СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ ОСНОВЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕД Российский патент 2004 года по МПК C12N1/20 A23J1/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования широкого спектра микроорганизмов и для приготовления микробиологических сред различного целевого назначения.

Известно, что питательными основами большинства микробиологических сред являются белковые гидролизаты, содержащие комплекс веществ необходимые для нормального развития микробной популяции (1, 2, 4, 5).

Известны способы получения питательных основ путем ферментативного гидролиза белкового сырья.

Недостатками указанных способов являются использование в качестве сырья дорогостоящих продуктов, трудоемкость процесса, большое количество технологических операций (6, 7, 8, 9, 10, 11, 12).

Наиболее близким к предлагаемому по совокупности признаков и достигаемому эффекту является способ получения ферментативного гидролизата из рыбы, предусматривающий измельчение рыбы, смешивание с водой в соотношении 1:2-1, нагрев до 40-45°С, введение в полученную суспензию протеолитического препарата - протосубтилина Г3х, ферментативный гидролиз в течение от 0,5 до 2,5 ч, фильтрацию и его последующие высушивание (SU 1559466, А 23 J 1/04, 27.10.87) (3).

Недостатками способа являются трудоемкость процесса предварительной подготовки сырья и гидролизу, длительность процесса более 20 суток, жидкая форма препарата, создающая у потребителя существенные трудности при использовании и хранении.

Предлагаемым изобретением решаются задачи упрощения, сокращения длительности процесса получения питательных основ и улучшения потребительского свойства препаратов.

Для достижения названного технического результата в предлагаемом способе рыбу (например, кильку минтай, анчоус) или рыбную муку смешивают с водой, смесь подщелачивают до рН 7,8-8,2 в случае использования в качестве сырья рыбной муки, суспензию рыбы или рыбной муки нагревают до температуры 48-50°С и ферментируют с помощью поджелудочной железы или панкреатина в течение 3-6 ч при указанной температуре. После чего осуществляют очистку ферментализата сначала при рН 3,8-4,2, затем при рН 7,8-8,2 с последующим кипячением при каждом из указанных значений рН в течение 10-15 мин и фильтрацией.

Очищенный ферментализат концентрируют до содержания сухих веществ 12-60% и высушивают известными способами распылением, пеносушкой. К сухому препарату добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в готовом препарате 32-40% и перемешивают или к концентрированному гидролизату добавляют хлористый натрий согласно расчету и высушивают.

Для получения агаризованной основы к сухому препарату добавляют агар и перемешивают или концентрированный гидролизат смешивают с агаром, гранулируют, гранулы высушивают в псевдокипящем слое, размалывают, добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в готовом препарате 20-24% и перемешивают.

Отличительные признаки предлагаемого способа от указанного выше известного, наиболее близкого к нему, заключаются в том, что он не требует выполнения таких трудоемких операций как очистка рыбы от внутренностей, проваривание, отделение рыбы от отвара, смешивание измельченной рыбы с отваром, охлаждение, консервация гидролизата хлороформом, отстаивание в течение 10 суток в холодном помещении, осветление гидролизата с помощью яичного белка при рН 5,5 и вторичная консервация хлороформом. Кроме того, по предлагаемому способу очистку гидролизата осуществляют при различных значениях рН сначала при рН 3,8-4,2, а затем при рН 7,8-8,2 с последующим кипячением при каждом из указанных значений рН и фильтрацией. Такая обработка способствует полному удалению остаточных белков, сокращает время очистки, не требует использования яичного белка для очистки, обеспечивая при этом высокую прозрачность гидролизата. Вышеперечисленные отличительные признаки позволяют сократить процесс гидролиза сырья более чем с 20 суток по известному способу, до 20 ч по предлагаемому, а сухая форма препаратов обеспечивает стандартность, удобство при использовании и стабильность при хранении.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1. К 100 кг фарша рыбы добавляют 200 л воды, смесь перемешивают, нагревают до 48-50°С, вносят 7,0 кг поджелудочной железы или 1,2 кг панкреатина, ферментируют в течение 3-6 ч при указанной температуре. После окончания гидролиза суспензию подкисляют соляной кислотой до рН 3,8-4,2 или добавляют хлористый кальций, кипятят 10-20 мин, фильтруют, фильтрат подщелачивают 30% раствором NaOH до рН 7,8-8,2, кипятят и фильтруют. Фильтрат концентрируют до 12-60% сухих веществ и высушивают, например, с помощью распылительной сушки при температуре на входе в сушку 160-180°С, на выходе - 90-100°С.

