровых детей (нет достоверной разницы). При тяжелых субтоксических, токсических формах содержание sIgA значительно ниже показателей у здоровых детей. Существенные отличия отмечаются в младшей возрастной группе (3-7 лет) (p<0,01). При комбинированной форме дифтерии ротоглотки и гортани содержание sIgA в слюне резко снижено, особенно у детей 7-14 лет, по сравнению с нормальными показателями (p<0,01). Таким образом, чем тяжелее протекает инфекция, тем ниже показатели sIgA в слюне.

Преимущества предложенного способа заключаются в том, что материалом исследования является слюна, в простоте ее забора. Способ исключает длительный подготовительный этап, связанный с живой культурой микроорганизмов, не требует специального режима для исследования, жестких правил септики и антисептики. Метод количественный, отличающийся точностью.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования тяжести течения инфекционных заболеваний ротоглотки у детей. Сущность изобретения состоит в определении методом радиальной иммунодиффузии в геле количества секреторного иммуноглобулина А в слюне и значения ниже 0,4±0,05 мг/мл свидетельствуют о тяжелом течении заболевания. Техническим результатом является упрощение, ускорение, повышение точности прогнозирования тяжести течения инфекционных заболеваний ротоглотки у детей. 2 табл.

Способ прогнозирования тяжести течения инфекционных заболеваний ротоглотки у детей, отличающийся тем, что методом радиальной иммунодиффузии в геле определяют количество секреторного иммуноглобулина А в слюне и при значениях ниже 0,4±0,05 мг/мл прогнозируют тяжелое течение заболевания.