К сухому продукту добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в готовом препарате 32-40% и перемешивают.

Пример 2. К концентрированному гидролизату добавляют хлористый натрий согласно вышеуказанному расчету, далее согласно примеру 1. Пример 3. К концентрированному гидролизату добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в готовом препарате 20-24%, высушивают, добавляют агар и перемешивают.

Пример 4. Концентрированный гидролизат взбивают в пену и высушивают на поверхности барабана сушильно-дробильного аппарата СДА-250. К сухому продукту добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в готовом препарате 32-40% и перемешивают.

Пример 5. К концентрированному гидролизату добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в сухом препарате 10-20%, взбивают в пену, высушивают. К сухому продукту добавляют хлористый натрий до конечной концентрации его в готовом препарате 32-40% и перемешивают.

Пример 6. К концентрированному гидролизату добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в готовом препарате 20-24%, взбивают в пену, высушивают, добавляют агар и перемешивают.

Пример 7. Концентрированный гидролизат нагревают до 40-60°С, смешивают с агаром в соотношении 3:1, смесь гранулируют, гранулы высушивают в псевдокипящем слое в сушильном аппарате СП-100 при 60-70°С в течение 1-1,5 ч, гранулы размалывают в шаровой машине. К сухому продукту добавляют хлористый натрий из расчета содержания его в готовом препарате 20-24% и перемешивают. Полученный по примерам 1,2,4,5 сухой питательный бульон содержит 4,2±0,4% аминного азота, 8,5±0,5% общего азота, 48±5% пептонов, 0,6±0,1% триптофана, 37±2% хлоридов, рН 1% раствора 7,2±0,2.

Полученный по примерам 3,6,7 сухой питательный агар содержит 2,4±0,5% аминного азота, 22±2% хлоридов, 5,0±0,3% общего азота, 0,25±0,2% триптофана, прочность студня 350±25, рН 73±0,2. Питательный бульон и питательный агар являются питательными основами для получения многокомпонентных сред различного назначения.

Пример 8. В мельницу-смеситель загружают 2,5 кг питательного агара, 1 кг лактозы, 0,023 кг основного фуксина, 0,083 кг сульфита натрия, 0,048 кг натрия фосфата, 0,003 кг карбоната натрия, смесь перемешивают в течение 2,5-3,0 ч. Полученная среда Эндо предназначена для выделения энтеробактерий из питьевых и сточных вод, пищевых продуктов, клинического материала и других объектов внешней среды.

Пример 9. В мельницу-смеситель загружают 3 кг питательного агара, 1 кг лактозы, 0,063 кг эозина, 0,0075 кг метиленовой сини, 0,0064 кг карбоната натрия, смесь перемешивают. Полученная среда Левина предназначена для выделения и дифференциации энтеробактерий и для выделения коагулазоположительных стафилококков.

Пример 10. В мельницу-смеситель загружают 0,8 кг питательного бульона, 0,8 кг пептона, 0,06 кг додецилсульфата натрия, 1 кг лактозы, 0,005 кг бромтимолового синего, 0,03 кг карбоната натрия, смесь перемешивают в мельнице-смесителе. Полученная среда Кода предназначена для выделения и дифференциации энтеробактерий по признаку ферментации лактозы при санитарном обследовании пищевых продуктов и объектов внешней среды.

Пример 11. Отличается от примера 1 тем, что в смесь фарша рыбы и воды вносят 8,5 кг поджелудочной железы или 1,5 кг панкреатина. Далее согласно примерам 1-9.

Пример 12. Отличается от примера 1,9 тем, что в смесь фарша рыбы и воды вносят 10 кг поджелудочной железы или 1,8 кг панкреатина. Далее согласно примерам 1-9.

Пример 13. Отличается от примера 1 тем, что к 25 кг рыбной муки по ГОСТу 2116-82 добавляют 150 л воды, смесь перемешивают, подщелачивают едким натрием до рН 7,8-8,0, вносят 6 кг поджелудочной железы или 0,8 кг панкреатина. Далее согласно примерам 1-9.

Пример 14. Отличается от 1,13 тем, что к 25 кг рыбной муки добавляют 175 л воды, смесь перемешивают, подщелачивают до рН 7,8-8,0, вносят 7 кг поджелудочной железы или 1,0 кг панкреатина. Далее согласно примерам 1-9.

Пример 15. Отличается от 1,13,14 тем, что к 25 кг рыбной муки добавляют 200 л воды, смесь перемешивают, подщелачивают до рН 7,8-8,0, вносят 8 кг поджелудочной железы или 1,2 кг панкреатина. Далее согласно примерам 1-9.

Бактериологический контроль качества полученных питательных основ и сред проводят согласно фармакопейным статьям: ФС 42-224 ВС-88 - сухой питательный бульон, ФС 42-188ВС - сухой питательный агар, ФС 42-53-ВС-88 - среда Левина, ФС 42-186-88 - среда Эндо, ФС 42-189 ВС-88 - среда Кода.

Бактериологические испытания полученных препаратов показали их полное соответствие требованием вышеуказанных фармакопейных статей (табл. 1,2,3,4,5).

Предлагаемый способ прост в выполнении, не требует дополнительных затрат, позволяет получать высококачественные и дешевые питательные основы, а сухая форма препаратов обеспечивает стандартность, удобство при использовании и хранении.

Способ легко воспроизводим и может быть внедрен на предприятиях, выпускающих питательные среды.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ

1. А.П. Красильников Микробиологический словарь-справочник. Минск, 1986, с.232-233.

2. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней. Под ред. Н.Н.Жукова-Вережникова, Медиз-Москва, 1962, том 1, с.342-354.

3. Там же, с.351 (прототип).

4. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям. Под ред. Л.Г. Смирновой, Медиз, 1960, с.732-733.

5. The Oxoid Manual Fith Edition, 1982, s.237-244.

6. Способ изготовления гидролизной питательной среды // Авторское свид. №171088, Кл. 30 К, опубл. 11.05.65. Бюллетень №10.

7. Способ производства питательной среды // Авторское свид. №232188, С 12 К, опубл. 12.68г. Бюллетень №1 за 1969 г.

8. Основа для выращивания микроорганизмов // Авторское свид. №548624, С 12 К 1/06, опубл. 28.02.77 г. Бюллетень №8.

9. Способ получения белкового гидролизата // Авторское свид. №562284, С 12 К1/06, опубл. 25.06.77 г. Бюллетень №23.

10. Способ получения питательной основы // Авторское свид. №662583, С 12 К 1/06, опубл. 15.05.79 г. Бюллетень №18.

11. Способ получения питательной основы // Авторское свид. №742463, С 12 К 1/06, опубл. 15.03.78 г. Бюллетень №21.

12. Способ получения питательной основы микробиологических сред // Авторское свид. №1222676, С 12 К 1/06.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для культивирования широкого спектра микроорганизмов и для приготовления микробиологических сред различного целевого назначения. При осуществлении изобретения рыбу или рыбную муку смешивают с водой и ферментируют при 48-50^оC с помощью поджелудочной железы или панкреатина в течение 3-6 ч при указанной температуре. Ферментолизат очищают сначала при pH-3,8-4,2, затем при pH-7,8-8,2, кипятят при каждом из указанных значений в течение 10-20 мин, фильтруют, концентрируют, высушивают. Предлагаемый способ сокращает длительность процесса, позволяет получать высококачественные питательные основы, а сухая форма препаратов обеспечивает стандартность, удобство при пользовании и хранении. 5 табл.

Способ получения питательной основы микробиологических сред, заключающийся в том, что рыбу или рыбную муку смешивают с водой в соотношении 1:2 или 1:6-8 соответственно, полученную суспензию подщелачивают до рН 7,8-8,2 в случае использования рыбной муки, нагрев суспензии ведут до 48-50°С, в качестве ферментного препарата используют поджелудочную железу в количестве 7,0-32% или панкреатин в количестве 1,2-4,8% от массы рыбного сырья, ферментативный гидролиз ведут в течение 3-6 ч, затем проводят очистку ферментолизата сначала при рН 3,8-4,2, затем при рН 7,8-8,2, кипятят при каждом из указанных значений в течение 10-20 мин, фильтруют, концентрируют до содержания сухих веществ 12-60% и высушивают.